保健室情人范文
時間:2023-03-18 07:10:45
導語:如何才能寫好一篇保健室情人,這就需要搜集整理更多的資料和文獻,歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文,供你借鑒。
篇1
人們對服用藥物一般都十分謹慎,但是對于接納保健品就寬容多了。西地那非(萬艾可、偉哥)為處方藥成分,不能隨意服用,許多人都知道,也非常注意,于是每感力不從心時,便徑直投入了性保健品的懷抱。孰不知,這很可能是“自入虎穴”。
濫加處方成分顯效
為了顯示效果、搶占市場,許多不法廠商會偷偷地將處方藥成分西地那非、罌粟鹼、性激素等加入性保健品之中。不知情的男性朋友們放心服用后,很可能會出現不良反應。
據權威專家透露,目前國內聲稱能提高的保健食品中,80%~90%都非法摻有西地那非。西地那非可促使海綿體充血、膨脹,堅硬,從而改善障礙。但它也存有副作用,如影響血壓,誘發心臟異常,引起一過性的視覺異常,等。因此,臨床上患有視網膜病變、青光眼等眼疾的男性不能使用。不能與硝酸鹽等藥物同時使用。有嚴重心臟病、心力衰竭、心?;蚰X中風(半年內曾發生過)、血壓忽高忽低的患者,本身就不適宜過性生活,擅自服用,會引起心肌梗死甚至死亡。
萬能保健品多無能
不少性保健品都冠以“壯陽養腎”“延時”等奇效,甚至稱“有病治病,無病保養”,慫恿患者長期食用,如此“萬能”的宣傳著實是無稽之談。
筆者總結了一下,“萬能”保健品通常有如下特點:國外研制進口,歐美家喻戶曉,市場占領額龐大,等??陀^地說,這些保健品加入中藥成分以滋陰補腎,還是有一定功效的,有些朋友服用后確實性能力有所提高。但追根溯源,這些患者可能原本就是有些腎虛,若到醫院請專業醫生對癥用藥,往往十多元就可藥到病除。除此以外,若談“萬能”,諒它也沒多大“能耐”。
盲目進補于事無補
在醫院男科中,有這樣一個發人深思的現象:許多患者在進補后,病情反而越來越嚴重。這是因為男性障礙分陽虛陰虛,而目前市場所售的男性保健品中,幾乎清一色都只強調壯陽的功效。如不分青紅皂白,擅自購買服用,危害極大。男性障礙屬陰虛者,需服用六味地黃丸等滋陰藥物來調養,一味壯陽只能是“拔苗助長”。對于心血管病、糖尿病、抑郁癥患者,未經醫生指導亂用壯陽藥,則可能出現生命危險。
另外,民間流傳“吃啥補啥”的說法,認為吃“鞭”能提高男性性能力,但事實上,盲目喝鹿鞭酒或者虎鞭酒并不都能解決問題。有資料稱,活體雄性動物的性器官的確含有相當數量的雄性荷爾蒙,但經過加熱烹煮和胃液消化等程序后,這些物質幾乎遺失殆盡,不會對身體產生哪怕是一丁點兒的影響。
使用需由醫生指導
面對目前部分廠商大玩“批準文號”游戲,以假文號、無文號糊弄消費者,或者是雖有正規文號卻非法宣傳等現象,消費者必須清醒地認識:性保健品具有特定保健功能,適宜于特定人群,具調節機體功能,不具有治療疾病的作用。
在選用上也需極其慎重:首先了解自己的身體情況,到正規醫院全面體檢,明確減退的原因,由醫生決定該采用什么方法治療,絕不可偏聽廣告。如果需要服用保健品,應該在醫生指導下在正規醫院藥房或藥店選購。服用時要從小劑量開始,服用過程中嚴密觀察,發現異常反應(包括那些“欣快異常”的變化),要及時告知醫生,避免成癮和盲目加量。此外,購買任何保健品都要索取正規發票,服用后要保留一定的樣品,以備必要時送檢化驗,作為法律依據。
新聞鏈接:
篇2
一、報名時間
1.網上報名時間:8月29日—9月12日;
2.現場確認時間:9月6—14日(周六、日除外)。
二、報名方式
2018年我市成人高考的報名方式為網上預報名和現場確認,網上報名網址:
⑴重慶市教育考試院網站(cqksy.cn);
⑵重慶招考信息網(cqzk.com.cn)。
三、網上預報名
網上報名考生須首先登錄報名網頁,進入預報名流程:
1.如實、準確填報本人基本信息;
2.上傳本人第二代《身份證》正反面圖片和近期免冠正面照片;
3.慎重、準確完成志愿信息填報;
4.考生預報名信息提交審核;
5.考生預報名信息審核合格后,完成網上繳納報名費。
各區縣招考機構要高度重視和積極應對網上審核預報名信息,要指派專人對網上報名考生提交的信息進行審核。網上審核的審結時間為24小時,審核內容如下:
⑴考生正面免冠登記照,是否清晰可辨;
⑵考生《身份證》正、反面圖片,是否清晰可辨;
⑶以上兩項是否為同一人;
⑷網上填報的個人基本信息與身份證信息是否一致。
若審核結果不合格,則須注明理由并發回,由考生重新提交,直至審核合格;區縣招生考試機構必須及時、準確完成審核,確??忌谔峤恍畔⒑?4小時之內,獲得網上審核結果。
考生信息審核合格,方可進行網上交納報名考試費。網上繳費僅限使用“支付寶”,考生須按系統提示完成有關繳費操作。
篇3
根據《自治區質監局辦公室關于開展 2013年認證行政執法專項監督檢查的通知》文件要求,在市局系統認真組織開展了認證行政執法自查工作,現將自查情況報告如下:
一、加強組織領導、科學籌劃部署
接到開展認證行政執法自查工作通知后,我局高度重視,及時召開了專題會議,組織法制與監察科、計量與認證監管科和稽查隊相關人員認真學習文件要求,組織成立了認證行政執法檢查小組,安排部署自查工作。自查工作中,緊緊圍繞認證執法監管體系、認證行政執法和認證行政處罰案卷重點內容,認真進行自查。通過全面自查,有力排查我市在認證執法中存在的不足和問題,規范認證行政執法行為,提高依法監管和行政執法水平,推動認證行政執法責任制的落實。
二、健全認證執法體系,完善執法工作機制
(一)認證監管機構設置規范完善
__市局認證行政執法工作涉及法制與監察科、計量與認證監管科和稽查隊三個工作部門,法制與監察科負責認證執法案卷審理審查、認證執法人員管理培訓和執法監督工作。計量與認證監管科負責獲證企業的日常監管?;殛犡撠熣J證違法行為的查處工作。三部門聯動做到監管信息暢通、運行縝密和權責分明。三縣(市)局認證行政執法工作設置在稽查隊,由專人負責,辦公室法制監督,有力的保障了認證監管中規范執法、嚴格執法,責任執法。
(二)強化部門聯動,做到職責明確。
__市局與三縣(市)局建立了區域合作機制,案件查處通報制度,重大處罰案件備案制度和行政執法責任制等制度。在監管中充分利用認證執法監管信息系統,建立和更新轄區認證獲證企業信息。對獲證企業實行巡查制度,計量與認證監管科對市區獲證企業進行日常監管,發現企業認證違法行為,及時通報稽查隊,并配合做好查處工作。對于群眾舉報的案源,稽查隊均能做到實地核查、及時查處。在監管中執行《__市行政執法監督與行政執法過錯責任追究辦法》,將執法監管責任分解落實到每個崗位和執法人員,嚴格規范行政執法行為,保證按照統一尺度開展執法工作。
篇4
一、報名時間
1.網上報名時間:8月29日—9月12日;
2.現場確認時間:9月6—14日(周六、日除外)。
二、報名方式
2018年我市成人高考的報名方式為網上預報名和現場確認,網上報名網址:
⑴重慶市教育考試院網站(cqksy.cn);
⑵重慶招考信息網(cqzk.com.cn)。
三、網上預報名
網上報名考生須首先登錄報名網頁,進入預報名流程:
1.如實、準確填報本人基本信息;
2.上傳本人第二代《身份證》正反面圖片和近期免冠正面照片;
3.慎重、準確完成志愿信息填報;
4.考生預報名信息提交審核;
5.考生預報名信息審核合格后,完成網上繳納報名費。
各區縣招考機構要高度重視和積極應對網上審核預報名信息,要指派專人對網上報名考生提交的信息進行審核。網上審核的審結時間為24小時,審核內容如下:
⑴考生正面免冠登記照,是否清晰可辨;
⑵考生《身份證》正、反面圖片,是否清晰可辨;
⑶以上兩項是否為同一人;
⑷網上填報的個人基本信息與身份證信息是否一致。
若審核結果不合格,則須注明理由并發回,由考生重新提交,直至審核合格;區縣招生考試機構必須及時、準確完成審核,確保考生在提交信息后24小時之內,獲得網上審核結果。
考生信息審核合格,方可進行網上交納報名考試費。網上繳費僅限使用“支付寶”,考生須按系統提示完成有關繳費操作。
篇5
當前主流觀點認為必須建立專門的情報部門與情報人員。但是,如何設置沒有形成統一的意見,最高檢也沒有規范性或政策性指導意見。有的認為應當將情報部門設置在舉報中心;有的認為在反貪部門設置專職情報人員;有的則認為抽調反貪、舉報中心、預防科人員,新成立情報中心等等。筆者認為,對情報中心設置問題制定規范性指導文件是當務之急。信息情報部門最適宜設置在舉報中心。現行舉報中心職能存在諸多弊端:工作內容簡單,現行職能以受理群眾舉報控告和線索移交為主要內容,任務和職能十分單純;工作方式僵化,以接受舉報和來信、來訪為主要工作方式,基本上是坐堂接報,工作比較被動,對于獲得的舉報線索往往是一轉了之,基本上沒有進行情報信息的“深加工”;工作成效欠佳,由于舉報線索資源管理和使用脫節,流轉環節多, 責任分散,處理周期長,導致辦案成本增加,辦案效率降低,現行有限的線索資源并沒有被最大限度地開發利用。設置專門情報部門,應當充分考慮到我國檢察機關內部職能部門設置的實情況。顯然,在反貪內部或抽調反貪、舉報、預防人員新成立情報中心不太切合實際。舉報中心對外是一個接報部門,但對內在一定程度上實際是一個情報部門,它是目前檢察機關儲存職務犯罪情報相對集中的地方。賦予舉報中心情報收集、管理功能,與目前舉報中心的任務是相一致的,這種舉報中心和情報中心的整合,可以為偵查部門提供更多的情報支持。
二、情報資源應充分共享
1 、內部情報傳遞不暢。 這是普遍存在的情況。先不說那些保密的情報資料,單就已經辦理的案件來說,在同一地區內,幾個兄弟單位之間幾乎不知道對方辦了多少案,辦過哪些案,大都只顧自己辦案。如某基層院查辦案件中查到了某行賄人行賄的事實,而之前其他兄弟單位早已經查過,而且還很詳細,但對該情況這個單位并不了解,所以浪費了不少工作量。又如,某院查辦貪污賄賂案件中,牽出屬他院管轄的案件,但對該情況,多數單位都只是一放了之,不會主動將此情況轉達他院,造成情報短路。情報資料沒能共享,實際上造成了大量人力物力財力的浪費,也降低了辦案效率和質量。因此,必須緊緊依靠計算機網絡的發展,通過單位內部局域網以及專線網建設,將情報資料實現資源共享,建立職務犯罪情報網絡系統。同時,檢察機關可以制定必要的考核機制和獎勵措施,制定院內設機構之間線索移送制度。
2 、外部信息沒有共享。 反貪案件的成功辦理,需要收集許多有價值的外部信息,往往會涉及到對有關信息資料的利用,如工商登記資料、電訊信息資料、人口信息管理資料、車輛管理資料、出入境管理資料、房產信息資料、稅務登記資料等等。但由于長期以來檢察機關不夠重視與相關單位建立信息共享機制,導致目前各項信息沒有通過網絡實現共享,因此,反貪案件初查中往往疲于奔波各部門查詢信息,造成司法資源的浪費,影響工作效率和案件保密。因此,檢察機關必須加強與審計機關、紀委等有關部門建立案件線索移送制度,進一步拓寬案源。應充分利用網絡這個便捷的通道,建立與有關部門(公安、銀行、工商、稅務、海關等)行業電腦資料庫聯網的專線網,及時獲取所需信息資料。
三、部門區域間要加強協作
對紀檢、監察機關查辦的重大違法違紀案件,積極介入,不出具法律文書不動用刑事手段,掌握案件偵查的主動權。建立提前介入審計及個案協查制度,通過提前介入審計發現貪污瀆職犯罪;辦理個案中必要時可以商請審計部門審計查證。對有些成案價值比較大,但線索比較粗的舉報線索,可以請求工商稅務等部門的密切配合,以這些部門的名義進行查帳查稅審計秘密獲取證據,請技術監督工商稅務稽查物價仲裁等部門的專業人員協助辦案。有必要以法律形式將檢察機關與其他職能部門如紀委、審計機關之間,在反腐敗信息資源管理上的關系進行界定,賦予檢察機關優先處理案件情報信息的權力。
四、加大科技裝備在信息情報建設中的應用
自偵部門情報的收集手段比較單一,落后,電話監聽、電子遠程跟蹤等科技手段也運用很少。情報的收集主要集中在線索的收集,對線索之外的情報則很少顧及,且線索的收集渠道還是固定在以傳統的舉報為主。由于職務犯罪的隱蔽性極強,僅憑舉報查處的案件也較少,且舉報的情報也很多是道聽途說,線索情報質量不高,成案率低。情報收集手段的落后和科技含量的過低,已嚴重限制了情報工作的開展。
在情報資料庫的建設方面,檢察機關同其他機關相比是比較滯后的。各地公安機關大都建立了常住人口信息、暫住人口管理系統、刑事案件信息系統等眾多情報管理系統,有些還建成了區域或全國信息網絡系統。同時,工商行政執法部門、稅務緝查部門等也建立了相應的情報信息資料庫。但我們情報資料庫數量較少且相對落后。因此,我們要依托科技力量,積極設計、開發更多的信息情報數據庫軟件。
五、大力培養社會基礎資源依托
篇6
院審判委員會:
在目前的審理案件中,我們發現檢察院向我院移送起訴了處于取保候審狀態的被告人,檢察院亦提出了緩刑的量刑建議,但司法局出具了不同意社區矯正的報告,依照刑事訴訟法及相關司法解釋的規定,我院應當下發逮捕決定書給公安機關,由公安機關執行逮捕,但現實情況是,公安機關卻以疫情原因為由沒有執行,由此影響結案。經刑事審判團隊討論,現提出如下方案:
一、等公安機關執行收監后再開庭。該方案中我們需要考慮到的是,一方面等待公安機關執行的時間是不確定的,同案中被關押的被告人將會一直關押下去,甚至超出檢察院量刑建議的最高刑期限度;另一方面司法局出具不同意社區矯正報告的被告人與其他可判緩刑的同案被告人在案件中地位作用相當,根據罪責刑相適應原則,也應當實現同案同判,即全部判決實刑。
二、我們先下逮捕決定書,開庭判決實刑,待能收監時,再送達收監決定書、執行通知書給公安機關,督促及時收監。
刑事審判團隊傾向于第二種方案,以上方案請審委會予以討論決定。
篇7
一、瑞安市人大貫徹落實監督法的實踐和成效
(1)健全制度,促進監督工作規范化。切實抓好制度建設,規范有序開展監督工作。一是全面梳理有關規范性文件,及時修改常委會議事規則、主任會議議事規則、常委會組成人員守則、常委會組成人員聯系代表、常委會審議意見辦理辦法、議案處理辦法、工作規則等制度。二是每年都制定監督計劃,明確監督議題、總體要求、進度安排和責任單位,并及時通過新聞媒體向社會公開,確保年度監督工作依法有序進行。
(2)突出重點,提高監督工作實效性。一是圍繞發展大局抓監督。及時把脈“十二五”規劃綱,認真審議關于沿海產業帶建設、政府投資、統籌城鄉發展等專項工作報告,并依法就鄉鎮行政區劃調整、市域總體規劃等重大事項作出決定。做好計劃、財政預算執行和重點項目資金安排情況的監督。二是圍繞民生改善抓監督。開展食品安全、鎮街衛生院運行、保障房建設、電網建設、民辦教育、社會治安、環境資源保護等民生熱點的監督,聽取和審議完善和規范房地產市場、優先發展公交事業、溫瑞塘河綜合整治、民間借貸及非法集資類案件處理等專項工作。三是圍繞法律實施抓監督。先后就行政許可法、科技進步法、律師法、農業機械化促進法、歸僑僑眷權益保護法、礦山安全法等17部法律法規的貫徹落實情況開展執法檢查活動,促進了市政府及其職能部門依法行政。四是圍繞司法公正抓監督。開展職務犯罪查處與審判、行政審判、未成年人犯罪審判、刑事立功等專項檢查,促進司法公正,保障社會正義。
(3)創新方法,增強監督工作針對性。一是在監督環節上,強化跟蹤監督。注重監督議題的后續跟蹤工作,使人大監督有始、有終、有效。如針對市十四屆人大的關于加快實施飲用水安全工程的議案,堅持不懈開展跟蹤督辦,督促市政府連續5年將飲用水工程建設列為為民辦實事的重點項目來抓,解決和改善了253個村的飲水難題。二是在監督方式上,開展專題詢問和整改情況滿意度測評。在明查暗訪、執法檢查、聽取報告的基礎上,召開食品安全工作專題詢問會,督促市政府解決食品安全監管機制、風險監測和執法體系建設等方面存在的問題。三是在監督時效上,推行限時督辦。明確要求“一府兩院”在規定時間內先向常委會相關工委提交落實審議意見的實施方案,并按規定時間向常委會提交整改報告,從而使人大監督的時效大為提高。
二、存在的主要問題與不足
(1)從監督意識上看,認識有待深化。一方面,作為監督主體,部分常委會組成人員和人大干部缺乏主動監督的意識,還存在“黨委不點頭,不能監督;政府不高興,不想監督”的顧慮,以及人大監督發揮多大作用,權力用到什么程度才合適的困惑,特別是受制于人情關系而“猶抱琵琶半遮面”,未能理直氣壯開展監督。個別組成人員也由于受傳統思維和社會輿論的影響,存在“船到碼頭車到站”的消極心態。另一方面,作為被監督者還缺乏自覺接受監督的觀念,認為人大監督是挑刺找茬、是給添麻煩,對人大監督的法定地位和權力認識不清,對人大提出的建議意見沒有引起足夠的重視。
(2)從監督體制上看,關系有待理順??h級人大常委會的監督對象是“一府兩院”,但實踐中,由于黨政職能難以分清,許多工作都是黨委和政府聯合行文部署。作為接受黨委領導、監督政府工作的人大常委會就容易陷入“兩難”境地。公、檢、法等司法機關也要接受黨委所屬政法委的直接領導,牽涉的監督層次和關系復雜,給人大監督帶來一定難度。此外,工商、國土、稅務、質監、食藥監等垂直管理部門,從行政關系上基本脫離了地方政府,但這些部門的工作仍是地方政府工作的重要內容,人大如何開展對垂管部門的監督,也需要體制上的理順。
(3)從監督手段上看,剛性有待強化。目前,地方人大監督基本上是聽取和審議工作報告或專項工作匯報、審查與批準計劃及預算等程序性的監督,也探索實行了滿意度測評、專題詢問等方式,但監督法規定的質詢、特定問題調查、罷免和撤職等剛性的監督方式基本上沒用過,對存在和發現的問題基本都用意見和建議的方式督促解決。對一些事關全局的重大問題、敏感問題、焦點問題,缺乏深層次的了解及相關的處置措施??傮w而言,實際的監督工作中還是彈性監督多、剛性監督少,程序性監督多、實質性監督少,建議性監督多、強制性監督少,導致被監督者覺得人大只是來虛的、不會來硬的,使監督體現不出應有的權威性。
(4)從監督實效上看,質量有待提高。首先是調查研究不夠深入。對例會確定的重點議題或作出的一些決策,深入調研也不夠,沒有真正掌握大量的第一手資料,以致人大開展工作不能有的放矢。其次是審議質量不夠高。審議“一府兩院”的工作是人大監督的重要形式,審議質量的高低很大程度上決定了人大監督工作水平的高低。有的審議意見過于原則籠統,缺乏具體的整改要求和量化指標,針對性和操作性不夠強。再次是跟蹤落實不夠有力。人大與“一府兩院”的溝通協調需要加強,有的工委沒有及時跟蹤督查,“重審議、輕辦理”的現象仍較普遍。
三、進一步提高人大監督工作水平的幾點思考
黨的十為人大工作指明了方向,也為我們做好新時期人大監督工作提出了新的更高的要求。通過調研,我們深切體會到提高人大監督水平,關鍵要按照堅持黨的領導、依法辦事、民主公開、務求實效的原則,進一步完善監督工作機制,增強監督工作實效,重點要研究解決以下幾個問題:
篇8
烹飪設施設備月度安全檢查情況匯報表
實訓室名稱
設備
數量
檢查結果
情況說明
西餐實訓室
爐灶
2
正常
扒爐
2
正常
煎鍋
2
正常
寶仔爐
8
正常
鮮風機
1
正常
油煙機
1
正常
運水設備
1
正常
冰箱
1
正常
水管設備
不正常
中餐演示室
爐灶
2
正常
油煙機
1
正常
冰箱
1
正常
水管設備
正常
中餐實訓室
爐灶
16
正常
鮮風機
1
正常
油煙機
2
正常
運水設備
1
正常
水管設備
正常
面點實訓室
爐灶
1
正常
蒸爐
2
正常
攪面機
2
正常
壓面機
2
正常
冰箱
1
正常
油煙機
1
正常
水管設備
正常
刀工實訓室
水管設備
不正常
總煤氣房
總開關
2
篇9
[關鍵詞] 人參皂苷Rb1; 阿霉素; 自噬; H9c2細胞
Protective effect of ginsenoside Rb1 on doxorubicin
induced myocardial autophagy
LI Longfei, MA Zengchun*, WANG Yuguang, TANG Xianglin, TAN Hongling, XIAO Chengrong, GAO Yue*
(Institute of Radiation Medicine Science, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China)
[Abstract] Ginsenoside Rb1(Rb1), which is one of the main ingredients derived from Panax ginseng, has been found to have extensive pharmacological activities including antioxidant, antiinflammatory, anticancer properties. In this study, the effect of Rb1 on doxorubicininduced myocardial autophagy was studied with H9c2 as the study object. CCK8 method, transmission electron microscope observation, fluorescence staining observation and Western blot were used to detect changes in H9c2 cell proliferation and autophagy after treatment. According to the results, doxorubicin could cause cell viability decrease, significant increase in the LC3Ⅱ/LC3I ratio and downregulation of the expression of p62. Pretreatment with ginsenoside Rb1 inhibited cell viability decrease and increase in doxorubicininduced autophagic structure and LC3Ⅱ/LC3I ratio, and downregulation of the expression of p62. In conclusion, doxorubicin could induce H9c2 cell death and induce autophagy, and ginsenoside Rb1 showed a protective effect on DOXinduced cardiotoxicity, which may be correlated with suppression of DOXinduced autophagy.
[Key words] ginsenoside Rb1; doxorubicin; autophagy; H9c2 cell
自噬是細胞受到刺激后產生雙層膜囊泡包裹胞內物質運送到溶酶體降解的過程,是真核生物所特有的進化保守過程,其主要功能是清除和降解細胞內受損的細胞結構和衰老的細胞器以及外來物,保持細胞穩態[1]。近年研究發現,自噬不但參與心血管系統穩態的調控,而且在心肌肥大、心肌纖維化、心肌缺血再灌注損傷、心力衰竭等多種病理過程中發揮重要作用[25]。人參為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根和根莖,是我國傳統名貴中藥材,在我國藥用歷史悠久,對多種疾病具有防治效果。人參皂苷Rb1是人參的主要有效成分之一[6]?,F代藥理研究證明,人參皂苷Rb1可明顯改善缺血性心臟病、各型心律失常、急性或慢性心力衰竭等心臟疾病[7]。阿霉素屬于周期非特異性抗腫瘤藥。文獻報道,其具有心臟毒性并且會導致心肌細胞自噬性死亡[810]。因此,本研究擬用阿霉素建立心肌細胞自噬損傷模型,探討人參皂苷Rb1對阿霉素誘導心肌自噬的影響。
1 材料
1.1 藥品與試劑 人參皂苷Rb1購于上海一飛生物科技有限公司(批號E049517,純度98%);阿霉素(doxorubicine,DOX)、3MA購自美國Selleck Chemicals公司;DMEM高糖培養基、青霉素鏈霉素雙抗溶液購于GE醫療公司;胎牛血清(FBS)購自天津康源生物技術有限公司;磷酸鹽緩沖液(PBS)、PremoTM Autophagy Tandem Sensor RFPGFPLC3B Kit購于美國賽默飛世爾科技公司;CCK8試劑盒購于日本同仁化學研究所;AntiSQSTM1/p62抗體購自英國Abcam公司;LC3B抗體購自美國CST公司;實驗用水為超純水;其他試劑均為國產分析純。
1.2 儀器 VICTOR X型多標記酶標儀(美國Perkin Elmer公司);SM 510 META激光掃描共聚焦顯微鏡(德國Zeiss公司);日立透射掃描電子顯微鏡H7650(日本日立集團);Microfuge 22R型離心機(美國Beckman公司);CO2培養箱(美國Thermo公司);Millipore SimplicityTM185超純水機(德國Merck集團);VIBS223S電子天平(德國Sartorious公司)。
1.3 細胞系 本研究采用大鼠胚胎心肌細胞系H9c2(21)作為實驗對象,此細胞系購自北京協和細胞資源中心(Cell Resource Center,IBMS,CAMS/PUMC)。
2 方法
2.1 細胞培養 H9c2細胞培養于含10%FBS的DMEM高糖培養液中(含青霉素鈉100 units?mL-1,鏈霉素100 mg?L-1),放入37 ℃,5%CO2培養箱中培養。2 d更換1次培養液,待細胞生長至約80%時用0.25%胰蛋白酶消化傳代。取對數生長期細胞進行實驗。
2.2 細胞活力檢測 取對數生長期細胞接種于96孔板中,每孔1×104個細胞,置于培養箱中培養。實驗設置調零孔(只加培養基不加細胞)、細胞對照孔和實驗孔,每組設置3個復孔。待細胞培養24 h后棄去上清培養液,加入用含2%FBS的DMEM培養基配成的各濃度受試藥物,在培養箱中培養適當時間后,每孔加入CCK8試劑10 μL,培養箱內孵育約1~2 h,使用酶標儀在450 nm處測定吸光度。細胞存活率=(A給藥組CA調零孔)/(A對照組CA調零孔)×100%。
2.3 電鏡觀察自噬體 細胞給藥處理后采用刮刀法收集細胞,經過前固定、漂洗、后固定、漂洗、脫水、浸透、包埋、切片等步驟制成超薄切片進行透射電鏡觀察。
2.4 RFPGFPLC3B融合蛋白示蹤自噬形成 按照PremoTM Autophagy Tandem Sensor RFPGFPLC3B Kit說明書,每1萬細胞中加入2 μL轉染試劑,孵育16 h,將RFPGFPLC3B融合蛋白轉染至H9c2細胞。轉染成功后進行給藥處理,采用激光共聚焦顯微鏡進行觀察。
2.5 Western blot 法檢測自噬相關蛋白 取對數生長期細胞接種于25 cm2細胞培養瓶中,每瓶約5×104個細胞。進行給藥處理后,收集各培養瓶細胞,離心,PBS漂洗,加入細胞裂解液,提取細胞總蛋白。經BCA法測定蛋白濃度及變性后,進行SDSPAGE電泳,轉膜,5%脫脂奶粉或BSA封閉,分別加入LC3B,p62和GAPDH抗體,4 ℃孵育過夜。次日,TBST洗膜3次,加入HRP標記的二抗室溫孵育90 min,TBST洗膜3次后用化學發光法顯影,采用Image J軟件進行條帶分析。
2.6 稻莘治 數據用±s表示,計量資料組間比較采用單因素方差分析;統計分析軟件使用GraphPad Prism 5.0,以P
3 結果
3.1 人參皂苷Rb1減輕阿霉素引起的細胞損傷 阿霉素0,0.5,1,2.5,5,10,20 μmol?L-1處理24 h后,采用CCK8法檢測H9c2細胞活力的變化。結果顯示,阿霉素在1~20 μmol?L-1對H9c2細胞活力具有顯著的抑制作用,且呈明顯的量效關系(圖1)。不同濃度的人參皂苷Rb1預處理6 h后加入5 μmol?L-1DOX共孵育24 h,采用CCK8法檢測細胞活力。結果顯示,人參皂苷Rb1可以逆轉阿霉素導致的H9c2細胞活力下降,表明人參皂苷Rb1可以抑制阿霉素誘導的H9c2細胞死亡(圖2)。
3.2 阿霉素誘導H9c2細胞自噬活化模型的建立 為了選擇合適的濃度以及時間進行阿霉素自噬模型的建立,分別采用0,0.5,1,2.5,5,10,20 μmol?L-1 DOX處理細胞12 h和1 μmol?L-1DOX處理細胞0,3,6,12,24,48 h后提取細胞蛋白,采用Western blot法檢測自噬相關蛋白的變化。結果顯示,阿霉素可劑量依賴性(0~10 μmol?L-1)以及時間依賴性(0~48 h)地導致LC3BⅡ/ LC3BⅠ升高并使p62蛋白含量降低,表明阿霉素可導致H9c2細胞自噬活化。根據數據分析結果,選擇1 μmol?L-1DOX處理細胞12 h進行造模(圖3)。
3.3 人參皂苷Rb1抑制阿霉素誘導的H9c2自噬活化 50 μmol?L-1人參皂苷Rb1預處理6 h加入1 μmol?L-1DOX共孵育12 h后,收集細胞,制備超薄切片,采用透射電鏡觀察自噬體。與對照組相比,DOX組可以明顯觀察到自噬結構,人參皂苷Rb1預處理組自噬結構則不明顯(圖4)。
將RFPGFPLC3B融合蛋白轉染至H9c2細胞后,50 μmol?L-1人參皂苷Rb1和5 mmol?L-13MA分別預處理6 h加入1 μmol?L-1DOX共孵育12 h后,進行熒光觀察。與對照組相比,DOX組merge后紅色熒光明顯增強,提示RFPGFPLC3B融合蛋白多定位于溶酶體或自噬溶酶體內,即自噬流活化(圖5)。人參皂苷Rb1預處理與自噬抑制劑3MA預處理組merge后紅色熒光減弱,提示其抑制DOX誘導的自噬活化(圖5)。
50 μmol?L-1人參皂苷Rb1和5 mmol?L-13MA分別預處理6 h加入1 μmol?L-1DOX共孵育12 h后,采用Western blot法檢測自噬相關蛋白的變化。結果顯示,人參皂苷Rb1預處理與自噬抑制劑3MA預處理組LC3BⅡ/LC3BⅠ明顯低于DOX組,同時p62蛋白表達亦有部分升高,但無統計學差異。提示人參皂苷Rb1可以抑制DOX誘導的自噬活化(圖6)。
4 討論
[16] Orogo A M, Gustafsson B. Therapeutic targeting of autophagy: potential and concerns in treating cardiovascular disease[J]. Circ Res, 2015, 116(3): 489.
[17] Klionsky D J, Abdelmohsen K, Abe A, et al. Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (3rd edition)[J]. Autophagy, 2016, 12(1): 1.
[18] Wang R X, He R L, Jiao H X, et al. Ginsenoside Rb1 attenuates agonistinduced contractile response via inhibition of storeoperated calcium entry in pulmonary arteries of normal and pulmonary hypertensive rats[J]. Cell Physiol Biochem, 2015, 35(4): 1467.
[19] Wang X F, Liu X J, Zhou Q M, et al. Ginsenoside Rb1 reduces isoproterenolinduced cardiomyocytes apoptosis in vitro and in vivo[J]. Evid Based Complement Alternat Med, 2013, 2013: 454389.
篇10
路漫漫其修遠兮,吾將上下而求索!
下鄉前有事耽擱本沒有做好充分的準備,甚至沒看清自己支教的第一天就已有課了。原本想好好講一門語文閱讀導引課程,計劃從一份精心挑選的材料中折射出多方面的語文學習方法以及寫作方法,乃至把握生活中的靈感,想把自己的思想以及認識知會給孩子們。但是出發前的空洞以及第一天的緊湊已經宣告了我的失敗。沒有材料的支撐和充分的例子,注定任何理論都是空洞的。在事實的面前,我既不博覽群書,胸中也無信手拈來的材料,離開了現成的材料,我的知識儲備少得可憐,作為中文人真是莫大的悲哀。失落中改變了所有的計劃,把語文課都改成了音樂課。每晚當別人在埋頭備課的時候,我卻一個人在樹底下聽歌,無盡的失望和失落。有兩個孩子見了我說:“這個是唱歌老師!”我想我不能只是唱歌,盡管它是那樣地輕松和愉快!后來就準備了一門英語詩歌學習的課程,通過自己臨時總結的一招“偷師法”,教了孩子們一種學習英語的方法,才像是真正上了一門課,聽到了他們說開始有一種“感覺”,我心里第一次有了安慰,也只有這節課是完完整整地融合我真正的心得和初衷,九天以來第一次哭是為我自己。
但我不是學唱歌的,也不是教英文的,以后面對的是語文,它所要求的文化修養是我遠遠不及的。如果說備好課可以提供我們更好展示自己的舞臺,但是有一天也是這樣臨時上陣,而我可以給我的學生帶來什么?也許我們都有自己的方法可以“糊弄”過去,但是永遠也蒙騙不了自己。路漫漫其修遠兮,吾將上下而求索!
安然處之的平凡
當我們自小耳熟能詳與“老師是太陽底下最光輝的事業,是人類靈魂的工程師”諸種關于教師職業之神圣的標語時,而在孩子們的眼中,老師的位置并不能得到百分百的認同和肯定,甚至有人厭惡老師都成了一種習慣。做好一位老師真的不容易,并不是說我們加載于“老師”有多少層偉大神圣的含義,所謂的“偉大、神圣”,乃是教師作為千萬種普通職業中的一種,它應具備的職業道德和規則而已!正如一位工程師把一棟房子蓋好而不至于使它倒塌殘害無辜生命并非是多么光榮偉大的事情。