火星救母記范文

時間:2023-03-17 09:29:16

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篇1

目的 研究水母毒素的提取及其溶血活性的影響因素。方法通過緩沖溶液浸取、超聲波細胞破碎等操作從水母觸手的刺絲囊中提取毒素,采用分光光度法對水母毒素的溶血活性進行測定,并研究了溫度、濃度和二價金屬離子等因素對毒素溶血活性的影響。結果水母毒素的溶血活性對溫度敏感,隨著濃度的提高而增大,并且依賴于Ca2+,Mg2+等二價金屬離子的存在。 結論水母毒素具有較強的溶血活性,但不穩定。

【關鍵詞】 水母毒素;提??;溶血活性

Abstract:ObjectiveTo study the extraction and the affecting factors to haemolytic activity of jellyfish venom.MethodsJellyfish venom was extracted from the oral arms with tentacles through such operations as soaking in buffer solution and disrupting cell in supersonic wave. Activity of the venom to chicken red blood cells was detected by spectrophotometric method. The effects of factors such as temperature, concentration, palent metal cations on the haemolytic activity were studied. ResultsThe haemolytic activity was temperature-sensitive, and improved with the concentration increase. The presence of Ca2+,Mg2+ wass necessary for haemolytic activity.ConclusionThe haemolytic activity of jellyfish venom is relatively strong, but it is unstable.

Key words:Jellyfish venom; Extraction; Haemolytic activity

生物毒素是生物活性最高、毒性最大的一類化學物質,對探索生命運動過程和發展新藥均有重要價值。藥物是指對失調的機體呈現有益作用的化學物質。藥物的藥理活性和毒副作用主要取決于藥物分子的化學結構?;瘜W結構與藥物效應之間的關系(即構效關系)是藥物研究的重要依據。海洋生物毒素所特有的化學結構使其極有可能成為特異的高活性、高藥效的先導化合物,以具有確定藥理效用的海洋毒素為先導化合物,對先導化合物進行結構或性能的改造,尋求新的療效更好的藥物是當前新藥研究的重要方向之一[1,2]。

水母屬于腔腸動物門,是一個重要的海洋浮游生物類群,它種類多、數量大,分布廣泛,我省黃海領域就具有豐富的水母資源,主要的水母品種有海蟄、海月水母和多管水母等。對于具有食用價值的海蟄已經于2004年實現了全人工育苗養殖,如江蘇連云港市已經在贛榆、宿城、燕尾港等地建立了養殖基地。水母在食用及藥用上都具有研究、開發的價值,自古以來水母用于傳統中藥,有清熱解毒、軟堅散結、降壓、抑菌、抗衰老的功效,可用于治療高血壓病、氣管炎、哮喘、胃潰瘍、中樞神經系統疾病等,并可作為神經組織的活性物質和組織胺釋放劑。水母的觸手上分布著腔腸動物所特有的刺絲囊,其中含有大量的毒素成分。毒素蛋白是水母的主要活性成分之一,它是結構新穎獨特的肽類毒素,具有多種生物活性,如溶血性、酶活性、神經毒性、皮膚壞死、肌肉毒性、肝臟毒性以及心臟毒性等[3,4]。

溶血毒素(Hemolysin)是指多由病原微生物所產生的,能導致機體紅細胞及其他有核細胞裂解的毒素類物質,它存在于環節動物、節肢動物、軟體動物、棘皮動物等動物的血清或體液中,可以單獨作為調理因子或通過蛋白水解酶發揮作用,其活性大小通過溶解(水解)脊椎動物的血細胞表示,最終的溶解效應被稱作溶血活性。目前溶血毒素研究以微生物為主,無脊椎動物溶血毒素研究報道非常少,有關水母毒素溶血性能的研究報道很少[5]。本實驗通過緩沖溶液浸取、超聲波細胞破碎等技術從水母觸手的刺絲囊中提取水母毒素,采用分光光度法對其溶血活性進行測定,并研究溫度、pH 值、金屬離子等理化因子對其溶血活性的影響。

1 材料與方法

1.1 水母的采集

水母于200607采集于江蘇燕尾港附近海域的人工養殖場,扇形帶刺絲囊的觸手沿水母口腕人工切除分放在食品級聚乙烯塑料袋中,扎好封口后,立即于-20℃冷凍保存備用。

1.2 水母毒素的提取及濃度測定

取一定重量的冷凍的水母觸手,在冷凍狀態下放入浸取劑(0.01 mol/L,pH 6.0的磷酸緩沖液)中,在保持溫度低于4℃的條件下浸泡3 h,勻漿10 min后,超聲波破碎,超聲波功率200 W、總工作時間2 min、工作/間隙時間15/30S。破碎后的物料于4℃、13 000 r/min的條件下高速冷凍離心15 min,所得到的上清液即為水母毒素粗品。以牛血清白蛋白(BSA)作標準,在塑料器皿中用Bradford法(1976)測定水母毒素粗品中蛋白質的濃度C(mg/ ml)。

1.3 雞紅細胞懸液的制備

采集新鮮雞血50 ml,2 000 r/ min離心5 min,取上層液體,以pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液(含136.9 mmol/L NaCl,2.68 mmol/L KCl,10.14 mmol/L Na2HPO4,1.76 mmol/L KH2PO4)離心洗滌3次,用磷酸鹽緩沖溶液配成體積分數為1%的雞紅細胞懸液,4℃冰箱保存備用。

1. 4 水母毒素溶血活性的測定方法

取2 ml體積分數為1%的雞紅細胞懸液與一定量的水母毒素混合均勻,37℃保溫30 min,間歇振蕩。在對照管中加入2 ml體積分數為1%的雞紅細胞懸液和0. 5 ml磷酸鹽緩沖溶液,與實驗管同時保溫,取出后立即冰浴以終止反應,經2 000 r/min 離心5 min后獲得上清液。以對照管上清液作空白,于540 nm處測吸光度(A),A值每增加0.001定義為1個溶血活性單位(u)。所測定必須重復3次,記錄3次結果的平均值。

1.5 理化因素對水母毒素溶血活性的影響

1.5.1 濃度、溫度對溶血活性的影響

在8支實驗管中取一定量的水母毒素與2 ml體積分數為1%的雞紅細胞懸液混合均勻,使水母毒素的最終濃度分別為:0.02,0.05,0.1,0.2,0.5,0.8,1.0,1.2 μg/ml。將上述水母毒素實驗管分別在4,25,37,45,60,100℃下恒溫處理20 min后,按“1.4”的方法檢測其對雞紅細胞的溶血活性。

轉貼于

1.5.2 二價金屬離子對溶血活性的影響

為研究二價金屬離子對水母毒素溶血活性的影響,并排除其他離子的干擾,將水母毒素在4℃的緩沖溶液中透析4 h,透析緩沖溶液的組成為:0.01 mol/L,pH 6.0的磷酸緩沖液100 ml中加入1 g十二烷基硫酸鈉和1 ml b-巰基乙醇。

取2 ml體積分數為1%的雞紅細胞懸液與0.5 ml透析過的水母毒素混合均勻放入9支實驗管(1~9#),1~9#實驗管中分別加入0. 1 ml的不同濃度的CaCl2、MgCl2、ZnCl2溶液,使二價金屬離子的最終濃度分別為5,10,15 mmol/ L,10#實驗管中加入2 ml雞紅細胞懸液和透析過的水母毒素、11#實驗管中加入2 ml雞紅細胞懸液和未透析的水母毒素,對照管中加入0. 1 ml磷酸鹽緩沖溶液作為空白對照,實驗管和對照管同時在37℃處理30 min,檢測溶血活性。所有實驗管的水母毒素蛋白的最終含量都為0.5 μg/ml。

2 結果

2.1 溫度、濃度對水母毒素溶血活性的影響

結果見表1。由實驗結果可以看出,在實驗濃度范圍內,隨著水母毒素濃度的提高,溶血活性增大。當濃度低于0.1 μg/ml,幾乎沒有活性;當濃度高于0.8 μg/ml,活性增大不顯著。表1 不同濃度的水母毒素經不同溫度預處理后的溶血活性濃度(略)

隨著預處理溫度的提高,水母毒素的溶血活性降低,預處理溫度高于45℃時,溶血活性顯著大幅度下降。預處理溫度達到100℃時,毒素蛋白變性,溶血活性完全喪失。這反映水母毒素的溶血活性對熱是非常不穩定的。

2.2 二價金屬離子對溶血活性的影響

金屬離子對溶血活性的影響實驗結果見表2。結果顯示,水母毒素透析后,溶血活性顯著降低;添加CaCl2,MgCl2,ZnCl2后,溶血活性增大,并且隨著二價金屬離子濃度的提高,活性增強。說明水母毒素的溶血活性依賴于二價金屬離子的存在,與類似的文獻報道一致[5]。表2 不同濃度金屬離子作用下的水母毒素溶血活性(略)

3 結論

水母毒素的溶血活性對溫度敏感,當預處理溫度高于25℃時,活性明顯下降,100℃時完全失去活性。

水母毒素的溶血活性隨著濃度的提高而增大,但當濃度高于0.8μg/ml,活性增大不顯著。

水母毒素的溶血活性依賴于Ca2+、Mg2+等二價金屬離子的存在,且在一定范圍內隨著二價金屬離子濃度的提高,活性增強。

參考文獻

[1]胡延春,賈艷,張乃生. 生物毒素的應用研究[J].生物技術通訊,2004,(1):84.

[2]李光友,劉發義. 海洋生物活性物質的研究與開發技術[M].青島:青島海洋大學出版社,2000.

[3]張奕強,許實波. 水母的化學和藥理學研究概況[J].中國海洋藥物,1999,(1):43.

篇2

關鍵詞:工程機械;銷售;項目化管理;使用

項目管理作為一種能最有效地整合資源、提高企業快速響應能力的理念和技術,隨著其多元化的發展,明顯表現出了向一般管理領域滲透的趨勢,進而成為企業管理學科中成長性最快的一個分支。項目管理對項目的實施提供了一種有力的組織形式,改善了對各種人力和資源利用的計劃、組織、執行和控制的方法,對管理實踐做出了重要的貢獻。

一、大型工程機械銷售活動規劃和設計

(1)銷售團隊的組建。大型工程機械銷售運用項目化管理方式最明顯的特點就是由項目團隊負責所有產品的銷售。銷售不單單只涉及企業銷售以及市場部門等相關工作,還需要由技術部門以及生產,還有可能涉及財務部門等等,這些職能部門中的所有員工都需要參與到銷售項目的全過程。組建項目管理團隊,最為關鍵的是確定項目經理人選,并且明確項目經理的職責是對項目的計劃以及組織,還有控制。

(2)銷售項目啟動會議。在銷售項目啟動之前,應該把和項目有關的利益相關者都集中到一起開展會議,有利于澄清和項目相關概念的內涵,并且獲得大家的一致認可。落實各個項目利益相關者的責任以及角色,并且提高他們對于整個項目的兌現程度。實施項目銷售的過程中,應該啟動會議,主要由副總經理負責,并且由銷售總監召集相關部門的負責任,還有項目銷售團隊的所有成員參加。會議的內容大致是介紹銷售項目的背景以及立項評估情況,并且進一步明確企業的銷售目標,進一步說明創建項目團隊進行銷售的具體管理方式。

(3)銷售項目目標和計劃。制定大型工程機械銷售項目計劃,并且進行目標分解以及任務確定,并且針對有可能出現的問題提出切實可行的解決問題的方案、措施以及手段,并且還應該按照大型工程機械銷售的時間以及成本,還有質量要求做出明確規定,為整個銷售項目制定一份有效的推進計劃,制定一個虛擬團成員矩陣圖。明確銷售目標,并且簽訂銷售合同。

二、大型工程機械銷售項目的實施和控制

(1)項目溝通管理。由于大型工程機械銷售的對象都有著非常復雜的組織結構,并且參與采購的成員以及組織,還有流程都是非常復雜的。因此,銷售人員面臨的更為復雜的溝通對象也是很常見的。作為大型工程機械的銷售人員,應該和銷售對象的利益相關部門做出有效溝通,主要包括了使用部門以及技術管理部門,還有采購主管部門以及財務部門等,各方面都應該做好溝通。

(2)客戶跟進和控制。進行大型工程機械銷售,這是一個漫長而又艱巨的任務。因此,需要對銷售對象做好跟進和控制。在明確了客戶的購買需求之前應該由銷售總監對客戶進行拜訪,了解購買方的需求以及資金實力,還有現有設備的具體使用情況等等信息。當客戶有了正式購買意向的時候應該進行官方正式地交流。設立不同的里程碑來對項目成員的銷售努力方向進行引導。對整個項目銷售開展例會等辦法加強控制,盡量做到降低風險。

(3)招投標管理。大型工程機械銷售過程中的招投標管理最為重要的是體現在制定報價方案以及招標小組進行前期干預方面。加強對招投標文件的管理,這是確保工程機械銷售成功的基礎工作。

(4)項目后評估和總結。即使最終獲得了銷售合同也應該對銷售項目做出評估和總結。并且把評估報告以及成功案例以紙質文件的方式保存到企業知識庫,這為企業的更進一步發展做出了各種參考依據,對于企業項目的銷售也能夠起到非常良好的借鑒意義。

三、總結

本文主要對大型工程機械銷售管理當中通過引用現代項目管理的經驗,開創了一種全新的銷售管理模式,并且把現代項目管理當中的技術方法和手段都運用到工程機械銷售任務以及活動當中,充分實現了對工程機械銷售整個活動進行了計劃及組織,還有協調及控制,并且最終實現了工程機械銷售目標。

參考文獻:

[1] 韓連勝.企業項目化管理范式:企業整體管理系統解決方案[M].機械工業出版社,2012.

篇3

1、火星救母記(虧損1.3億美元)

《火星救母記》是由西蒙·威爾斯執導的動畫片,賽斯·格林、瓊·庫薩克等參與配音。該片于2011年3月11日在美國上映。該片講述了小男孩麥洛先前對媽媽嚴厲的教育耿耿于懷,突然有一天媽媽被綁架到火星,麥洛踏上了救回媽媽的旅程的故事。

2、異星戰場(虧損2億美元)

《異星戰場》(John Carter)是一部2012年上映的科幻電影,由迪士尼公司制作,安德魯·斯坦頓執導,泰勒·克奇、琳恩·柯林斯、威廉·達福主演。電影改編自美國小說家埃德加·賴斯·巴勒斯于1917年發表的科幻小說《火星公主》(A Princess of Mars),于2012年3月9日美國上映。電影講述了美國內戰時,飽受創傷的前軍官John Carter莫名其妙地被帶到了火星,隨后被迫卷入了當地居民間的一場空前沖突,其中就包括Tars Tarkas和魅力十足的公主Dejah Thoris。

3、獨行俠(虧損1.9億美元)

《獨行俠》是華特迪士尼影片公司出品的一部3D影片。由戈爾·維賓斯基執導,杰瑞·布魯克海默制片,約翰尼·德普、艾米·漢莫、露絲·威爾森和湯姆·威爾金森等聯袂主演。影片于2013年7月3日在美國首映。影片講述通過印第安人武士唐托(約翰尼·德普飾)之口,敘述了獨行俠約翰·瑞德(艾米·漢莫飾)的故事。他們將帶領觀眾登上逃亡列車,來一次史詩般的驚險之旅。

4、掠食城市(虧損1.7億美元)

《掠食城市》是由美國環球影業出品的科幻動作片,由克里斯蒂安·瑞沃斯執導,羅伯特·席安、海拉·西爾瑪、雨果·維文聯合主演。該片根據菲利普·雷夫蒸汽朋克幻想小說改編,講述了在核戰毀掉多數人類社會文明的幾千年之后,來自倫敦城下層的湯姆和逃犯Hester為自己的生存進行斗爭的故事。該片于2019年1月18日在中國內地上映。

5、亞瑟王:斗獸爭霸(虧損1.5億美元)

《亞瑟王:斗獸爭霸》是由美國華納兄弟影片公司出品的奇幻動作片,由蓋·里奇執導,查理·漢納姆、阿斯特麗德·伯格斯-弗瑞斯貝、杰曼·翰蘇、艾丹·吉倫、米克爾·佩斯勃蘭特、裘德·洛、艾瑞克·巴納聯合主演。該片改編自亞瑟王的傳說,講述了亞瑟小時候父親就慘遭叔叔伏提庚殺害并被篡奪王位,亞瑟在窮街陋巷之中長大成人,最終推翻暴君伏提庚并奪取王位的故事。該片于2017年5月12日在美國、中國內地同步上映。

6、割喉島(虧損1.47億美元)

《割喉島》(Cutthroat Island)是米高梅公司1995年出品的一部場面震撼宏大、情節跌宕起伏的海盜題材電影。由蘭尼·哈林執導,吉納·戴維斯、馬修·莫迪恩等主演。電影講述,摩根繼承父業當上海盜首領,并根據遺父留下的拉丁語藏寶圖出海找尋寶藏。摩根找來懂拉丁語的神偷威廉一起出海,途中卻惹來強盜多岳的爭奪,一場斗智斗力的驚險奪寶戰由此展開。

7、邊城英烈傳(1.46億美元)

《阿拉莫之戰》是2004年在美國上映的劇情片,由約翰·李·漢考克執導,丹尼斯·奎德、比利·鮑伯·松頓、杰森·帕特里克等主演。該片根據美國歷史上最重大的戰爭之一——阿拉莫之戰這一真實事件改編,講述了1836年德州英雄奮起反抗強大的墨西哥政府軍,志愿參加戰役直至全數壯烈犧牲的故事。

8、明日世界(虧損1.4億美元)

《明日世界》是華特·迪士尼影片公司于2015年出品的一部科幻電影,由布拉德·伯德執導,達蒙·林德洛夫擔任編劇, 喬治·克魯尼、休·勞瑞、布麗特妮·羅伯森、拉菲·卡西迪、蒂姆·麥格羅、凱瑟琳·哈恩、朱迪·格雷爾、托馬斯·羅賓森、克里斯·鮑爾等聯袂出演。影片定于2015年5月22日在美國上映。影片講述曾被奉為天才少年如今卻夢想破滅的弗蘭克,與一個對科學充滿好奇的少年凱西,共同參與到一項充滿危險的任務,意圖揭開一個被稱作“明日世界”的地方的秘密 。

9、時間的皺折(虧損1.3億美元)

《時間的皺折》是迪士尼影業出品的科幻冒險片,由阿娃·杜威內執導,馬德琳·英格、珍妮弗·李編劇,斯托姆·里德、萊維·米勒、克里斯·派恩、瑞茜·威瑟斯彭、奧普拉·溫弗瑞、敏迪·卡靈等主演,于2018年3月9日在美國上映。該片根據馬德琳·英格所著的同名科幻小說改編,講述了天體物理學家艾利克斯·莫里博士失蹤后,梅格·莫里與弟弟查爾斯·華萊士及同學Calvin O‘Keefe得到三位神仙告訴的線索,一同穿越時間和空間的皺折,去尋找失蹤的父親的故事。

10、賓虛(虧損1.2億美元)