高效液相色譜范文
時間：2023-03-21 17:17:05
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篇1
摘要：目的制定柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的含量測定方法。方法用高效液相色譜蒸發光散射檢測法（HPLCELSD）,AlltimaC18色譜柱,流動相甲醇水（80∶20）,速度0.8ml・min1；蒸發光散射檢測器參數：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。結果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分別在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范圍內線性關系良好,平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。結論該方法簡便、靈敏、可靠、準確、重現性好,可作為柴胡藥材的質量控制方法。
關鍵詞：柴胡；高效液相色譜蒸發光散射檢測法；柴胡皂苷
DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD
Abstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDwasusedinthequantitativeanalysisbyusingAlltimaC18chromatographycolumnandmethanolwater(80∶20)asamobilephase.Theflowrateofmobilephasewas0.8ml・min1.Thetubetemperatureofthedetectorwas40℃.Thepressofpureairwas3.5bar.ResultsThelinearrangesforsaikosaponinaanddwere1.908~19.08μg（r=0.9996）and1.804~18.04μg（r=0.9992）,theaveragerecoverieswere98.35%(RSD=1.26%)and97.64%(RSD=1.58%),respectively.ConclusionThismethodiseasy,sensitive,reliable,accurate,reproducibleandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofRadixBupleuri.
Keywords：RadixBupleuri;HPLCELSD;Saikosaponin
柴胡藥材來源于傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狹葉柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。為常用中藥,在我國已有2000多年藥用歷史,具有和解表里、疏肝、升陽之功效［1］。其主要有效成分為柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a，d的活性較強,具有抗炎、保肝、降低血中膽固醇等藥理活性［2］。應用高效液相色譜法測定柴胡皂苷a，d含量的報道較多［3，4］。但由于檢測波長在210nm,雜質峰干擾十分嚴重,檢測靈敏度低,影響了含量測定的準確性。本文應用HPLCELSD法同時測定柴胡皂苷a，d的含量,其雜質峰干擾小,分離度好,靈敏度高,出峰時間短,便于操作。
1儀器與試藥
高效液相色譜儀：Agilent1100系統，SEDEX75型蒸發光散射檢測器；超聲波清洗機（中國華南超聲波設備廠），工作頻率25kHz，功率250w。柴胡皂苷a，d對照品購自中國藥品生物制品檢定所，含量測定用,批號分別為110777200303和110778200402；甲醇為色譜純（CALEDONLABORATORIESLSD.），水為重蒸水，其它試劑均為分析純；柴胡藥材經鑒定為柴胡BupleurumchinenseDC.的根。
2方法與結果
2.1色譜條件色譜柱為AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流動相：甲醇水（80∶20）；速度0.8ml・min1，柱溫25℃；檢測器參數：漂移管溫度40℃，氣壓3.5bar。在選定的條件下，柴胡皂苷a、d對照品與樣品中其它組分色譜峰可基線分離，峰形好。按柴胡皂苷d峰計算，理論板數為3000以上。柴胡皂苷a，d對照品，供試品的高效液相色譜圖見圖1。
1.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供試品圖譜b對照品圖譜
圖1高效液相色譜圖（略）
2.2對照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
2.3供試品溶液的制備取柴胡藥材粉末（過60目篩）約1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超聲處理40min，放置至室溫，加5%氨水甲醇至刻度，搖勻，靜置，精密吸取上清液20ml置蒸發皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。
2.4線性關系考察分別精密吸取柴胡皂苷a和d的混合對照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色譜儀中，分別測定柴胡皂苷a和d的峰面積。以峰面積自然對數值為縱坐標，進樣量的自然對數值為橫坐標，繪制標準曲線。柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范圍內呈良好線性關系，回歸方程為Y=5.89721.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范圍內呈良好線性關系，回歸方程為Y=5.86191.4965X，r=0.9992。
2.5精密度實驗精密吸取對照品溶液10μl，按上述色譜條件重復進樣5次，測定峰面積，結果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.18%和1.53%，表明儀器的精密度良好。
2.6穩定性實驗取樣品溶液,按含量測定方法及色譜條件分別置0，2，4，6,8h測定，結果柴胡皂苷a和d的RSD分別為1.29%和1.68%，表明樣品溶液在8h內穩定。
2.7重復性實驗精密稱取同批號樣品6份，按含量測定方法及色譜條件進行測定，結果樣品中柴胡皂苷a和d的平均含量分別為11.4541，8.3612mg・g1，RSD分別為1.34%和1.82%。
2.8回收率實驗采用加樣回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的樣品6份，每份約0.5g，精密稱定，分別加入柴胡皂苷a對照品6.0544mg和柴胡皂苷d對照品4.4621mg，按含量測定方法及色譜條件進行測定，結果柴胡皂苷a和d的平均回收率分別為98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。
2.9樣品測定取不同批號的藥材，按上述供試液的制備方法制備供試液。精密吸取對照品溶液5，20μl及供試品溶液10μl，分別注入液相色譜儀，按外標兩點法測定柴胡皂苷a，d含量，結果見表1。
3討論
3.1柴胡皂苷a，d為柴胡的主要有效成分,但在提取過程中其結構易發生變化,因此，嚴格控制提取條件十分重要。本實驗比較了甲醇、5%吡啶甲醇、5%氨水甲醇的提取效果。結果表明，5%氨水甲醇溶液超聲提取效果最佳。
表1樣品含量測定結果（略）
3.2采用5%氨水甲醇溶液超聲處理，分別測定了不同提取時間（20，30，40，50min）樣品中柴胡皂苷a，d的含量，結果在40～50min內樣品中柴胡皂苷a、d的含量基本不變。故文中采用超聲40min的方法。
3.3本文采用HPLCELSD法測定柴胡中柴胡皂苷a，d的含量,較采用紫外檢測器檢測,能明顯減少雜質峰的干擾,峰形好,出峰時間短,有利于提高檢測的準確度和工作效率。
參考文獻：
［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：198.
［2］張本.柴胡屬植物藥理作用研究概況［J］.吉林中醫藥，1983，3(1):39.
篇2
關鍵詞：高效液相 鄰苯二甲酸酯類 殘留
當今社會食品安全問題愈來愈受到廣大百姓的關心 ,食品安全的范圍很廣,它不僅僅指食品本身 ,還涉及到與食品相關的諸多方面 ,如食品所用原材料、食品加工工藝過程污染控制、食品放置與儲存、食品包裝所用材料等方面。
鄰苯二甲酸酯（PAEs）也稱為酞酸酯，主要用作塑料增塑劑，隨著塑料工業的發展和塑料制品的大量使用，鄰苯二甲酸酯已成為環境中無所不在的污染物，極為普遍地存在于土壤、底泥、大氣、水體和生物體等環境樣品中，酞酸酯類物質是一類環境雌激素，它可以擾亂內分泌, 對人體健康危害巨大。世界衛生組織（WHO）1995年公布的必須控制的[5]。其中有6種商品化的鄰苯二甲酸酯被美國EPA列為重點控制的污染物（鄰苯二甲酸二甲酯 DMP 、二乙酯 DEP 、二丁酯 DBP 、鄰苯二甲酸二 2-乙基己 酯 DEHP 、二辛酯 DOP 、丁基芐基酯 BBP）,3種被我國列為優先控制污染物（DMP、DBP和 DOP）,8種被列在世界野生動物基金會(WWF)的環境激素名單中。本文針對食品用塑料包裝中添加的增塑劑鄰苯二甲酸酯類化合物展開研究 ,建立一種方便、快捷、準確的檢測方法。
1實驗部分
1.1儀器與試劑
高效液相色譜儀(Waters Allance 2695-2996),Empower2色譜工作站,PDA檢測器； SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm色譜柱；吉爾森GX271全自動固相萃取儀。固相萃取小柱，Waters公司的 OASIS.HLB（6mL,200mg）小柱；分析天平：感量0.1mg；美國Organomation N-EVAP112型氮吹儀；IKAR werke T25型均質機；離心機；溶劑過濾裝置；0.45μm有機濾膜；Milli-Q超純水機。
甲醇、乙腈為HPLC級（美國Fisher公司）；丙酮、氯化鈉、無水硫酸鈉無為分析純試劑。
鄰苯二甲酸酯類標準品：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP）、鄰苯二甲酸二乙酯（DEP）、鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）、鄰苯二甲酸二戊酯（DPP）、鄰苯二甲酸二己酯（DHXP）、鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、鄰苯二甲酸二辛酯（DNOP）。標準品純度均在97%以上,美國進口,購于百靈威化學品部。
1.2標準溶液的配制[4，7，8]
準確稱取上述標準品各0.1000g,分別用甲醇定容至100mL容量瓶中,配成100mg/mL的單標儲備液。分別移取上述單標儲備液各10mL，放置到100mL容量瓶中。用甲醇定容，配制成100mg/L的混合標準儲備液，置于4℃冰箱中保存備用。標準儲備液每6個月更換一次，或與標準品比較，發現問題時，必須立即更換。
混合標準系列溶液的制備：取一定量的100mg/L的混合標準儲備液，用甲醇分別稀釋成質量濃度為0.16、1.60、16.00、40.00mg/L的標準系列，置于4℃冰箱中保存?；旌蠘藴氏盗腥芤好?～2個月進行更換，或與標準品比較，發現問題時，必須立即更換。
1.3樣品前處理[6]
1.3.1 食品
（1）油脂類固體或半固體樣品：稱取均勻樣品2g(精確至0.1mg)置于離心管中，加入10mL正己烷，均質2min，2500r/min離心3min，己烷層轉入125mL分液漏斗中，再用10mL正己烷重復提取一次，己烷層并入125mL分液漏斗中。用90ml乙腈分三次提取，合并三次乙腈提取液于500mL分液漏斗中，加入250mL10%氯化鈉溶液，用200mL正己烷分兩次提取，經裝有10g無水流酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，40℃下蒸發近干。殘留物用5mL正己烷溶解，待過柱用。
（2）油脂類液體樣品：稱取均勻樣品1g(精確至0.1mg)于小燒杯中，加入20mL正己烷充分溶解，轉入125mL分液漏斗中，用30mL乙腈洗燒杯后也轉入分液漏斗中，其余處理同（1）進行。
（3）不含油脂的固體或半固體樣品：稱取混勻試樣5.00g，置于50mL離心管中，加適量水（使總水量約10mL），加入20mL丙酮+正己烷混合液（2+3），均質2mim，2500r/min離心3min，取上層清液經裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中。再用20mL正己烷提取一次，合并提取液于40℃下蒸發近干（若含色素較多按（1）過柱凈化），用正己烷定容至2mL,待分析。
(4) 不含油脂的液體樣品（不含啤酒）：稱取均勻樣品20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL飽和食鹽水，再加入30mL正己烷劇烈振搖，靜止分層，上清液經裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，再用30mL正己烷重復提取一次，合并上清液，40℃下蒸發近干（若含色素較多按（1）過柱凈化），用正己烷定容至2mL,待分析。
（5）啤酒：稱樣20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL飽和食鹽水，再加入20mL乙腈、20mL正己烷劇烈振搖，靜止分層，上清液經裝有5g無水硫酸鈉的漏斗收集于梨形瓶中，再用20mL 、20mL正己烷重復提取兩次，合并上清液，40℃下蒸發近干，用正己烷定容至2mL,待分析。
1.3.2．食品包裝材料：稱取經粉碎混勻的試樣0.2g(精確至0.1mg)于三角瓶中，加入50mL正己烷，超聲提取30min，取上清液直接進行分析（視含量作相應的稀釋或濃縮）。
1.3.3凈化
(1)．層析柱的制備：玻璃層析柱底部放入少許脫脂棉，加入1cm高的無水硫酸鈉，然后依次干法裝入2g弗羅里硅土（層析用，200℃烘3h后備用），0.5gPSA（硅膠鍵合氨基吸附劑），上部再加入1cm高的無水硫酸鈉。使用前依次用10mL丙酮、10mL正己烷預淋洗。
(2)．凈化與濃縮：待淋洗液下降至無水硫酸鈉層時，將試樣提取液加入，再用5mL正己烷洗梨形瓶，洗液加入層析柱中，待其下降至無水硫酸鈉層時，用25mL丙酮+正己烷（2+98）混合液洗脫，將洗脫液收集于合適的容量瓶中，用正己烷定容，待分析。
1.4測定
1.4.1．色譜條件：
色譜柱：SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm
波長:224nm
柱溫度:30℃
進樣量:10μL
流速：1.0mL/min
流動相：A-水；B-乙腈 ，梯度配比如表1。
Empower色譜工作站
檢測器:PDA檢測器
定量方法 ： 取10μL進樣，根據保留時間定性，以峰面積計算，以外標法定量。
1.4.3．結果計算
食品及食品包裝物中鄰苯二甲酸酯類化合物的含量（mg/kg）
式中：x―試樣中某種鄰苯二甲酸酯的含量（mg/kg）；
v―試樣定容體積（mL）；
m―試樣質量（g）；
c1--試樣中某種鄰苯二甲酸酯峰面積對應的標準品組分的濃度（mg/L）；
c0―空白試樣中某種鄰苯二甲酸酯峰面積對應的標準品組分的濃度（mg/L）
2．實驗結果與討論
2.1 樣品前處理：由于食品包裝材料及部分樣品中成分比較復雜，含有一定量的蛋白、脂肪和纖維等成分，處理不好將直接影響進樣，對液相色譜柱損害較大，所以應將樣品充分混勻提取后，過凈化柱，最后再經高速離心，可較好的去除大分子雜質物質，得到進樣溶液。
2.2 波長的選擇[3-4]:通過對幾種鄰苯二甲酸酯標準溶液進行210～400nm掃描,發現在220～240nm之間,吸收峰較強,本實驗選擇224nm作為方法的固定波長。
2.3標準及樣品：在本方法的實驗條件下，七種鄰苯二甲酸酯類均得到了較好的分離，能夠滿足實驗要求。
2.4 加標回收率：向5份樣品中分別加入不同量的鄰苯二甲酸二丁酯標準溶液，按本法處理、測定并計算回收率，結果見表2：
2.4 檢出限：本方法檢出限0.50mg/kg。
3.結論
實驗表明，本方法所用乙酸銨流動相濃度低，樣品進樣量少，對分析柱的損害較??；樣品加標回收率在78.00%～114.80%之間；線性系數R>0.9999；檢出限為0.50mg/kg；能夠滿足一般食品等樣品中鄰苯二甲酸酯類殘留量的分析要求。另外本方法具有簡便快速、準確靈敏、成本低、可靠性強等優點，應用前景廣泛。
參考文獻
[1] 修麗華,王陸玲等.高效液相色譜法測定畜、禽肉中土霉素的殘留量[J].現代食品科技,2007,Vol.23,No.10
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[7]GB/T5009-2003,食品衛生檢驗方法[M].中華人民共和國國家標準.
篇3
【摘要】 【目的】建立丹參藥材中水溶性成分丹酚酸類和脂溶性成分丹參酮類的超高效液相(UPLC)指紋圖譜方法，為丹參的質量控制提供快速、科學的方法。【方法】以Acquity C18 BEH(21 mm×100 mm，17 μm)色譜柱，乙腈(A)體積分數04%甲酸溶液(B)梯度洗脫，90%~50%A，0~10 min;75%A，15 min。檢測波長280 nm，柱溫30℃，流速05 mL/min?！窘Y果】在15min內得到丹參藥材水溶性和脂溶性成分的指紋圖譜，峰容量85。并采用液質連用技術(HPLCDADESI/MSn) 鑒定了其中的20個特征峰?！窘Y論】UPLC指紋圖譜方法具有靈敏、快速、簡便、準確等特點，適合于丹參藥材及其制劑的指紋圖譜研究和質量控制。
【關鍵詞】 丹參/化學;丹酚酸類/分析;丹參酮類/分析;指紋圖譜;色譜法，超高效液相;液質連用
丹參是我國應用最廣泛的中藥品種之一，臨床上有很好的療效，以丹參作為原料藥或君藥的單一或復方制劑種類繁多。丹參藥材指紋圖譜的研究主要集中在分別研究丹參的水溶性成分和脂溶性成分指紋圖譜[1-6]，這些方法基本均是將水溶性與脂溶性成分分開，分別建立指紋圖譜。作為一種藥材中的兩大類成分，若能將兩者結合起來，在同一張譜圖上得到表征，直觀地比較其化學成分的差異，將是一項十分有益的工作。目前也有一些報道采用高效液相色譜—二極管陣列檢測器(HPLCDAD)或高效液相色譜—質譜檢測器(HPLCMS)連用的方法建立同時表征丹參藥材中水溶性與脂溶性成分的指紋圖譜，但是采用HPLC 技術，尚難以兼顧和保證兩類成分都具有良好的分離度，而且耗時較長。因此，本課題組嘗試采用快速色譜技術——超高效液相色譜(UPLC)建立丹參的指紋圖譜，現報道如下。
1材料與試劑
11實驗材料共收集了12個省、市(區)的丹參商品藥材13份(表1)。藥材經上海中醫藥大學中藥研究所吳立宏博士鑒定為唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根莖。
12儀器與試藥Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色譜儀，包括Acquity Binary Solvent Module 二元可選四溶劑高壓梯度泵，含在線真空脫氣機、Acquity Sampler Module 低擴散自動進樣器、Acquity TUV Detector高速紫外檢測器及Empower II色譜管理軟件(Milford，Boston，MA，USA)。MilliQ system超純水制備器(Millipore，Bedford，MA，USA)，KQ250DB數控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，BP211D型電子天平(Satorius Co.Ltd.，德國)。甲醇、乙醇、甲酸均為分析純(上海國藥集團試劑有限公司)，乙腈為色譜純(Merck公司)，超純水為MilliQ處理水(Millipore Co.)。對照品丹參素鈉、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、丹參酮I、隱丹參酮和丹參酮IIA均由上海中藥標準化研究中心提供。
2方法與結果
21 色譜條件與質譜參數
211超高效液相色譜條件 Acquity C18 BEH(21 mm×100 mm，17 μm)色譜柱，乙腈(A)-體積分數04%甲酸溶液(B)梯度洗脫，90%~50%A，0～10 min;75%A，15 min。檢測波長280 nm，柱溫30℃，流速05 mL/min，進樣量2 μL，運行時間15 min。表1不同產地丹參藥材
212超高效液相色譜—質譜連用(LCMS)條件 流動相為乙腈(A)—體積分數04%甲酸溶液(B)，洗脫程序與上述條件相同。柱后分流，分流比為1∶50，進樣量10 μL，柱溫30℃，電噴霧離子源(ESI)，源電壓-32 kV，負離子模式，霧化氣(GAS1)：233 Pa，簾氣(CUR)：16 psi，去簇電勢(DP)：-20V，聚焦電勢(FP)：-80 V，去簇電勢2(DP2)：-20 V。質譜掃描質量范圍質荷比(m/z)100～800。
22樣品溶液和標準品溶液的制備
221樣品溶液的制備取丹參粉末05 g(過40目篩)，精密稱定，精密加入體積分數10%甲醇20 mL，浸泡30 min后，超聲提取30 min，放冷，3 000 r/min離心10 min，取上清液5 mL置25 mL量瓶中。殘渣加甲醇20 mL，浸泡30 min后，超聲提取60 min，放冷，3 000 r/min離心10 min，取上清液將上述25 mL量瓶補足至刻度，即得。
222標準品溶液的制備取對照品丹參素鈉、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮IIA適量，精密稱定，置同一容量瓶中，用甲醇溶解，制成含上述對照品102、126、113、106、137、118、762、100、114、122、119 μg/mL的溶液，作為對照品溶液。
23方法學考察
231精密度實驗取同一份供試品溶液，連續進樣5次測定，以丹酚酸B為參照峰，分別計算20個特征色譜峰的相對保留時間和相對峰面積sR值，均小于3%。說明儀器精密度良好。
232穩定性實驗取同一份供試品溶液，分別于1、3、5、7、9、12、24、48 h進樣測定，以丹酚酸B峰為參照峰，分別計算20個特征色譜峰的相對保留時間和相對峰面積sR值，均小于3%，說明樣品溶液在48 h內穩定。
233重復性實驗同一樣品粉末分別精密稱取5份，按照上述樣品制備方法制成供試品溶液，進樣檢測。以丹酚酸B峰為參照峰，分別計算色譜中20個特征色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的sR值，均小于3%。說明該方法的重復性良好。
24結果與分析
241丹參高效液相指紋圖譜主要色譜峰的LCMS鑒定以13個產地丹參藥材的共有模式作為丹參藥材的指紋圖譜(圖1)。在該指紋圖譜中，20個色譜峰被選為特征峰。通過與對照品比較相對保留時間(tR)，紫外光譜(UV)和液相色譜—質譜聯用(LCMS)質譜數據(見表2)，結合對照品和文獻[7-12]對照，確定了19個色譜峰的歸屬為1號峰丹參素，2號峰原兒茶醛，3號峰咖啡酸，4號峰丹酚酸D，5號峰丹酚酸G，6號峰丹酚酸E，7號峰丹酚酸C，9號峰迷迭香酸，10號峰紫草酸，11號峰丹酚酸B，12號峰丹酚酸A，13號峰異丹參酮IIA，14號峰羥基丹參酮IIA，15號峰丹參新醌A，16號峰丹參酮IIB，17號峰二氫丹參酮I，18號峰隱丹參酮，19號峰丹參酮I，20號峰丹參酮IIA。11號峰(丹酚酸B)既是該指紋圖譜中的最強峰，又是有效成分。故以其為參照峰，計算各特征峰的相對保留時間(tR)和相對峰面積(ARP)，結果見表3。表2丹參藥材中化學成分質譜數據及鑒定表313批不同產地藥材中20個特征峰的相對峰面積值
242丹參藥材UPLC指紋圖譜分析采用上述已建立的指紋圖譜方法，對13批丹參藥材進行指紋圖譜分析，得不同產地丹參藥材指紋圖譜，結果見圖2(彩圖頁第616頁)。為了說明丹參藥材之間的差異，引入總差異率pTD(%)的概念。差異率的定義是以每個特征指紋峰與相應的標準特征指紋峰的面積歸一化值間的差與標準特征指紋峰面積歸一化值的比值來表示兩者間的差異程度，總差異率則是將每個特征指紋峰的差異率求和即得。計算公式：
pTD=ΣniAs′-Ai′As′×n
其中，pTD 為總差異率，As′為標準特征峰面積歸一化值，Ai′為待比較藥材特征峰的面積歸一化值，n為特征峰個數。以pTD代表樣品圖譜與標準圖譜之間的相似度，當pTD>1時，表明待測樣品與標準樣品之間差異較大，說明待測樣品有可能非欲鑒定品種。當pTD
在本實驗中，選取13批丹參藥材樣品的特征峰面積歸一化值的平均值作為標準特征峰面積歸一化值(表4)，結果顯示：(1)這些丹參藥材的化學成分的分布具有相似性，每批藥材被檢測的色譜峰的數目幾乎相等。(2)丹酚酸B的色譜峰占非常高的比例，最高達6313%，最低有3598%，說明該化合物是藥材中主要成分之一。(3)水溶性成分中，丹參素的含量均較低，脂溶性成分以5個色譜峰為主(平均占總脂溶性成分的80%以上)。(4)就每一個化學成分來說，藥材之間的相互差異比較大，13批藥材統計處理，所有成分的sR均在20%以上。(5) 根據pTD值來看，13個產地或收集地的丹參藥材pTD值均小于1，說明13個樣品與標準樣品之間的相似度均較高。表4不同產地13批丹參藥材指紋圖譜共有峰面積歸一化值
3討論
丹參中的兩大類化學成分極性差異較大，文獻報道顯示采用HPLC對這兩類成分進行指紋圖譜分析，通常耗費時間長而且色譜峰之間并不能達到理想的分離度，較難在一張圖譜上直觀地比較這兩種成分之間的差異[1-6]。本課題在大量實驗的基礎上優選出合適的UPLC色譜條件，建立丹參的指紋圖譜，只需運行15min就可以將丹參的水溶性與脂溶性成分在同一張色譜圖上表征，且色譜峰之間有較好的分離度，達到了高分離度兼顧快速的目的，適合于大量復雜樣品的分析。
中藥的指紋圖譜研究中，HPLC法是最常用的分析技術，但是對于一些復雜體系如中藥的指紋圖譜研究，HPLC相對來說也是一種慢速技術，由于中藥中所含化學組分多，化學差異較大，為保證目標組分的分離度，需要較長的運行時間，有時也可得到理想的色譜參數如分離度、對稱因子和容量因子等。如何在得到理想的色譜參數的情況下，盡可能地縮短分析時間是科研人員比較關注的問題。UPLC的色譜柱采用了17μm的小顆粒填料，增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量，能顯著提高分離的效率從而達到縮短分析時間的目的。
本實驗中采用了UPLC技術建立丹參藥材的指紋圖譜。結果顯示，在15min中內即可獲得丹參水溶性成分和脂溶性成分的指紋信息。丹參藥材的UPLC指紋圖譜與HPLC指紋圖譜比較，色譜峰的個數、整體分布和峰形基本一致，但增加了最難分離物質對的分離度，增加了峰容量，減少了分析時間，說明UPLC比HPLC的分離能力強。
UPLC與HPLC具有相同的分離原理，因此UPLC色譜條件在HPLC條件的基礎上稍加優化即可得到理想的色譜圖結果。本實驗根據上述UPLC的色譜條件獲得了丹參藥材及其制劑的指紋圖譜，且與HPLC色譜指紋圖譜一致的結果，因此，采用UPLC 指紋圖譜方法具有靈敏、快速、簡便、準確等特點，適用于丹參藥材及其制劑的指紋圖譜研究和質量控制，值得推廣和應用。
參考文獻
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篇4
5 μm),柱溫30 ℃,甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65)為流動相,流速1.0 ml/min,檢測波長254 nm。結果 小薊中蘆丁的含量為0.580 8 mg/g。結論 經過系統的方法學考察,該方法具有簡便、專屬、穩定、可重復的特點,可用于小薊中蘆丁的含量測定。
【關鍵詞】 小薊；蘆丁；含量測定；高效液相色譜法
abstract：objective hplc was used to establish a method for determination of rutin in herba crisii. methods lichrospher c18 column (4.6 mm×200 mm, 5 μm) was used with methoanol-acetic acid (35∶65) as mobile phase, flow rate being 1.0 ml/min, column temperature at 30 ℃, detection wavelength at 254 nm. results the content of rutin in herba crisii was 0.580 8 mg/g. conclusions the method is proved to be simple, rapid, and accurate. it can be applied to content determination of rutin in herba crisii.
key words：cirsium setosum (willd.) mb.；rutin；content determination；hplc
小薊為菊科植物小薊[cirsium setosum(willd.)mb.]的干燥地上部分或根,具有涼血止血、祛瘀消腫的功能,可用于治療衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外傷出血、癰腫瘡毒等。小薊中所含有機酸中有蘆丁、咖啡酸等,文獻記載蘆丁、咖啡酸為其止血活性成分。本實驗采用高效液相色譜法測定小薊中蘆丁的含量,方法穩定、快速、重現性好。
1 實驗材料
1.1 儀器
lc-10at高效液相色譜儀,spd-10a檢測器,class-lc10色譜工作站；sartorius bp211d電子天平；shimadzu ay220電子天平；kq-500型超聲波清洗器。
1.2 試劑與藥物
甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所(批號0080-9705)。小薊藥材分別購自江蘇(南京醫藥股份有限公司,批號020313)、安徽(安徽省亳州市永剛飲片有限公司,批號031205)、上海(上海華宇藥業有限公司,批號040802),經本院藥用鑒定教研室陳建偉教授鑒定為小薊正品[cirsium setosum(willd.)mb.]。
1.3 色譜條件及系統適用性試驗
1.3.1 色譜條件的選擇
色譜柱：lichrospher c18(4.6 mm×200 mm,5 μm),柱溫30 ℃,流動相：甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65),流速1.0 ml/min；檢測波長：254 nm。對照品、樣品的高效液相色譜圖見圖1。
1.3.2 提取溶劑的考察
取本品2份,各1.0 g,精密稱定,置2個50 ml具塞錐形瓶中,分別加入50 ml甲醇和50 ml 40%甲醇,稱重,浸置1 h,超聲處理(功率500 w,頻率50 khz)40 min,補足稱重,濾過；微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。分別吸取上述2份溶液各10 μl,注入高效液相色譜儀,按外標法以峰面積計算。結果表明,以體積分數為40%甲醇為提取溶劑效果較好。
2 方法與結果
2.1 溶液制備
2.1.1 對照品溶液的制備
精密稱取蘆丁對照品0.98 mg,置25 ml容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.1.2 供試品溶液的制備
各取3個產地藥材粉末(過2號篩) 1.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別加入50 ml 40%甲醇,稱重,浸置1 h,超聲處理(功率500 w,頻率50 khz)40 min,補足稱重,過濾,微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。
2.2 線性關系考察
分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5 ml稀釋10 ml,依次精密吸取稀釋的對照品溶液10 μl注入液相色譜儀,測定其峰面積值,以蘆丁的濃度(g/l)為橫坐標,峰面積積分值為縱坐標,進行線性回歸。得回歸方程為：y＝25 845 255x－28 716, r＝0.999 6。結果表明,蘆丁在0.003 92～0.019 6 g/l范圍內具有良好的線性關系。
2.3 精密度試驗
吸取3號對照品溶液10 μl,重復進樣5次,測定其峰面積積分值,rsd＝1.503%。表明本法精密度較好。
2.4 穩定性試驗
分別于0、1、2、4、6、12、24 h精密吸取同一份供試品溶液20 μl進樣,測定其峰面積積分值,計算6 h內rsd＝1.972%。結果表明,供試品溶液在6 h內常溫保存基本穩定。
2.5 重復性試驗
取同一批號小薊樣品共5份,每份1.0 g,精密稱定,按供試品溶液的制備方法平行制備5份,分別進樣10 μl,每份測定2次,平均含量為0.703 5 mg/g,rsd＝1.129%。
2.6 回收率試驗
精密稱取小薊樣品6份,各1.0 g,分別精密加入蘆丁對照品適量,按供試品溶液的制備方法制備,每次進樣10 μl,每份測定2次,取平均值,計算加樣回收率,平均加樣回收率為98.70%,rsd＝2.88%。見表1。表1 蘆丁加樣回收率測定結果(略)
2.7 樣品測定
取3個產地的小薊樣品,按供試品溶液的制備方法制備,分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液,注入液相色譜儀,測量峰面積,按外標法計算,結果總平均值為0.580 8 mg/g。見表2。表2 小薊中蘆丁含量測定結果(略)
3 小結
對于小薊中蘆丁的含量測定,有人曾采用聚酰胺薄層掃描法[1],此法受薄膜表面光潔度、均勻度、厚薄等因素影響而不太穩定,張氏等[2]采用hplc法測定苦蕎麥中蘆丁含量。查閱文獻,還未曾有人用過hplc法測定小薊中蘆丁含量。本實驗采用hplc法測定蘆丁含量,具有簡便快速、結果準確可靠的特點,可以作為小薊藥材及飲片質量控制方法。
【參考文獻】
篇5
【關鍵詞】高效液相色譜法 刺五加 藥品檢測
中圖分類號：R927 文獻標識碼：B 文章編號：1005-0515（2012）1-343-02
高效液相色譜法（high perfornance liquid chromatography）是被納入我國藥典的主要色譜分析法其固定相均勻規則，分辨率高，傳質阻抗小，多用于藥品檢驗，尤其是其對中藥類成分的定性和定量檢測被廣泛應用于中藥領域[1]，本文采用高效液相色譜法對刺五加的主要活性成分刺五加甙B的含量進行了檢測，現報告如下：
1 儀器與材料
SPD10A型紫外檢測儀，四元泵，高速離心機，電子秤量分析天平（上海市化學儀器廠），HP1100型HPLC色譜儀。
用于檢測的刺五加產地為吉林省長白山，其對照品刺五加甙B由中國生物藥品制品檢定所提供，產品編號為111498-201004。
以乙腈為色譜純（江蘇化學制劑廠），水為重蒸水，甲醇（山東省禹王藥物制劑有限公司），0.1%磷酸水溶液為分析純（中國藥科大學制藥廠）。
2 方法與結果
2.1 HPLC色譜條件 以Kromasil ODS為色譜柱（4.6mm×250mm），以濃度0.1%磷酸水溶液/乙腈（80/20）為流動相，波長為230nm，在25℃，流速為0.8mL/min的條件下進行HPLC檢測。
2.2 配制待測樣品溶液 將待測的刺五加（吉林長白山）洗凈，取其莖部和根部組織，切成長約1cm的薄皮，置入干燥箱行高溫烘干（75℃），待失去水分后碾成粉末狀，使用電子分析天平精確秤量莖部和根部的樣品各0.5g，加濃度為50%的甲醇溶液20mL于100mL燒杯，連同樣品一起混合，經1h回流提取，取得樣品濾液由50%濃度甲醇進行溶解轉移，并用25mL容量瓶進行定容，取適量濾液進行高速離心機離心（12000r/min）,用時為5min，待靜置后，其上清液即為待測樣品溶液。
2.3 配制對照溶液 使用電子分析天平精確秤量刺五加甙B（中國生物藥品制品檢定所）5.65mg，加濃度為50%甲醇溶液于5mL容量瓶中，與對照品混合溶解進行定容，制成對照儲備溶液，取儲備溶液1mL于25mL容量瓶進行稀釋，加濃度為50%甲醇溶液至刻度，得到刺五加甙B濃度為44.31μg/mL的對照品溶液，放入冰箱5℃儲存待用。
2.4 HPLC檢測
2.4.1 HPLC色譜圖分析
在波長為230nm，柱溫為25℃，流速為0.8mL/min的條件下進行HPLC檢測，可見刺五加甙B對照品的保留時間為11.7min，并在色譜圖上表現出很好的與其他成分進行了分離。
2.4.2 HPLC線性關系分析
取制備好的刺五加甙B對照品溶液，分別稀釋配制成濃度為44.31μg/mL，35.55μg/mL，
26.78μg/mL，14.50μg/mL，4.28μg/mL，2.98μg/mL，對HPLC色譜儀加樣20μL進行檢測，記錄不同濃度對照品溶液色譜圖，以峰值面積為縱軸，樣品濃度為橫軸，制得PHLC標準曲線圖，分析其線性關系，計算刺五加甙B的線性方程為y=62.337x+2.4316，濃度范圍值為2.98μg/mL～44.31μg/mL ，r為0.9997。
2.4.3 測試加樣回收率
用電子分析天平稱取制備的待測刺五加粉末0.5g，稱取5次后，均混入對照品溶液，使用HPLC色譜儀進行檢測，測得刺五加甙B的5次測樣的回收率平均值為99.6%，測得其RSD為1.9%。
2.4.4 HPLC檢測刺五加甙B穩定性
采用HPLC色譜儀加樣測試待測樣品液，濃度為2.98μg/mL，加樣量每次為20μL，共加樣5次，每次間隔2h，測算樣品液的峰值面積和刺五加甙B的RSD，經HPLC測得其RSD為1.7%，在8h內樣品具有很好的穩定性。
2.4.5 HPLC測定的重現性
電子分析天平稱量樣品粉末0.5g，稱樣5次后，再次制備待測樣品溶液，重復測定刺五加甙B的RSD值，實驗測得其樣品的RSD值為1.8%，證明HPLC檢測樣品含量有很好的重現性。
2.5 待測樣品的刺五加甙B測定
采用HPLC對制成的待測根部樣品和莖部樣品進行刺五加甙B含量的測定，共進行3次加樣，具體數據見表1。
表1 吉林長白山刺五加根部和莖部的刺五加甙B含量
3 討論
據《中華國家藥典》有關記載刺五加的主要活性成分是刺五加甙B和刺五加甙E[2]，該兩種成分主要存儲于刺五加的根部和莖部[3]，本文通過對吉林長白山的刺五加樣品的測定證明其莖部的刺五加甙B含量遠遠高于根部，采用高效液相色譜法以乙腈為色譜純（江蘇化學制劑廠），水為重蒸水，甲醇（山東省禹王藥物制劑有限公司），0.1%磷酸水溶液為分析純（中國藥科大學制藥廠），測得在濃度為2.98μg/mL～44.31μg/mL的范圍內，其峰值面積分值RSD為為1.9%，回收率為99.6%，r為0.9997，這表明高效液相色譜法在測定刺五加甙B的含量上準確有效，重現性好，穩定性高。
參考文獻
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篇6
【關鍵詞】 芹菜籽；，，3-正丁基苯酞；，，高效液相色譜法
摘要：目的高效液相色譜（HPLC）法測定芹菜籽中3-正丁基苯酞的含量。方法采用YMC ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為乙腈酯酸鈉（45∶55），酯酸鈉0.05 mol?L-1，冰酯酸調節pH4.6；檢測波長為228 nm；流速為1.0 ml?min-1；柱溫：40℃。結果3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范圍內線性關系良好，r= 0.999 7，方法的回收率為98.19%，RSD為1.38%（n=5）。結論 該方法能夠準確可靠地測定3-正丁基苯酞的含量，可作為芹菜籽的質量控制指標之一。
關鍵詞：芹菜籽； 3-正丁基苯酞； 高效液相色譜法
Determination of 3-n-Butylphthalide in Celery Seed by HPLC
Abstract：ObjectiveTo establish a method for determining 3-n-butylphthalide in Celery Seed by HPLC.MethodsYMC C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-sodium acetate(45∶55) with flow rate 1.0 ml?min-1. The detection wavelength was set at 228 nm and the column temperature was 40℃. ResultsThe linear range of 3-n-butylphthalide was at the range of 0.044 1 ~0.161 7 μg (r=0.999 7，n=5) ，the average recovery was 98.19%，and RSD was 1.38%(n=5). ConclusionThe method is rapid， highly accurate and precise. It can be used to control the quality of Celery Seed.
Key words：Celery Seed; 3-n-butylphthalide; HPLC
芹菜籽是傘形科旱芹屬植物芹菜Apium graveolens L.的種子。在我國維吾爾醫藥中主要用于治療高血壓病、關節炎、類風濕關節炎、氣滯性子宮炎、腹水、腎臟等疾?。?］。3正丁基苯酞（3nbutylphthalide）是從芹菜籽中提取的藥理活性成分，目前已經被開發成腦血管病領域的國家一類新藥，具有抗腦缺血、減輕腦損傷等作用［2，3］。因此有必要對芹菜籽征性成分進行定性、定量研究。本實驗以HPLC法測定芹菜籽中3-正丁基苯酞，為科學評價芹菜籽的藥材質量，制定規范、合理、可行的質量控制提供依據。
1 儀器與試藥
Waters公司MICROMASS ZQ液質聯用儀（Waters 996型二極管陣列檢測器，Waters 2690液相分離系統）； METTLER TOLEDO DELTA 320 pH計。乙腈（色譜純，USA Tedia公司）；Triton X-100（Sigma公司）；三水乙酸鈉（C2H3NaO2?3H2O，優級純，天津市光復精細化工研究所）；冰乙酸（分析純，北京化工廠）。 3正丁基苯酞對照品（自制，質量分數99%）。芹菜籽經中科院新疆生態與地理研究所克力木副研究員鑒定。
2 方法與結果
2.1 色譜條件YMC C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈酯酸鈉（V∶V=45∶55）；酯酸鈉0.05 mol?L-1，冰酯酸調節pH 4.6；體積流量1.0 ml?min-1；檢測波長228 nm；柱溫40℃。
2.2 對照品溶液的制備取標準品14.7 mg，置于10 ml容量瓶中，加入1 ml 10% Triton X-100振搖使溶解后用流動相定容，搖勻，作為貯備液；移取貯備液1 ml置于100 ml容量瓶中，用流動相定容，搖勻，制成3正丁基苯酞質量濃度為0.014 7 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備稱取干燥的芹菜籽10 g，分別用100，80 ml和60 ml的70%乙醇回流3，2 h和1 h，總共提取3次，合并濾液，濃縮得到的粗提物水分散后用8倍體積的石油醚萃取5次，得到石油醚萃取的樣品。取38.7 mg樣品， 置于25 ml容量瓶中，加入2 ml 10% Triton X-100振搖使溶解后用流動相定容，搖勻，作為貯備液；移取貯備液1 ml置于10 ml容量瓶中，用流動相定容，搖勻，作為供試品的溶液（0.155 mg/ml）。
2.4 標準曲線的繪制 精密吸取對照品溶液，分別進樣3，5，7，9，11 μl，記錄各樣品的色譜圖。以對照品溶液進樣量C為橫坐標，峰面積A為縱坐標作標準曲線，結果表明3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范圍內線性關系良好，回歸方程：A =21 734 000 C + 23 475，r= 0.999 7?？瞻讓φ?、對照品和供試品的色譜圖分別見圖1~3。
圖1 空白對照色譜圖（略）
圖2 對照品色譜圖（略）
圖3 供試品色譜圖（略）
2.5 精密度實驗精密吸取0.014 7 mg/ml 3正丁基苯酞對照品溶液，連續進樣6次，5μl/次，按上述色譜條件測定，峰面積分別為1 647 597，1 626 279，1 645 968，1 665 844，1 639 422，1 614 002，RSD=1.10%，表明儀器的精密度良好。
2.6 穩定性實驗 精密吸取供試品溶液（0.155 mg/ml）5 μl，分別在0，2，4，6，8，10 h進樣，按上述色譜條件測定，峰面積分別為1 568 873，1 622 012，1 588 530，1 615 787，1 600 297，1 622 424，RSD為1.33%，表明供試品溶液在10 h內基本穩定。
2.7 重現性實驗取同一批的樣品5份，按上述樣品溶液的制備操作和色譜條件測定，RSD=0.77%（n=5）。結果顯示，該方法具有較好的重現性。
2.8 加樣回收率實驗取已知含量的樣品，精密加入一定量的對照品，平行操作5份，按上述條件進行測定。結果見表1。
表1 加樣回收率實驗（略）
2.9 樣品的測定按2.3方法制備樣品，按2.1色譜條件對3批樣品進行含量測定。結果見表2。
表2 樣品測定結果（略）
3 討論
3.1 本實驗考察冷浸和熱提萃取處理兩種提取方式，結果采用乙醇提取石油醚萃取得到的含量比冷浸處理得到的含量高，提取更完全，故采用熱提萃取法。
3.2 對照品和供試品均為油狀物，所以加入表面活性劑Triton X-100促其溶解，為保證基線平穩，Triton X-100的加入量控制在1%。
參考文獻
［1］ 新疆維吾爾自治區衛生廳.維吾爾藥材標準（上冊）［S］.1993：8.
篇7
關鍵詞：超高液相色譜技術；藥物分析；應用研究
1 概述
超高效液相色譜技術在藥物分析領域具有分析速度快、靈敏度高、藥品的分離效率高、適用范圍更廣等特點，其測試全自動化，藥品成分容易吸收且處理方法簡單的特點，使得它在市場中占有一定的主導地位。隨著社會的不斷發展以及不斷更新的科學技術，超高效液相色譜儀逐漸出現在人們的視野中。它擁有高效液相色譜技術的所有優勢，而且還具有超高速、超高靈敏度和極高分辨率的性能，被人們稱為現代液相色譜法的另一個發展方向。研究表明，超高液相色譜技術在藥物分析領域的能力已經令人信服，其卓越的性能也已被證明。在文章中，筆者從超高液相色譜技術的技術點本質出發，對什么是超高效液相色譜法，超高效液相色譜技術有哪些優勢和缺點進行描述，對超高效液相色譜法在藥物分析的應用做出了詳細的介紹。
2 什么是超高效液相色譜技術
2.1 超高效液相色譜技術的原理
超高液相色譜技術是以范德米特方程作為理論基礎，和高效液相色譜法的原理相同。具體公式為HETP=Ad P+B/v+Cd P2v，式中HETP代表理論塔板高度，A是渦流擴散系數，dP代表填料顆粒的尺寸半徑，B表示分子的擴散系數，C表示傳質因子，v表示移動相線速度。該公式的含義是：顆粒的粒徑越小，色譜的柱效率將更高。顆粒的粒徑不同，其最佳色譜的效果就不一樣；粒子的粒徑越小，最高柱流速將會向流速大的方向移動；顆粒尺寸越小，其線速度的范圍就更廣泛。由此可以得出結論：降低粒徑的尺寸大小，不但可以提高色譜柱的效率，而且還可以提高速度。也就是說色譜分辨率同填料顆粒的粒徑大小成反比關系。經過有關人員的研究發現，當填料顆粒的粒徑小于2N，m時，理論塔板高度的最低范圍將被擴大，即小于2N，m的粒徑相比于較大的微粒能夠獲得更大的流速范圍，色譜柱的效果也會增加，可以在沒有損失的前提下增加微粒的流速和粒子的分析速度。
2.2 超高效液相色譜技術的原理的優點
超高效液相色譜的分離原理與高效液相色譜技術相同，但相對來說，超高效液相色譜技術的性能較好且具有更高的速度、靈敏度和分辨率。超高效液相色譜技術在線速度較大或者高壓下環境下依然可以實現良好的效果，對樣品進行高效的分離。超高效液相色譜技術使用的粒徑為1.7N，m，它比粒徑為5N，m的色譜柱提高了三倍的長度。與此同時，其柱不變，就可以使得分析是在提高3倍流速下進行的，大大縮短了分析時間。超高效液相色譜技術主要是通過減少顆粒的粒徑的方法，讓顆粒的色譜峰變窄，從而可以提高檢測的靈敏度。超高效液相色譜法與高效液相色譜法相比大大地提高了分辨率，更有利于對雜質樣品進行離子化，有助于對基質雜質進行分離，提高檢測靈敏度。
2.3 超高效液相色譜技術的原理的缺點
超高效液相色譜技術雖然具有很多優勢，但在實際的應用過程中，也仍然存在一些問題和不足。比如說：超高效液相色譜儀器在性能方面雖然要高于高效液相色譜儀器，但是價格也會隨著大大地增長，這就會限制該儀器和技術的推廣，不能達到普及應用的目的；由于超高效液相色譜法技術對藥物分析具有較高的要求，這就使得加工精度很難把握。生產該機器的廠家少，進樣的數量也少，而且還使用半環的方式注入，這就會導致其峰值面積的重復性較差。與此同時，因為色柱譜的顆粒半徑非常細微，為了避免色譜柱被樣品堵塞，對樣品的要求也比較嚴格。
3 超高效液相色譜技術在藥物分析領域的應用
3.1 制劑藥物分析
在進行藥物分析時，往往樣品的含量非常少，在進行分析分離時非常困難，所浪費的時間也比較多。因此，我們迫切需要一個能夠提高分析速度，提升分離效率的技術，其應該具有靈敏度高、精確度高的特點。超高效液相色譜技術在解決這些問題時，就提供了強有力的支持，逐步顯示出其具有良好的發展前景。對A1z、AzZ和A3z這三種化合物的研究分析中，在保證分析效果相同的前提下，使用超高效液相色譜技術可以大大地縮短分析時間，其精度和靈敏度也相比于其他技術要好很多。超高效液相色譜技術適合用于常規藥物的分析，使用混合模式的固相萃取和超高效液相色譜技術同時使用測定相應的藥物成分。其最終的分析結果可以達到美國食品和藥物管理局在精度和準確度方面的要求。
3.2 生物基質中藥物的分析
藥物代謝涉及到藥物人體內的吸收、分布、代謝和排泄，包括對藥物及其在復雜基質中的代謝物的分離，以及對痕量分析的結構鑒定。目前，生物體的體液系統中含有非常多的相對分子質量相同、保留時間相同的復雜成分。與此同時，藥物正在向著低劑量的方向發展，這就會給現有技術提出難度，使得常規的分離技術和痕量成分的檢測難以滿足在精度方面的要求。能否在許多具有相同保留時間的干擾組分影響下，快速識別出代謝產物依賴于高效的色譜分離和敏感度極高的分辨質譜技術。超高效液相色譜技術在藥物代謝產物分析中，就充分體現了高敏感性和專屬性特性，并且可以在同一時間段內對多種組分濃度進行測定，可以達到樣品分析測量高效率的要求。
3.3 中藥質量控制
中藥中含有多種復雜結構的化學成分，使用超高效液相色譜技術進行分析時，能夠迅速地檢測多種化學成分，具有速度快、靈敏度高的特點，因此在中國傳統醫藥化工分析和質量控制中具有良好的應用前景。通過對比超高效液相色譜技術和高效液相色譜技術對羊藿、冬蟲夏草、三七、丹參等中藥的藥物分析結果，超高效液相色譜技術不僅體現在速度更快的分析時間，更重要的是超高效液相色譜技術可以使得小顆粒填料后的分離度也得到了提高。使用超高效液相色譜技術測定羊藿黃酮類成分時，與高效液相色譜技術相比分離程度得到了大大的改善。在中國中醫藥的多種組分分析過程中，其化合物種類多、數量不明確、含量差異也比較大的特點一直是技術分析的瓶頸問題。現在將超高效液相色譜技術引入多組分的中國醫藥分析中，可以建立一個更有利的分析平臺。
4 結束語
超高效液相色譜技術是近年來一種新型的技術。在近幾年的使用過程中，人們發現超高效液相色譜技術在藥物分析領域正在發揮著越來越大的優勢，廣泛開闊了現代色譜技術的應用前景。其注射體積小、耗電少、快速分離的特點被廣泛應用于天然和合成藥物組合物的分析技術、藥物的代謝產物分析等，是一種更有效、更準確、更精細的一種分析技術。盡管超高效液相色譜的儀器成本高，樣本量也較少，容易出現色柱堵塞，對使用技術的要求也更高等缺點和不足，但是隨著技術的發展和填料注入技術的不斷改進，藥物分析的方法也在逐步變化中。我們相信超高效液相色譜技術將會在藥物的分析中扮演越來越重要的角色，不斷推動藥物分析的發展，更好地造福人類。
參考文獻
[1]印成霞.超高效液相色譜法在藥物分析中的應用研究[J].中國實用醫藥，2013，23.
篇8
【關鍵詞】 靛玉紅； 青黛； 高效液相色譜法
Abstract:ObjectiveTo establish the method of determination of indirubin from Indigo Naturalis. Methods HPLC was employed， which chromatographic column was spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)， mobile phase was methanol0.1 mol/L of ammonium acetate， flow rate was 1 ml/min， detection wavelength was 280 nm and column temperature was 35℃. ResultsA good linear correlationship was obtained when indirubin content ranged from 5.98 μg/ml to 59.8 μg/ml(r=0.999 5). Average recovery was 99.87%， RSD was 1.31%. ConclusionThis method is simple， rapid， reliable and suitable for assay of indirubin from Indigo Naturalis.
Key words: Indirubin; Indigo Naturalis;
HPLC
青黛為十字花科植物菘藍Isatis indigotica 、爵床科植物馬藍Baphicacanthus cusia 、豆科植物木藍Indigoferas tinctoria 、蓼科植物蓼藍Polygonum tinctorium等的葉或莖葉，經加工制得的干燥藍色粉末或團塊，是常用中藥。近年來研究發現， 靛玉紅是青黛中的抗癌有效成分，主要抑制白血病細胞的DNA合成。為了有效控制其質量，制定科學的質量檢測標準，確保療效，本文采用高效液相色譜法測定其活性成分靛玉紅的含量。
1 儀器與試藥
1.1 儀器Shimadzu HPLC儀 ，LC10ATVP溶液輸送泵， SPD10AVP紫外可見檢測器，SLC10AVP控制器，CTO10ASVP控溫箱，LcSolution工作站。
1.2 試藥青黛(福建仙游)，靛玉紅對照品(中國藥品生物制品檢定所，717200204，供定量測定用)，甲醇為色譜醇；乙酸銨、醋酸乙酯為AR）。
2 方法與結果
2.1 色譜條件色譜柱為Spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)；流動相為甲醇0.1 mol/L乙酸銨(65∶35)；流速為1 ml/min；檢測波長為280 nm；柱壓為5.4 MPa；柱溫35℃ ，Shimadzu SPD 10AV 紫外檢測器。進樣量10μl。理論板數按靛玉紅色譜峰計算不低于2200，靛玉紅色譜峰與相鄰峰之間的分離度均大于1.5。
2.2 對照品溶液的制備精密稱取靛玉紅標準品2.99 mg， 加適量醋酸乙酯超聲溶解，并定容于25 ml容量瓶中，配制成濃度為119.6 μg/ml的對照液。
2.3 供試品溶液的制備準確稱量青黛1.3 g，置索氏提取器中，用醋酸乙酯提取，然后移到50 ml容量瓶中，用醋酸乙酯定容，混勻后用微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。
2.4 標準曲線的制備分別精密吸取對照品溶液0.5，1，2，3，4，5 mI 置于l0 ml量瓶中，用醋酸乙酯定容，搖勻并用微孔濾膜濾過。依次進樣10 μl，按上述色譜條件操作，以峰面積分值為縱坐標，相應濃度為橫坐標繪制標準曲線，進樣線性回歸，得回歸方程y=4 786.5x +31 185(r=0.999 5)，結果表明靛玉紅在5.98～59.8 μg/ml范圍內線性關系良好。
2.5 精密度實驗取同一靛玉紅對照品溶液連續進樣5次，10 μl/次，根據峰面積計RSD=0.5%。
2.6 穩定性實驗取同一樣品溶液分別在制備后12，24，36，48，60，72，84，96 h分別測定1次峰面積，結果RSD=0.8%，表明樣品至少在4 d內穩定性良好。
2.7 重現性實驗取同一批樣品(批號20060401)3份，按上述色譜柱條件測定其含量，結果平均含量為3.0 %，RSD＝0.9% 。
2.8 加樣回收實驗在已知含量的樣品(同批號20060401)供試液中，加人不同量的靛玉紅對照品，按照含量測定方法進行測定。結果見表1。表1 回收率實驗結果（略）
2.9 樣品測定
按上述方法，對樣品中靛玉紅的含量進行測定。靛玉紅對照品溶液及批號20060601樣品的HPLC見圖1～2，測定結果見表2。表2 樣品測定結果（略）
3 討論
流動相的選擇：曾實驗多種流動相，結果發現以甲醇－0.1 mol/L乙酸銨(65∶35)，樣品中靛玉紅與其它成分可達到基線分離，空白對照液亦無干擾。
溶劑的選擇：曾選用氯仿［1］和醋酸乙酯作溶劑實驗。結果發現以醋酸乙酯作溶劑靛玉紅與靛藍可完全分離，分離效果與峰形均好。
本文用HPLC法測定青黛中靛玉紅的含量，實驗證明，本法具有操作簡便、快速、結果可靠、易于掌握的特點，是較理想的靛玉紅質量控制方法。至于靛玉紅含量的控制范圍，有待進一步研究。
篇9
【關鍵詞】 咪達唑侖高效液相色譜法血藥濃度
【中國分類號】R969【文獻標識碼】A【文章編號】1044-5511（2011）11-0491-01
咪達唑侖（咪唑安定）是一個短效的水溶性苯二氮卓類藥物，是咪唑苯二氮卓衍生物之一。與地西泮的油溶液相比，水溶性可將注射疼痛及血栓性靜脈炎的發生降低到最小，咪達唑侖常于手術局麻時作為鎮靜催眠藥，較高劑量則用于全身麻醉誘導劑［1］由于其較短的消除半衰期（1.5~2.5h）［2］,并且臨床上缺乏理想的長效制品，這就使咪達唑侖更適合作為鎮靜劑長時間推注。值的注意的是，在使用高劑量作誘導麻醉時，在反應上有個體差異，有資料顯示，給予咪達唑侖0。3mg.kg-1iv，從開始給藥致意識喪失的時間存在著個體差異，50a以上患者意識喪失比年輕人快［1］，本文采用高效液相色譜法測定血漿中咪達唑侖的方法，為臨床進一步研究其血藥濃度與藥效學之間的關系，探索合理有效的給藥劑量提供一定幫助。
1 材料與方法
1．1儀器與試藥waters515HPLC pamp；waters2487紫外檢測器；杭州英譜HS色譜數據工作站；80-2離心沉淀相，咪達唑侖水針劑（江蘇恩華制藥有限公司，批號B363MFD191998）；地西泮（北京益民制藥廠，批號9801017）甲醇（HPLC，上海吳涇化總廠）；二乙胺（上?；瘜W試劑總廠附屬上海試劑三廠）乙腈（HPLC級，上海方可唯寄生物化學技術有限公司）；乙醚、磷酸均為分析純。
1．2溶液配制：咪達唑侖溶液精取咪達唑侖水針劑1mL，量100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成0.05mg.mlL1的標準溶液備用，地西泮內標溶液，精稱地西泮10mg置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制成0.1 mg.mL-1的內標溶液備用。
1.3色譜條件: 色譜柱：waters Nov-pak G18（4um.3.9mm×150mm）；Alltech保護柱C1830μn。檢測波長：225nm。靈敏度：2AUFS。流動相：甲醇一水（60：40，V/V）,含乙腈1%、二乙胺0.1%、磷酸0.05%。流速：0.6 mL.min-1。
1.4樣品預處理：取含有咪達唑侖的人血清0.5mL。置于10mL具塞試管中，加地西泮內標溶液5uL，渦旋混和加3mol.L-1Naoh溶液0.5mL，渦旋振蕩，加提取液乙醚3mL，渦旋振蕩2min，以4000r. min-1轉速離心分離2 min，取上層提取液重復提取一次，合并提取液，以40℃氮氣吹干，加甲醇50μL回提，取回提取液20μL進樣。
2、結果
2．1咪達唑侖及內標色譜，用上述提取方法及色譜條件得到血清色譜圖見圖1顯示咪達唑侖與內標峰完全分離，保留時間分別為（11.21±0.58）min和（9.41±0.39）min見圖Ⅰ
2．2標準曲線取人血清0.5mL,加適量標準液，配成濃度為0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2. 0ug.mL-1的標準血清，加地西泮內標液5μL，按上述提取方法及色譜條件進行測定。以咪達唑侖濃度為χ軸，以測定的咪噠唑侖與地西泮的峰面積比為Y軸進行線性回歸。結果表明，樣品在0.1~0.2 ug.mL-1范圍內線性良好，回歸方程為：Y=P×10-4X－9.17×10-2，r=0.9998。最低檢測濃度為0.05 ug.mL-1。
2.3精密度及回收率.日內精密度及回收率:在同1d內配置3種不同濃度咪達唑侖的血清樣品,按上述方法提取,分別測定5次,計算的內平均濃度,RSD及相對回收率,結果見表Ⅰ。 日間精密度及回收率：取3種不同濃度的咪達唑侖血清樣品分別在3d內提取，測定結果見表Ⅰ
3 討論
咪達唑侖的化學名為8-氯-6-（2-氟苯）-1-甲基-4H-咪唑［1.5-a］［1.4］苯丙二氮卓，以鹽酸或馬來酸鹽形式存在。本方法根據其結構特點，先堿化使其以分子形式存在，再用有機溶劑提取，揮干后以甲醇回提。用分析純的乙醚提取，雜質峰多選用蒸溜乙醚提取后，減少了雜質峰的干擾，而且乙醚來源易的，價廉毒性較低。流動相的摸索過程中，先后選用了不同配比的甲醇和水作為流動相，發現甲醇一水（60：40V/V）含乙腈1%，磷酸0.05%的比例較好,但咪達唑侖和內標峰分離不太理想,峰型稍有拖尾,加入二乙胺期望改善峰形。經比較含二乙胺0.1%流動相能使內標峰和咪達唑侖峰完全分離,且峰形致改善。
堿化過程中,先后對不同濃度的Na oH及不同用量作了比較,發現無明顯差別為保證咪達唑侖堿化完全,我們選用了3mol.L-1NaoH,,用量以0.5mL為宜.。
本文用高效流相色譜法測定血清中咪達唑侖的濃度,提取方法簡便,提取溶劑,流動相價廉易的,毒性低,方法線性良好重現性理想,適合臨床進行誘導麻醉劑量的探索研究及藥動學的研究.
參考文獻
［1］Dandee jn,Haliday Nj Harper KW et al Midaxolam;areview of its Pharmacological properties and therapeutic use［1］Drags 1984.28 519
篇10
【關鍵詞】流動相配制 體積比 質量比 高效液相色譜法
【中圖分類號】O657.72 【文獻標識碼】A 【文章編號】1674-4810（2013）33-0172-01
高效液相色譜法中的流動相主要用水性溶劑、有機溶劑或它們的混合液，另外水性溶劑也常用于緩沖液。常因資料上表示的內容和實際的配制方法不同，而產生流動相的差異，影響了色譜圖和分析結果。本文以具體的事例研究流動相調制方法對分析結果的影響。
一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合可調制再現性較好的混合溶劑，但由于操作較麻煩，通常多用體積比混合。因此，只要沒有特別標明，就可按體積比進行混合。但在特殊情況下，如胺類粘度高的溶液混合時，有時用重量—體積比（W/V）的方法。
一 有機溶劑和水性溶劑的混合方法
有機溶劑和水性溶劑的混合液作為流動相是經常的，但由于混合方法不同，有時分析結果相差很大。如20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）90%與乙腈10%的混合液，混合比為9∶1時，20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）90%與乙腈10%的體積比為9∶1，也就是可以解釋為各自按體積比例的相當量稱取后進行混合。另外，按10%乙腈解釋，用20mM磷酸鈉緩沖液（pH 2.5）將乙腈稀釋調制也可以成立。在后者情況下，產生混合體積減少部分，余下的添加20mM磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別，但由于混合方式不同，分析結果，特別是保留時間，也會有顯著的差別，這點必須注意。
二 50%或（V/V=1/1）乙腈水溶液的配制方法
對于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液，多按這種方法進行：用量筒測定乙腈500ml，用另一量筒測定水500ml，兩種液體在瓶內充分搖晃混合。
不過50%乙腈水溶液的表示時，同樣也多是按上述方法配制，但查化學辭典時，實際上是按這種方法進行配制：首先將500ml乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶邊攪拌邊加水，等待液溫達到室溫，用全量水，使溶液到1L。
這樣一來，用%表示和“V/V”體積比表示，最終得出的流動相組成不同。也就是說，混合溶劑的密度，與由原溶劑密度計算的單純平均值不相同，所以用上述兩種方法調制的流動相組成差異。如在室溫（25℃）附近水50ml和乙腈50ml混合時體積不是100ml，而有所減少，約為96ml。在一般情況下，多用操作簡便的第一種方法。
三 溶劑體積的溫度影響
如前所述，溶液的密度受周圍溫度的影響。剛從溶劑冷藏箱拿出來的溶液溫度與實驗室的室溫相比，要低不少，乙腈和水混合液因發熱反應，溶液溫度升高。因此，為能調制再現性好的流動相，建議在使用前用水?。ɑ驘崴。⒁簻卣{到接近室溫。
四 用兩臺泵進行溶劑混合
