凝膠滲透色譜范文
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篇1
中圖分類號：TS207 文獻標識碼：A 文章編號：1007-3973（2013）007-131-02
農藥，以造福人類，提高農產品的產量走進了我們的世界，但是隨著農藥的廣泛使用，大量食用含有農藥殘留的食品會導致機體正常生理功能失調，引起病理改變和毒性危害，它對人類健康，生態環境構成了嚴重的威脅。食品安全問題已經受到各國政府的密切關注，目前，農藥殘留分析技術已經不能滿足當前社會的需求，GPC-GC/MS在線聯用技術具備樣品處理簡單，分析時間快、溶劑使用量少，定性準確等優勢，近幾年，逐漸受到食品檢測工作者的青睞。在線GPC-GC/MS已經用于糧食、蔬菜、水果、堅果等中的多農藥殘留分析。
1 在線GPC-GC/MS簡介
GPC-GC/MS主要包括兩部分：凝膠滲透色譜和氣相色譜/質譜。GPC主要目的是去除樣品基質中可能干擾目標化物檢測的大分子油脂、色素等組分。系統流路圖如圖1，GPC根據尺寸排阻原理先將分子量較大的脂肪和色素等先從色譜柱中洗脫，通過六通閥位置的切換將這些基質干擾物排出系統，之后將所需檢測物質導入試樣捕集環中，最后導入GC/MS進行分離檢測。
圖1 系統流路圖
2 在線GPC-GC/MS在農藥殘留分析中的應用概況
2.1 蔬菜、水果中的農藥殘留測定
苯氧羧酸類農藥憑借其高效、內吸、高選擇性的特征廣泛用于農業生產中，目前在土壤、水體等環境樣品及糧谷類農作物中已經測出苯氧羧酸類農藥。張帆等建立了水果中的11種苯氧羧酸類農藥在線GPC-GC/MS分析方法。該方法在0.02～0.10mg/kg加標范圍內，回收率為66%～112%，相對標準偏差為3.4%～11.5%，定量下限為7～10 g/kg。在柑橘樣品中11種苯氧羧酸類農藥均有檢出；香蕉中檢測出2，4-D，含量為0.058mg/kg，其他農藥成分未檢出。歐陽運富等將蔬菜、水果樣品經二氯甲烷-丙酮（1：1，v/v）加速溶劑提取，活性炭柱-氨基柱串聯凈化結合在線GPC-GC/MS分析了22種農藥殘留，在0.02， 0.05， 0.4mg/kg 3個添加水平下的回收率為70.5%～107.5%，相對標準偏差為2.1%～8.7%。在線GPC-GC/MS把GPC凈化和GC-MS分析檢測合二為一，自動化除去為除盡的干擾物質，保證了方法的可靠性和有效性，大大的提高了分析的準確度和有效性。薛麗等利用固相萃取-在線GPC-GC/MS測定了梅菜干中18種有機磷和擬除蟲菊酯農藥殘留，該方法的農藥回收率均在80%～120%之間，精密度均小于15%。
2.2 堅果中農藥殘留測定
吳巖，康慶賀等線GPC-GC/MS測定板栗、松子仁中多農藥殘留分析。板栗經乙腈-水（4：1，v/v）為提取劑，ENVI-18固相萃取柱凈化，除去樣品中的大量脂肪和甾醇等干擾基質，在經過在線GPC進一步凈化，最后經過GC/MS分析。44種有機磷農藥中大部分農藥的回收率為65%～120%，相對標準偏差小于15%，檢出限為0.002～0.05mg/kg。松子仁也用同樣的方法進行了處理，與板栗不同的是提取液經Aluminum-N固相萃取柱凈化。28種有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥的回收率為70%～120%，相對標準偏差小于15%，檢測限為0.002～0.05mg/kg。固相萃取結合在線GPC-GC/MS有效的解決了低水分高脂質樣品前處理復雜、基質干擾嚴重的難題。
2.3 茶葉中農藥殘留測定
茶葉作為我國對外出口的傳統商品，近年來，歐盟等國對進口茶葉的農藥殘留限量標準日趨嚴格。因此，茶葉的農藥殘留檢測成為我們面臨的共同問題。李軍明等利用乙腈萃取、ENVI-carb固相萃取柱凈化結合在線GPC-GC/MS測定了普洱茶、綠茶、紅茶、烏龍茶中的153種農藥殘留量。該方法檢出限能夠滿足歐盟等國的限量要求，為茶葉中的多農藥殘留提供了檢測方法。
2.4 糧食作物中農藥殘留測定
糧食作物作為人們生活的基本食品，糧食安全與人的生活息息相關，各個國家對糧食中的農藥殘留都設有嚴格的限量標準。糧食中含有高的脂肪和淀粉，使得糧食中農藥殘留的測定樣品前處理方法較為復雜。近年利用在線GPC-GC/MS測定糧食中的農藥殘留減少了樣品前處理的繁復過程，縮短了分析時間，挺高了工作效率，減少了溶劑的使用。
3 總結
在線GPC-GC/MS在能夠有效的去除復雜基質中的干擾物質，降低背景、改善峰形、減小基質效應。簡化了樣品前處理、提高了檢測的重現性、縮短了分析時間、提高了工作效率、減小了有害溶劑的使用，將成為食品檢測中的一顆璀璨明星。
參考文獻：
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[5] 康慶賀，吳巖，高凱揚，等.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質譜法測定松子仁中的28種有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥[J].色譜，2009，27（2）：181-185.
篇2
關鍵詞：凝膠滲透色譜（GPC）；食品安全；應用
中圖分類號： TS213.4 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/ki.jlny.2017.15.053
隨著我國經濟的發展和生活水平不斷提高，人們對于食品安全問題也日益重視。國家對食品安全檢測工作也極為重視。食品安全檢測工作最重要的就是樣品前處理，樣品前處理的好壞直接影響到檢測結果的正確性。因此，在食品檢測中使用正確的前處理方法，可以提高工作效率和檢測結果的準確性。
凝膠滲透色譜是最近十幾年迅速發展起來的一種樣品前處理方法，因其對分子量大的雜質凈化效率高，可重復使用，適用范圍廣，自動化程度高等特點，在食品檢測中應用廣泛。
凝膠滲透色譜基于體積排阻的分離機理，通過具有分子篩性質的固定相，來分離分子質量不同的物質。凝膠滲透色譜還可以用于分析化學性質相同而體積不同的高分子同系物[1]。
1 凝膠滲透色譜（GPC）在食品檢測中的應用研究新進展
1.1 GPC技術在食品檢測中的應用研究新進展
GPC技術常用在食品檢測中的樣品凈化，宋鑫等在檢測螃蟹中19種有機氯農藥殘留時應用全自動GPC-SPE聯合凈化，樣品用乙腈提取，凝膠滲透色譜和氨基固相萃取柱聯合凈化。用Bio-Beads S-X3凝膠為填料的凈化柱，以環己烷―乙酸乙酯（1∶1）為流動相，泵流速為4.7 毫升/分鐘，檢測波長為254納米。收集9.0分鐘和15.5分鐘的流出液，并轉至SPE凈化。在實驗中，對經GPC凈化的有機氯農藥的收集時間進行了優化，在單獨使用GPC時樣品凈化不完全，與SPE聯合使用后凈化效果和回收率較好[2]。馬杰等建立在線凝膠滲透色譜――氣相色譜質譜聯用法測定蔬菜、水果中有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯類農藥，GPC 彌補了QuEChERS 方法凈化干擾物質不徹底的問題， 從而降低分析背景， 改善峰形， 提高分析結果的準確性 [3]。黃武等在檢測大豆中異丙甲草胺殘留量時用在線凝膠滲透色譜法，進行前處理，簡化了樣品前處理過程，且對環境污染較少，具有高效、經濟、快速及簡便等優點，顯著提高前處理效率，減少分析時間，提高農藥殘留分析的速度和靈敏度[4]。
1.2 GPC技術在食品檢測研究中存在的問題
GPC技術在國外已經普遍應用于樣品的前處理，但在我國應用領域較少。GPC作為食品檢測中的一種全新的樣品前處理技術，能分離大分子類干擾雜質，有效地將大分子類物質從復雜的基質中提取出來。GPC技術優勢是可大大降低大分子基質干擾，自動化和標準化程度高，且可以自動濃縮和定容，減少了人工帶來的誤差，顯著提高方法的精密度和重現性。
但GPC技術作為一種新興技術，在實際應用中還存在一些問題，需要在今后的工作中解決。由于GPC柱子內徑比較大，連續處理樣品的能力較慢，所需要的溶劑量較大。又因為所收集的樣品體積大，對于實驗室的濃縮裝置要求較高，這大大減慢了實驗分析的速度。此外，由于不同物質分子大小、形狀以及凝膠阻滯作用的差異，可能會導致樣品分離不完全，較大分子量的物質會提前流出不被收集而影響回收率，一些小分子干擾物會夾雜在樣品中而影響凈化效果。
2 凝膠滲透色譜（GPC）條件的選擇
利用GPC技術進行樣品前處理時，所需選擇及優化的條件主要是色譜柱的選擇，流速的選取以及收集時間的選擇，溶劑的選取等。孫磊麗等在測定甘草中16種農藥殘留時選用填料為中性、多孔的聚苯乙烯二乙烯基苯微球體的S-X3玻璃柱作為GPC凈化柱，體積比為1∶1的乙酸乙酯―環己烷溶液作為流動相，流速為5毫升/分鐘，前7 分鐘收集1份樣品，之后每1分鐘收集1份樣品，共收集28份樣品溶液，分別進行質譜檢測[5]。呂飛等在檢測動物源性食品中17種農藥殘留時，在線凝膠滲透色譜：色譜柱為Shodex CL NpakEV-200 柱；流動相：丙酮―環己烷（ 3∶7，V/V） ，流速0. 1毫升/分鐘，柱溫40 ℃，進樣量10微升，檢測波長210納米，農藥殘留組分在線收集時間段：4.35 ～ 6.35分鐘[6]。
3 展望
凝膠滲透色譜技術作為一種前處理技術已經普遍應用于樣品的凈化，S著GPC技術的不斷優化應用范圍越來越大，國外已經研究出很多種成熟的GPC前處理方法。隨著國際形勢發展，我國也應該對GPC技術進行研究開發。目前有很多研究都將GPC技術與QuEchERS 前處理等聯合使用，使得現在的前處理可以聯合處理較為復雜的樣品，提高了工作效率和準確度?，F在的檢測儀器的精密度較高，對樣品處理較嚴格，GPC技術與其他前處理技術聯合使用可以去除雜質的干擾，對于精密儀器是一種保護。如在線GPC與QuEchERS聯合串聯質譜檢測可以去除樣品里的干擾和基質效應，對樣品分析更準確。因此，發展和研究凝膠滲透色譜技術在食品檢測方面有廣闊的發展前景。
參考文獻
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[5]孫磊麗.凝膠滲透色譜―― 氣相色譜串聯質譜法同時測定甘草中16 種農藥殘留[J].分析測試學報，2012，31（12）：136-143.
篇3
中圖分類號：R780.2 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）02-0339-02
[Abstract]Lactoperoxidase has a natural antibacterial activity， which could be widely applied to food and had good antimicrobial antiseptic effect， such as Dairy and meat products， etc. The paper mainly reviewed the separation and pufication technology of lactoperoxidase including ？salting-out method， ultrafiltration method， coupling aqueous two-phase technology and chromatography technology.
乳過氧化物酶（lactoperoxidase，簡稱LP）是過氧化物酶的一種，是存在于動物乳中的一種天然抗菌物質，常見于哺乳動物的乳腺、唾液腺、淚腺及其分泌物中[1]。乳過氧化物酶在食品行業中應用最廣泛的是乳制品，還可將其應用到醫藥和肉制品行業中，具有較好的抑菌防腐效果。本文主要綜述了分離乳過氧化物酶的鹽析法、雙水相萃取技術、膜分離技術以及色譜技術等。
1.鹽析法
鹽析沉淀法是酶分離純化過程中最常用的方法，其原理是在高濃度的鹽溶液條件下，大量鹽離子使水分子濃度相對降低，蛋白質水合作用減弱，分子間相互凝聚沉淀析出，由于蛋白質水合作用與蛋白質本身的分子量、等電點等物理化學常數有關，所以在不同鹽析條件下，不同種類的蛋白質發生聚集沉淀析出程度也不同，因而達到分離目的。鹽析法具有操作方法簡便、無需大型昂貴設備和成本低安全性高等特點，適用范圍十分廣泛。通常把硫酸鈉、硫酸鎂、檸檬酸鈉、硫酸銨等用作鹽析劑，國內有報道用硫酸銨鹽析法分離大豆酸沉蛋白、羔羊皺胃酶和多管藻R-藻紅蛋白和R-藻藍蛋白。鹽析法分離乳過氧化物酶還是較新的技術。
2.雙水相萃取技術
雙水相萃取體系是由兩種聚合物或是一種聚合物和一種鹽組成的，其原理是依據物質在兩相間的具有選擇性分配系數，當物質進入雙水相體系后，由于生物分子量大小、電荷作用和各種力（如疏水鍵、氫鍵和離子鍵等）的存在和環境之間的相互影響作用，使物質在上相和下相中的分布狀態不同（即分布濃度不同），形成雙水相體系。提取某一物質，只需選擇適宜的雙水相體系，控制合適的條件（pH、雙水相體系物質含量等），就可以得到適宜的分配系數，從而達到分離提取的目的[1]。與傳統的提取方法比較來看，雙水相萃取技術所使用的設備便捷、快速、經濟，被分離物質在溫和條件下進行快速分離，其獲得產品的回收率和純度較高。目前，雙水相萃取技術已廣泛地應用于蛋白質和核酸等生物活性產品的分離提取，并逐步走向工業化生產進程[2]。它為生物分子提供生物兼容的環境，具有連續操作空間，易于擴大生產的優點。國內有研究報道雙水相法提取脂肪酶、糖化酶、淀粉酶等，但是沒有應用雙水相法提取乳過氧化物酶。利用雙水相技術，優化提取牛乳中過氧化物酶提取的工藝條件，為雙水相技術在乳過氧化物酶提取分離方面應用，提供基本的技術支撐，有很重要意義。
3.膜分離技術
膜分離技術是一項新興的高新技術，具有能耗低、分離過程中物質不發生相變、操作簡便、無二次污染、分離產物便于回收且分離效果佳等優點，已被廣泛應用于工業中的產品分離、純化等。常見的膜分離技術有微濾膜、超濾膜、納濾膜、反滲透膜及離子交換膜[13]。膜分離技術已廣泛的應用的乳品工業中，主要應用于乳清蛋白分離回收、乳清脫鹽、除菌、酪蛋白濃縮、乳蛋白質分級分離等。膜技術主要是陶瓷膜技術分離酪蛋白和乳清蛋白以及超濾膜技術純化乳過氧化物酶。
4.色譜分離
色譜分離技術又稱層析技術分離，是一種用于分離成分復雜混合物中各個組分的有效方法。原理是利用不同物質在由固定相和流動相構成的體系中具備不同的分配系數，物質在兩相體系作相對運動時，會隨流動相一起運動，并在固相和流動相間進行多次反復的分配，從而使各物質達到分離純化的目的。應用于乳過氧化物酶分離的色譜技術可分為離子交換層析、親和層析、凝膠層析、吸附色譜和分配色譜等技術，此技術比較成熟，詳細介紹一下。
4.1 離子交換層析分離技術
離子交換層析中，基質由帶有電荷的樹脂或纖維素構成，帶有負電荷的為陽離子交換劑，反之為陰離子交換劑。離子交換色譜法分離蛋白質組分原理是依據不同蛋白質組分在一定條件的溶液中帶有相應的電荷，根據蛋白質帶電荷狀態不同會與帶相反電荷的離子交換劑的結合，按結合力的大小，在洗脫時從弱到強依次被洗脫下來而得以分離。
4.2 離子交換膜色譜提取乳過氧化物酶
Clovis K. Chiu等（1997）使用固定化磺酸根陽離子交換膜從乳清中分離乳過氧化物酶，此法優點是速度更快，相對于離子交換色譜柱，膜分離使用更小的尺寸；缺點是生產越多的目標物就需要越多的膜，增加生產成本，難以大量生產。Kerstin Plate等2006年提出了用帶有陽離子的選擇性吸附膜Sartobind S從生產酪蛋白所剩下的的乳清中來提取乳過氧化物酶，此法具有生產快的優點，適用于工業上大規模的生產。Linda Voswinkela等2011年提出使用陰陽離子交換膜色譜法（Sartobind Q and S nano），分兩個步驟（先過陰離子交換膜未吸附物質再過陽離子交換膜）通過改變不同的緩沖液及pH值和洗脫液濃度從牛乳清中快速分離BSA，β-lactogloulin，ImmunoglobulinG，lactoperoxidase，lactoferrin多種蛋白，此法生產周期短，適用于工業生產。
4.3 免疫親和層析（affinity chromatography）
將具有高度特異親和性的二種物質之一以共價鍵形式結合到固定相，通過利用與固定相鍵合的物質具有不同程度的親和性，將具有特異親和性的物質成分與其他雜質分離的色譜法。1989年Bodil Langbakk等人使用一種免疫親和色譜（配基結合免疫球蛋白G）從人乳中分離LP，其過程中LP和配基發生結合，利用含有2% SDS、pH 6.8和0.1 mol/L磷酸鈉緩沖溶液，將乳過氧化物酶洗脫下來，從而分離純化出純度較高的乳過氧化物酶[3]。
4.4 凝膠層析
凝膠層析又稱分子篩，按照分離純化的物質是水溶性的化合物還是有機溶劑可溶物，凝膠色譜又可分為凝膠過濾色譜（GFC）和凝膠滲透色譜（GPC）。GFC主要是根據被分離樣品中各組分分子質量大小的不同而進行分離洗脫的一項高效的色譜技術。1963年Peter Z首先使用離子交換色譜從牛乳中分離出LP，之后使用凝膠色譜進一步純化分離得到純度較高的LP[4]。2011年，Y. Morita等人以牛奶堿性蛋白為原料，將堿性蛋白溶解于磷酸鈉緩沖溶液，先使用SP-Sepharose填料平衡分離，并用0-1.5M NaCl進行洗脫，將所得分離物質收集再使用HiLoad 16/60 Superdex 75 pg進一步純化得到高回收率的乳過氧化物酶。
參考文獻：
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篇4
【關鍵詞】食品； 農藥殘留； 分析；前處理
農藥殘留，是農藥使用后一個時期內沒有被分解而殘留于生物體、收獲物、土壤、水體、大氣中的微量農藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質的總稱。食品中農藥殘留對于人類健康以及環境的危害，已經引起了世界各國的廣泛關注，世界各國對農藥殘留分析方法提出了準確性、靈敏性、便捷性等方面更高的要求，下面是本人對食品中農藥殘留分析前處理方法的淺談。
現代農藥殘留分析方法通常包括樣品前處理和測定兩部分，樣品前處理是核心。樣品測定前的凈化、濃縮預處理是農藥殘留分析的關鍵，目前常用的預處理方法以傳統技術居多，這些技術存在許多不足。近年來，新的樣品預處理技術不斷出現。這些新技術的共同特點是：高效、快速、預處理簡單、節省甚至不用溶劑、樣品用量少、易于推廣等。
1固相萃?。⊿PE）
固相萃取是一種基于液相色譜分離機制的樣品前處理方法。該法利用固體吸附劑將液體樣品中的目標物吸附，與樣品中的基體和干擾化合物分離，然后用洗脫液洗脫，從而達到分離與凈化目標化合物的目的。
在國內外，SPE技術已被廣泛用于農藥對水污染的檢測[2]。Shepherd等[3]用化學鍵合C18柱萃取水中莠去津，1.5h可處理12個樣品，取水樣10mL，檢測靈敏度可達0.05ng/mL。Holland等用C18柱分離葡萄酒中74種農藥，方法快速，重復性好。任晉等成功地應用在線SPE-LC-MS技術分析飲用水中痕量除草劑。[4]固相萃取也是常用的凈化手段。劉長武等采用固相萃取代替傳統的液）液萃取技術和柱層析前處理技術，使蔬菜、水果中25種有機氯農藥迅速得到分離、凈化和濃縮。最后采用雙柱ECD氣相色譜同時定性、定量[5]。
2固相微萃?。⊿PME）
固相微萃取是80年代末由加拿大Waterloo大學Pawliszyn和Arhturhe教授提出的一種簡便、快捷、無溶劑的樣品制備與前處理技術。SPME的原理是利用待測物在基體和萃取相間的非均相平衡，使待測組分擴散吸附到石英纖維表面的固定相涂層，待吸附平衡后，再與氣相色譜（GC）或高效液相色譜（HPLC）聯用以分離和測定待測組分。SPME與GC聯用適于分析揮發性有機物，通過熱解析使待測組分與萃取纖維分離。而對于難揮發的有機物可利用SPME與HPLC的聯用技術，通過溶劑解析的作用達到分離效果。
SPME的萃取模式可分為三種：直接法，即將石英纖維暴露在樣品中，主要用于半揮發性的氣體、液體樣品萃取；頂空法，將石英纖維放置在樣品頂空中，主要用于揮發性固體或廢水水樣萃取[6]膜方法，將石英纖維放在經過微波萃取及膜處理過的樣品中，主要用于難揮發性復雜樣品萃取。
3超臨界流體萃?。⊿FE）
SFE技術利用超臨界流體（SF）密度大、粘度小、擴散系數大、兼有氣體的滲透性和液體的分配作用的性質，將樣品中待測物溶解并從基體中分離出來，同時完成萃取和分離兩步操作，分離效率高，操作周期短，無環境污染。超臨界流體萃取速度快，幾乎不用或少量使用有機溶劑。王建華等報道了一種用超臨界流體萃取西紅柿、草莓、金橘和檸檬等水果中多種殘留有機磷的方法【7】。
4凝膠滲透色譜（GPC）
凝膠滲透色譜基于體積排阻的分離機理，不僅可用來分離和測定小分子物質，而且還可以分析具有相同化學性質但分子體積不同的高分子同系物。
GPC是多農藥殘留分析中一種常用有效的提純方法，由于具有自動化程度高，較好的凈化效率，以及較好的回收率，被廣泛用于含類酯的復雜基體組分。欒揚等介紹了一種簡便、快速的用于魚蝦及蔬菜中9種有機氯農藥殘留的提取方法，配合凝膠滲透色譜法進行凈化處理，提取效率高，可避免傳統方法中易出現的乳化及多重轉移【8】。王兆基采用一種較快速、簡單的方法測定蔬菜中菊酯類農藥殘留物。樣本中農殘經乙酸酯萃取，凝膠滲透色譜及固相提取凈化后，用氣相色譜一電子捕獲檢測器測定，對同一批曾施用菊酯類農藥的白菜樣本進行化驗，本法跟美國食物及藥品管理局農藥殘留標準測定方法所得結果非常吻合。
5微波輔助萃取（MAE）
微波輔助萃?。∕AE）是1986年匈牙利學者Ganzler等人通過利用微波能萃取土壤、食品、飼料等固體物中的有機物，提出了一種新的少溶劑樣品前處理方法。微波萃取技術是一種萃取速度快、試劑用量少、回收率高、靈敏以及易于自動控制的前處理技術。它利用微波加熱的特性對物料中目標成分進行選擇性萃取。微波萃取是將樣品放在聚四氟乙烯材料制成的樣品杯中，加入萃取溶劑后將樣品杯放入密封好、耐高壓又不吸收微波能量的萃取罐中。萃取罐是密封的，當萃取溶劑加熱時，由于萃取溶劑的揮發使罐內壓力增加，使得萃取溶劑的沸點大大增加，這樣就提高了萃取溫度。同時，密封條件下萃取溶劑不會損失，也就減少了萃取溶劑的用量。微波加熱過程中萃取溫度的提高大大提高了萃取效率。
今后農殘檢測對象和檢測目的物都將發生變化，檢測方法將向簡便、快捷、靈敏度高的方向發展，同時將加大對農藥殘留降解技術的研究。同時，加快農藥殘留標準體系建設，已成為我國當前和今后一段時間農藥殘留標準工作的重點，對保障農產品和食品安全意義重大。
參考文獻：
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篇5
關鍵詞：食品；農藥殘留；前處理技術
社會上存在的食品大多數是農作物制作而成的，因此農作物自身質量和安全性對食品的安全性起到很重要的決定作用。但是目前我國在進行農作物種植的過程中，為了提升農作物的產量經常使用一些農藥，這些農藥的使用，勢必會造成食品中有部分農藥殘留，影響食品安全。針對于這一點就需要采取有效的技術手段對食品中農藥含量進行有效檢測，并根據檢測結果提出針對性解決措施。目前社會上采取的食品中農藥殘留量檢測方法主要是樣品前處理技術，針對于此就需要對這項技術手段進行全面研究，保證這項技術得到更好的實施。
1 樣品前處理技術
1.1 固相萃取
在對食品中農藥殘留進行有效檢測的時候，要想保證檢測順利進行，還需要對其進行固相萃取，保證在這個過程中相應檢測試劑能夠與目標化合物進行有效結合，借以保證化合物達到分離和富集的目的。在實施固相萃取過程中，涉及的類型主要三種，在這里筆者就對這三種固相萃取類型進行全面分析。第一，正相固相萃取。在選取正相萃取的方法時，對光譜柱中選取的填料物質大多數是極性物質，這種極性物質的使用能夠保證食品內部極性物質不會發生流失的現象。第二，反相固相萃取。與正相萃取方法相反，在這個過程中選取的試劑主要是非極性或者弱極性物質，因此在這個過程中萃取出來的化合物大多數是中等極性或者非極性的化合物。第三，離子交換型固相萃取。與前兩種方法相比較，這種萃取方法實施的過程中對萃取柱內物質選取往往介于極性和非極性之間，而且相應物質還攜帶一部分電荷，在進行萃取的過程中可以通過離子交換樹脂進行。但是這種方法在實施的過程中還經常會出現抗體和受體制備困難的現象，這就導致其在實際應用的時候經常會受到限制。
1.2 固相微萃取
這項技術手段和固相萃取之間存在的差異，主要在于這項技術本身就是對化合物進行分離的一個過程，其在實施的過程中能夠有效解決固相萃取中出現的孔道堵塞問題，對于這項技術來說，其在實施過程中選取的裝置類似于普通樣品注射器，在整個過程中選取的萃取試劑大多數是石英纖維，這種石英纖維不僅僅能夠保證化合物萃取的順利進行，對保證其自身萃取質量減少萃取時出現的問題都起到不可忽視的作用。對于固相微萃取來說，其在實施的過程中萃取模式主要分為兩種，即直接法和頂空法。在對這兩種模式進行選取的時候需要對化合物的狀態有一個全面的掌握。一般來說如果化合物的狀態為半揮發性氣體，選取的模式主要是直接法。但是在對化合物進行萃取的過程中相應的化合物除了半揮發性氣體之外，還有揮發性固體和水樣等，在這個過程中采取的萃取模式主要是頂空法，并且在進行萃取的時候對其自身涉及的待測物和涂層樣品等進行有效控制，保證兩者之間能夠遵循相溶原則，并且能夠達到平衡分配的原則。對于固相微萃取方法來說，其與其他萃取方法相比較，在實施萃取時間上還有很大的提升，這種固相微萃取的方式大多數應用在環境、醫學和動植物樣品分析中，能夠有效檢測其中農藥殘留量。
1.3 微波輔助萃取
微波輔助萃取是1986年匈牙利學者通過利用微波能萃取土壤、食品、飼料等固體物中的有機物，提出了一種新的少溶劑樣品前處理方法。微波輔助萃取技術是對樣品進行微波加熱，利用極性分子可迅速吸收微波能量的特性來加熱一些具有極性的溶劑達到萃取樣品中目標化合物，分離雜質的目的。與傳統的振蕩提取法相比，微波輔助萃取具有高效、安全快速、試劑用量小和易于自動控制等優點，適用于易揮發物質如農藥等的提取，并可同時進行多個樣品的提取。微波輔助萃取中溶劑的選擇非常重要，直接影響到萃取結果。由于非極性溶劑介電常數小，對微波透明或部分透明無法進行萃取分離。因此在微波萃取時，要求溶劑必須具有一定的極性，對待測組分有較強的溶解能力，對后續測定的干擾較少。此外也應考慮溶劑沸點因素。常用的萃取劑有：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸甲苯、二氯乙烷和乙腈等有機溶劑。用苯、正己烷等非極性溶劑萃取時必須加入一定比例的極性有機溶劑。微波輔助萃取的最佳參數除了萃取溶劑外，還包括了萃取設備、萃取溫度及時間的選擇。
1.4 凝膠滲透色譜技術
凝膠滲透色譜技術是根據溶質（被分離物質）分子量的不同，通過具有分子篩性質的固定相（凝膠），使物質達到分離。要求載體具有良好的化學惰性、熱穩定性、一定的機械強度、不易變形、流動阻力小、不吸附待測物質、分離范圍廣（取決于載體的孔徑分布）等性質。同時分離效果還與載體的粒度大小和填充密度有關。為了擴大分離范圍和分離容量，一般選擇幾種不同孔徑的載體混合裝柱，或串聯裝有不同載體的色譜柱，其中載體的粒度越小、越均勻、填充得越緊密越好。良好的溶劑有利于提高待測物質的溶解度，避免操作時因分析對象的改變而更換溶劑。由于凝膠滲透色譜為液體色譜，則要求溶劑的熔點在室以下，而沸點應高于實驗溫度，且溶劑的粘度小，以減小流動阻力。另外溶劑還必須具備毒性低、易于純化、化學性質穩定及不腐蝕色譜設備的特點。此外，分離效率除了載體、溶劑的選擇以外，還包括合適的溫度和溶質的化學性質的影響。與吸附柱色譜等凈化技術相比，凝膠滲透色譜技術具有凈化容量大、可重復使用、適用范圍廣、使用自動化裝置后凈化時間縮短、簡便、準確等優點。
2 食品中農藥殘留前處理技術的發展前景
樣品的前處理是農藥殘留量檢測過程中重要的步驟之一，它對保證測定結果的準確性和可靠性，減少對色譜柱和檢測儀器的污染，提高檢測效率都具有重要的影響。食品中農藥的殘留量一般在10-6～10-9（W/W）或更低的水平，除了要求檢測方法具有相當高的靈敏度和選擇性外，也對樣品的前處理技術提出了更高的要求。不同的前處理技術有其各自的優缺點和適用范圍，在實際工作中，應根據待測樣品種類和基質、測定結果要求和檢測儀器的不同，并結合實際條件選用合適的樣品前處理方法。
3 結束語
綜上所述可以了解到在我國對食品進行農藥檢測過程中，選取的方法有很多，這些方法的相同點都屬于樣品前處理技術，對于這些技術手段來說，在實施的過程中還需要對相應食品內部化合物成分有一個全面的了解，并根據相應了解選取有效的技術方法進行農藥檢測，這樣不僅僅能夠促使檢測更加順利的進行，對于提升檢測結果的質量和其他方面都起到不可忽視的作用。另外在對食品中農藥殘留進行處理的過程中還能夠按照這里涉及的檢測方法選取有效的解決措施，保證食品的安全性得到全面提升。
參考文獻
[1]呂秀娟.淺談樣品的前處理技術[J].新疆畜牧業.2013（12）.
篇6
【摘要】
目的研究麻瘋樹酚凝膠劑的制備工藝、質量評價及其體外釋藥性。方法用卡波姆940做基質、氫氧化鈉為中和劑制成凝膠劑；使用改良的franz擴散池，進行體外釋藥實驗。結果制備的麻瘋樹酚，細膩、光潔透明、穩定性好、釋放藥物快。結論該凝膠劑配方合理，符合《
【關鍵詞】 麻瘋樹酚 凝膠劑 擴散池 釋放速率
abstract：objectiveto study the preparation and quality assessment ,and the drug-releasing properties of gel containing jatropha curcas phenolic.methodscarbopd-940 was used as base,and sodium hydroxide as neutralizer.the drug-releasing experiments in vitro were carried out in improved franz diffuser.resultsthe geiata was homogenous,transparent and stable.the drugs released quickly.conclusionthe formulation of the gelata is reasonable and coincident with the requirement of chinese pharmacopoeia 2005.this gelata is suitable for remedy of herpes simplex virus type 1.
key words：jatropha curcas phenolic; gel; franz diffuser; drug releasing rate
作為提供生物柴油的熱點植物——麻瘋樹，其綜合利用已成為研究的一個重點。我們從麻瘋樹葉中提取了一種酚類物質，經藥效學試驗證實，對單純性皰疹病毒有明顯的抑制作用，將其制成中藥凝膠劑用于陰道皰疹治療，有一定的新穎性和實用性。
本研究用水溶性高分子材料-卡波姆制備不同濃度麻瘋樹酚凝膠劑，并通過對外觀、ph值、黏度、穩定性、耐熱耐寒實驗進行了質量評價及體外釋藥性研究，確定了最佳處方，以期為麻瘋樹酚陰道給藥新劑型的開發提供依據［1，2］。
1 儀器和藥品
1.1 儀器bs1105型 電子 天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；kq、50b型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；w-g71型電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；hps、3c型酸度計 （上海偉業儀器廠）；ndj-1旋轉粘度計（上海天平儀器廠）；立式擴散池（自制）；79hw-1型恒溫磁力攪拌器（浙江樂成電器廠）；uv、1900紫外可見分光光度計（北京普析）；美國waters高效液相色譜儀。waters 515泵，waters 2487雙波長紫外可見光檢測器，rheodyne 7725進樣閥及20 μl進樣環。大連物化所wdl-95色譜工作站。waters spherisorb ods（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，c18保護柱，流速1 ml/min，柱溫室溫。上海亞東0.45 μm微孔濾膜，天津津騰0.45um針筒式微孔濾膜濾過器。
1.2 藥品
麻瘋樹酚對照品（本實驗室提供）；卡波姆940（美國bfgoodrieh公司）；無水甲醇( 天津市首世化工有限公司)；1，2-丙二醇(沈陽市化學試劑廠)；氫氧化鈉(沈陽市化學試劑廠)；分子量為8 000～14 000的透析膜（millipore） 。
2 方法與結果
2.1 處方及制備方法
2.1.1 原料
本實驗室提供。
2.1.2 處方
主藥100 g，卡波姆940 18g，氫氧化鈉適量，配成1 000 g。
2.1.3 凝膠劑的制備
取處方量的卡波姆940溶于重蒸水中溶脹，并放置過夜，加入處方量的主藥混合均勻，用氫氧化鈉調節ph至5.5～6.0，最后加入重蒸水至1 000 g，罐裝，滅菌［3，4］。
2.1.4 空白基質的配制
分別取卡波姆1.8 g于100 ml蒸餾水中溶脹12 h，制成基質濃度為1.8%的不含麻瘋樹酚的卡波姆凝膠［5，6］。
2.1.5 制備工藝條件的研究采用正交實驗法優選制備，因素水平見表1，正交實驗數據及 計算 結果見表2。表1 因素水平（略） 表2 收得率l9（34）正交實驗數據及計算結果（略）
根據以上正交實驗的數據處理，b1>a3>c1，可知當處方配比為丙二醇（0.0%），卡波姆940（1.8%），無水乙醇（0.0%）時，有較好的收得率，并且該處方有滿意的外觀性狀和黏度，所以選擇該處方做進一步研究。
2.2 質量評價［7，8］
2.2.1 麻瘋樹酚凝膠劑的外觀評價
篩選出的處方均為黃褐色半固體，質地均勻細膩，稠度適宜，涂展性好，吸收快，符合《中國藥典》2005版有關凝膠劑項下的規定。
2.2.2 ph值取處方約10 g加入25 ml蒸餾水，用hps-3c型酸度計精密測定，ph值在5.5～6.0，適合陰道特殊環境使用。
2.2.3 穩定性實驗
取本品10 g置于離心管中，以4 000 r/min離心40 min。無分層現象，有較好的穩定性。
2.2.4 耐熱耐寒實驗取本品適量，裝于密閉小瓶中，放于55℃濕箱中恒濕24h，置冰箱0℃中放置24 h。無分層和霉變現象，該處方耐熱耐寒。
2.3 體外釋藥性研究［3］
采用自制的擴散池進行凝膠釋藥性測定，擴散池置于恒溫磁力攪拌器上的恒溫水浴中。供應室與接受室間置透析膜，該膜微孔可通過分子量（m）8 000～14 000的分子，麻瘋樹酚的分子量<1 000，因此該膜僅作為凝膠劑的支撐膜，不影響藥物分子通過膜孔的擴散。在膜與供應室之間放置一環形塑料圈，高0.50 cm，直徑2.8 cm，內圓面積s=6.154 4 cm2。內圓中緊密地填放凝膠劑。供體池中加入準確稱量的制劑2.5 g，接受池中加入40ml蒸餾水，恒溫水浴溫度為37℃，在持續攪拌下，分別與1，2，3，4，6h取出接受池中溶液0.6 ml（立即補充等體積37℃蒸餾水），并用30%的甲醇液稀釋至2 ml，微孔濾膜濾過，作為待測液。
2.3.1 檢測波長的選擇
取麻瘋樹酚適量，加30%甲醇振搖溶解，在uv-1900紫外分光光度計上，200～600 nm波長處進行掃描，最大吸收波長為270 nm及274 nm，經預試并結合 文獻 報道，選擇274nm為檢測波長。
2.3.2 測定方法
取已稀釋的待測液10 μm進入高效液相色譜柱，根據結果 計算 累計藥物釋放百分數和單位面積累計藥物釋放量。其中hplc條件為：流動相30%甲醇；流速1 ml/min；柱溫30℃；檢測波長274 nm；保留時間30 min。
2.3.3 數據處理
采用隨行標準單點比較法計算供試品中麻瘋樹酚的含量，再按照下式計算出單位面積累積滲透量：
q=vcn+ni=1vicia
式中q為第n次取樣時的單位面積累積滲透量，v為接受池的體積，vi為第i次取樣的體積（0.6 ml），ci為第n個取樣點濃度（μg/ml）。a為擴散滲透面積（cm2）。以q值為縱坐標，時間t為橫坐標進行線性回歸所得方程為higuchi方程，其斜率即為透皮速率常數j［μg/（cm2·h）］。
2.3.4 體外藥物釋放度
供體池中加入準確稱量的制劑2.5 g，接受池中加入40 ml蒸餾水，恒溫水浴溫度37℃，在持續攪拌下，分別于1，2，3，4，6 h取出接受池中溶液0.6 ml（立即補充等體積37℃蒸餾水），并用30%的甲醇液稀釋至2 ml，用0.45 μm微孔濾膜過濾后，作為待測液。另準確稱取麻瘋樹酚對照品0.1 g，用100 ml 30%的甲醇溶液溶解定容，作為對照品溶液。分別取已稀釋的待測溶液和對照品溶液10 μl進入高效液相色譜柱，根據結果計算單位面積累計藥物釋放量。結果見表3及圖1。
2.4 麻瘋樹酚凝膠劑體外經皮滲透的影響
由表3和圖1可見，麻瘋樹酚凝膠劑的釋藥曲線呈線性關系。表3 不同處方單位面積累計藥物釋放量測定結果（略）
3 討論
不同濃度的卡波姆940和主藥混合時，均有不同的黏度和外觀，通過比較發現當基質為卡波姆940，且濃度為1.8%時，有滿意的性狀，且基質具有無毒、無刺激性、更易涂敷分散，與皮膚有良好的耦合性等特點，釋藥快，又可延長藥物的滯留時間，使藥效持久，為較理想基質［6］。
耐熱耐寒和穩定性實驗表明制劑在高溫低溫下均穩定，因此儲藏要求可相對寬松。
通過釋藥行為的考察，可知累計藥物釋放百分率與時間的曲線呈線性關系，說明制劑有良好的釋放能力。
通過正交實驗及其數據分析，確定了最佳處方，該處方的不僅有良好的釋藥行為，而且就 經濟 而言，也是最合理的，為該制劑的開發提供了實驗依據。
ph值對凝膠劑的黏度有較大影響，陰道可耐受的ph為5.0～6.0，綜合考慮皮膚和凝膠黏度的因素，將ph選定為5.5～6.0，以氫氧化鈉為ph調節劑進行調節，有較好的外觀和黏度，且對藥物無影響［6，8］。
通過正交實驗發現無水乙醇作為增溶劑［6］對制劑的收得率影響不大，可以忽略，原因可能是由于麻瘋樹酚為水溶性物質，較易溶解于水中。
通過正交實驗發現丙二醇作為保濕劑［6］對處方的影響較大，濃度越高，影響越大，而且陰道濕度本身較大，所以綜合考慮，處方作為陰道用藥，不需要進行保濕。
【 參考 文獻】
篇7
【關鍵詞】 雙氯芬酸鈉 水凝膠 輻射 卡波姆凝膠
卡波姆凝膠是良好的經皮給藥骨架控釋型藥物載體，因其藥物釋放速率較高而日益受到青睞，筆者通過將輻射制備的雙氯芬酸鈉水凝膠與卡波姆凝膠藥物透皮性進行比較，以評價水凝膠作為經皮給藥制劑控釋型藥物載體的可行性。
1 儀器與材料
Agillent 1100高效液相色譜儀，紫外檢測器，自動進樣器。100.0%雙氯芬酸鈉對照品。9cm×9cm×0.2cm 雙氯芬酸鈉透皮吸收劑（自制）。甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。
2 方法
2.1 輻射交聯雙氯芬酸鈉水凝膠與雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的制備
2.1.1 雙氯芬酸鈉水凝膠的制備 取1個250ml燒杯，稱重。精密稱取0.25g雙氯芬酸鈉，加入PEG 1g、PVP 2g，加100g蒸餾水，超聲溶解，制備藥物濃度為0.25%Labrasol的含量為1.5%的雙氯芬酸鈉水凝膠。
2.1.2 雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠配制 精確稱取雙氯芬酸鈉0.25g，置于 50ml容量瓶中，加蒸餾水定容至50ml，搖勻。稱取卡波姆1.0g，加入45ml蒸餾水中，放置過夜，溶脹。加入配制的雙氯芬酸鈉試液，用15%NaOH溶液調節pH為8.0，加蒸餾水至100g，混勻。同時配制無Labrasol和1.5%Labrasol的0.25%雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠。
2.2 體外滲透實驗 取人工皮膚樣本（半徑為1.1cm）6張，將各人工皮膚固定在改良的Franz擴散池接受室與相應的供應室之間（接受室內徑為0.95cm），夾子固定（接受室體積為7ml）。將雙氯芬酸鈉的1.5%Labrasol水凝膠兩份（半徑0.95cm）分別加于1、2號，無Labrasol卡波姆凝膠兩份加于3、4號，1.5%Labrasol卡波姆凝膠兩份加于5、6號擴散池與人工皮膚之間，外敷同面積的保鮮膜，防止水分蒸發，夾子固定。在接受液為10%的乙醇、恒溫37.5℃、300r/min攪拌條件下，分別于0.5、1、3、7、12、24h從接受池中取樣300μl，同時補充同體積的經37.5℃預熱的新鮮接受液。樣品離心20min（2000r/min），取上清液測定樣品中雙氯芬酸鈉的含量，并計算單位面積累積透過量（Q）。
3 結果
雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠與雙氯芬酸鈉水凝膠單位面積的藥物累積透皮量與時間的折線圖見圖1。水凝膠與卡波姆凝膠HPLC測定值及單位面積藥物累積透皮量（Q）見表1。可以看出含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉水凝膠前2h的藥物累積透皮量分別是不含Labrasol和含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的2.93倍和3.14倍，說明雙氯芬酸鈉水凝膠藥物起效較卡波姆凝膠快，并且24h時含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉水凝膠藥物累積透皮量是含1.5%Labrasol卡波姆凝膠的1.39倍，說明水凝膠較卡波姆凝膠可提高藥物釋放量。將時間與累積透皮量進行回歸，求得回歸方程，結果見表2。根據直線方程可以求出藥物滲透速率和評價藥物透皮能力的表觀透皮系數（Kp），見表3。輻射制備的雙氯芬酸鈉水凝膠與無Labrasol和含1.5%Labrasol 雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的藥物表觀透皮系數（Kp×105）分別為71.31±8.12、57.27±2.60和38.57±3.80，輻射制備的雙氯芬酸鈉水凝膠的（Kp）值是無Labrasol和含1.5%Labrasol雙氯芬酸鈉卡波姆凝膠的1.25和1.85倍。表1 HPLC測定值及累積透皮量 表2 時間與累積透皮量的回歸方程表3 滲透速率和表現透皮系數
4 小結
卡波姆是丙烯酸與丙烯基庶糖交聯的高分子合成聚合物，分子結構中含56%～68％的羧酸基團，聚丙烯酸的分子內氫鍵作用很強，卡波姆具有內在特有的交聯結構，其良好的粘滯性和親水凝膠性使其具有較好的控、緩釋作用。
造成水凝膠與卡波姆疑膠透皮性差異的原因，是它與兩者內在結構不同引起的。實驗結果證實雙氯芬酸鈉水凝膠的藥物透皮性也較卡波姆凝膠好，說明這種制劑滿足作為透皮吸收制劑的條件。
【參考文獻】
1 祁容，何仲貴.智能水凝膠研究進展及其在醫藥與生物工程中的應用.沈陽藥科大學學報，2001，118（16）：447-451.
2 劉兆民，肖慧.HDPE膜預輻射接枝NIPA/AAC環境制備敏感性水凝膠.輻射研究與輻射工藝學報，2004，22（4）：209-212.
篇8
abstract： in this study, we collected sponge sample from zhanjiang offshore sea area, and sponge ingredient were extracted by organic solvent benzine, chloroform, normal butyl alcohol and ethyl acetate, and identified and analyzed with the spectroscopic technique such as gel permeation chromatography (gpc), gas chromatopraphy-mass spectrometry (gc/ms), liquid chromatograph-mass spectrometer (lc-ms). the data indicates that the sponge has many kinds of compound, and affirms five kinds of compound such as hexanedioic acid， bis(2-ethylhexyl) ester，n-hexadecanoic acid，1,3-cyclopentanedione, 2,4-dimethyl-，1,2-dithiolane-3-pentanoic acid, and 26 kinds of compound molecular weights, but also has many kinds of matter also to wait for further analysis.
關鍵詞： 海綿；分離提純；化學成分
key words： sponge; purification; chemical component
中圖分類號：o69文獻標識碼：a文章編號：1006-4311（2011）04-0199-04
0引言
海綿中含有豐富的生物活性物質。海綿(marine sponge) 是屬于動物界、海綿動物門(spongia)的一類低等多細胞海洋生物。從海水、海底沉積土到海洋動植物,以及一些熱泉涌、水熱狹縫等,包羅萬象的生態圈,造就了海綿共附生微生物一個復雜多樣的群體,同時,產生了獨特的有別于陸地微生物的多種具有生物活性的次級代謝產物。本研究利用海南豐富的海綿資源，從中篩選出化合物，通過色譜、光譜分析技術鑒定其結構特征，并分析其生物活性。有望篩選出結構與活性不同于其他海洋來源的化合物，為進一步開發新的海洋藥物提供生物資源，具有非常重要的意義。
1材料方法
1.1 材料樣品采集地：湛江近海海域。樣品處理：從海水中采摘健康的海綿樣品后，分別置于無菌塑料袋中，一般在2h內送回實驗室處理，不能及時送回實驗室的則放于冰盒內低溫短時間保存。
1.2 試劑與儀器
三氯甲烷分析醇廣州化學試劑廠產品
正丁醇分析醇廣州化學試劑廠產品
乙酸乙酯分析醇廣州化學試劑廠產品
石油醚分析醇天津市福晨化學試劑廠產品
10ml移液槍
hp6890/5973msd 氣相色譜—質譜聯用儀
hplc高效液相儀/氨基酸分析儀（water 2487 dualλ absorbance detector）
agilent 1100-esquire hct液質聯用儀
gpc凝膠滲透色譜儀（分子量測試范圍：150—270，000）
真空干燥箱dzx—3型（6020b）寧波海曙賽福實驗儀器廠
1.3 實驗方法
1.3．1 化合物的提取分離海綿用無菌海水浸洗3遍，然后擠干，以去除表面附著物及夾帶的海水微生物。用無菌剪刀進行解剖，用2ml 甘油保存。實驗時，用5ml 95%工業酒精浸取3次，每次24小時。提取物冷凍干燥成白色粉末后，將濃縮物分散于5ml水中，再用各2ml，1.5ml，1.5ml石油醚分別提取三次，得可溶物5ml，再用極性逐漸增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同樣的方法提取三次，各得可溶物5ml，提取余相水溶物5ml。
1.3.2 氣相—質譜聯用儀測定有機相分別取200μl用于氣相—質譜連用儀（gc/ms）進行測定分析。色譜條件為： 色譜柱 hp-ffap（30m×0.25mm, 0.25μm）,60°c ，4°c/min150°c， 6°c/min，250°c，進樣溫度 250°c，載氣 he，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min；質譜條件為：ei源，電離電壓 70ev，離子源溫度 230°c，掃描范圍 40-500aum，進氣量 1μl。
1.3.3 高效液相色譜測定有機相冷凍干燥后用于高效液相及液質聯用儀進行測定分析。高效液相分析儀條件為：分離系統：waters 2695 separations module，色譜柱：waters c－18（3×15mm），柱溫：25±5℃，流動相：甲醇，水梯度洗脫，洗脫條件如表1。
檢 測 器：waters 2487 dual λ absorbance detector，檢測波長： 254nm，進樣量：6μl，控制系統：waters empower 軟件。供試品溶液配制：正丁醇萃取液中加入800μl甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3ml甲醇，混勻后以12000轉的轉速離心15min。取上層溶液待分析用。
1.3.4 液質聯用儀測定液質聯用儀分析條件為：儀器型號為agilent 1100-esquire hct，色譜柱c18，內徑4.60*300mm，流動相甲醇+水梯度洗滌，洗脫條件如表2。
對水溶物做凝膠色譜分析，gpc的條件為：示差檢測器 waters 1515+2414，兩根柱子串聯：型號分別是ultrahydrogeltm120和ultrahydrogeltm500，柱溫55℃，檢測器溫度50℃，流動相：水流速：0.6ml/min。
轉貼于中國
中國1.3.5 凝膠色譜測定柱子型號：ultrahydrogeltm500、ultrahydrogeltm120（分子量范圍100～40萬，雙柱串聯）。填料：葡聚糖。柱溫55℃。流動相：純水。流動相速度：0.6ml/min。waters 泵1515，示差檢測器2414；檢測器50℃。
2結果分析
2.1 氣相—質譜聯用儀（gc/ms ）結果及分析①正丁醇提取液分析（圖1）。結果顯示正丁醇提取液中含有4種化合物： a）出峰時間在36.02處有一個化合物：結構為：hexanedioic acid, bis（2-ethylhexyl） ester，分子量：370.31，分子式：c22h42o4。b)出峰時間在36.90處有一個化合物：結構為：n-hexadecanoic acid，分子量：256.24，分子式：c16h32o2。c)出峰時間在39.68處有一個化合物：結構為：1，3-cyclopentanedione，2，4-dimethyl-，分子量：126.07，分子式：c7h10o2。d)出峰時間在40.73處有一個化合物：結構為：1，2-dithiolane-3-pentanoic acid，分子量：206.04，分子式：c8h14o2s2。②石油醚提取液分析（圖2）。結果顯示石油醚提取液中含有1種化合物：tetradecanoic acid。分子量：228.21，分子式：c14h28o2。
2.2 高效液相結果及分析:（ 圖均已積分）①正丁醇提取液分析（圖3）。②石油醚提取液分析（圖4）。③三氯甲烷提取液分析（圖5）。④乙酸乙酯提取液分析（圖6）。
2.3 液質聯用儀結果分析①正丁醇提取液分析（圖7、8）。分析結果有八個化合物存在，并占有一定含量。其中以6號化合物感應強度最大，且在一級質譜圖中可以明顯確定其分子量為565.6（ms m/s:566.6（m+）；588.6（m+na），見圖9和圖10）。和背景化合物比較,可以確定為新的化合物。其他化合物由于現有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。同時，實驗中曾改變紫外波長為210進行比較分析，但是最后由于波長210下的色譜和質譜比較重合性較差，所以選擇波長外280的實驗結果。但波長210下的分析數據可供參考，為以后進一步研究做參考。見圖11。②乙酸乙酯提取液分析（圖12、13）。分析結果有四個比較明顯的化合物存在，并占有一定含量。但化合物由于現有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。它們的質譜圖如圖14-17。
2.4 凝膠色譜結果及分析（圖18-20）分析結果表明：水相中化合物有兩大類，分子量大概在10，000左右和小于100的化合物存在，并占有相當大含量。但由于現有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。
以下為凝膠色譜的標準圖如圖21：
分子量分別為：277000、12900、1460、106。
3討論與小結
本論文的研究工作主要取得以下結果：①以海綿為分離樣品，采用多種分離技術分離得到多種化合物。結果表明，石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯分別能提取到有機化合物，而水相中也能得到化合物。②以氣相—質譜聯用儀分析技術分離得到hexanedioic acid、bis(2-ethylhexyl)ester、n-hexadecanoic acid、1,3-cyclopentanedione、2,4-dimethyl-，1,2-dithiolane-3-pentanoic acid5種化合物。③石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯提取液經高效液相技術分離共得到26種化合物。其中有些物質是重復的，說明很多化合物可能是同時溶于有機相或同時溶于其中某幾項。同時也說明有些化合物的性能或結構是非常相似，在一定程度上比較難以分離，需改進技術或改變方法來進行深一步的研究試驗。④以液質聯用儀分離技術分離得到12個不同分子量的化合物。其中以分子量為565. 6（ms m/s:566.6（m+）；588.6（m+na））的化合物可以確定為新化合物，因為在色譜庫和相關文獻中都沒提及過該分子量的化合物。以后的研究工作將以此化合物為重點進行研究，相信通過更深入的分析鑒定，能確定該化合物的結果和特征。⑤以凝膠色譜分析技術得到溶于水相中的化合物有兩大類，分子量大約在10，000da左右和小于100da，兩者都有相當高含量。根據現有條件，估計分子量小于100的化合物中可能有海綿中的一些小分子的酸和堿等化合物，當然也可能是實驗的誤差，使一些甘油未除盡，所以還有點甘油存在；而分子量在10，000左右的化合物很可能是一些不易溶于以上4種有機溶劑的高分子聚合物，當然也有可能是提純過程中留下的極小部分的細胞碎片。⑥本研究利用該領域還未有人用氣質聯用儀，液質聯用儀技術來互補分析海綿中的有機物成分，通過對有機相和無機相的分析，對海綿中的化合物分離提取是比較全面的。但是由于客觀條件的限制，目前的研究結果中仍存在有未確定的化合物，例如水相中分子量在10，000左右的化合物和質譜中有顯示而色譜中未能查到的化合物，及質譜中一些含量不高的小峰所代表的化合物作更深入的研究奠定了一定的基礎。
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篇10
摘要:目的 探討不同濃度新型促滲劑壬代環戊雙醚對雙氯芬酸鈉凝膠的透皮吸收影響。方法 采用改良Frans擴散池進行體外透皮吸收實驗。流動相:甲醇乙酸水溶液(pH=3.0)(體積比70∶30),紫外檢測波長284 nm。結果 壬代環戊雙醚含量在2.0%時透皮吸收最好。結論 壬代環戊雙醚具有較好的促滲作用,是較好的新型促滲劑。
關鍵詞:壬代環戊雙醚;雙氯芬酸鈉凝膠;透皮吸收;新輔料
經皮給藥系統是目前藥劑學研究的熱點之一[1]。其可維持穩定持久的血濃,避免胃腸道的破壞及肝臟首過效應,毒性和不良反應小,使用方便。然而在治療量下許多藥物難以滲透皮膚,必須使用促滲劑增加藥物穿透性和透皮速率。在實際應用中,常用的有油酸及其酯類、二甲亞砜及其衍生物和氮酮等,其中以氮酮(azone)最為普遍[2]。
本室合成一種新的透皮吸收促進劑――壬代環戊雙醚[3],化學名為2正壬基1,3二氧戊環。由癸醛和乙二醇在對甲基苯磺酸催化下脫水環合而成。性狀為無色、透明、無毒、略有香味的稀油狀液體。其合成方法、藥理毒性另文報道。
雙氯芬酸鈉為非甾體抗炎藥[4],口服易引起胃腸道反應,采用經皮給藥方法,可以消除其對胃腸道的刺激,但經皮吸收又受到角質層的限制,透皮速率較小,需添加促透劑以改善藥物的透皮釋藥。本文選用雙氯芬酸鈉為模型藥物結合不同濃度的新型促滲劑壬代環戊雙醚研究其對藥物透皮制劑吸收的影響,考察壬代環戊雙醚新型促滲劑的開發價值。
1 試劑、儀器與實驗動物
1.1 試劑與儀器
高效液相色譜儀(LC―10A,日本島津),智能透皮實驗儀(TP―2A,南京紅藍電子科技中心),改良Frans擴散池(購自沈陽藥科大學),ZD―85雙功能氣浴恒溫振蕩器(江蘇金壇市富華儀器有限公司),卡波姆940(Carbomer,美國Goodrich公司),雙氯芬酸鈉(北京雙鶴藥業有限公司),雙氯芬酸鈉對照品(購自中國藥品生物制品檢定所),壬代環戊雙醚(本室合成),氮酮(azone,藥用,廣州化學助劑廠),甲醇(色譜醇,南京漢邦試劑廠),其他試劑均為分析純。
1.2 實驗動物
昆明種小白鼠,體質量20~22 g,SPF級,雌、雄兼用,福建醫科大學動物實驗中心提供,合格證號為醫動字第23―006號(質)。
2 實驗方法 1 雙氯芬酸鈉凝膠劑的制備
取雙氯芬酸鈉150 g溶解于60 ℃ 1 500 mL丙二醇中,另將150 g卡波姆940加入800 mL蒸餾水中充分溶脹,攪拌下將雙氯芬酸鈉溶液加入卡波姆基質中,并分別加入質量濃度為0%,0.5%,1.0%,1.5%,2.0%,25%,3.0%的壬代環戊雙醚、2.0%的氮酮,用三乙胺調pH為7.5,攪拌使成凝膠狀,蒸餾水加至1 000 g,攪勻,分裝即得。 2 含量測定 2.1 色譜條件
色譜柱shimpack ODS柱(4.6 mm×150 mm,10 μm);檢測波長284 nm;流動相:甲醇乙酸水溶液(pH調3.0)(體積比70∶30);流速:1.0 mL?min-1;柱溫為室溫;進樣量:20 μL。柱效以雙氯芬酸鈉計,理論塔板數不低于3 000。 2.2 標準曲線的制備
精密稱取105 ℃干燥至恒重的雙氯芬酸鈉對照品50 mg,置于50 mL量瓶中,用流動相溶解定容,振蕩搖勻,備用。精密量取標準液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mL置于100 mL量瓶中,用流動相溶解定容,振蕩搖勻。精密吸取20 μL進高效液相儀測定峰面積,以峰面積(A)為縱坐標與雙氯芬酸鈉質量濃度(ρ)進行線性回歸,得標準曲線方程: A=2377.15 ρ+01152,r=0.9998,線性范圍:5.0~30.0 μg?mL-1。 2.3 穩定性試驗
取雙氯芬酸鈉適量,加接收液生理鹽水配成高低不同濃度的溶液,分別在0,2,4,8,12,24 h處測定峰面積,RSD分別為0.78%和0.61%。結果表明,雙氯芬酸鈉在24 h內穩定。 2.4 精密度試驗
精密吸取對照品溶液(15.078 μg?ml-1)20 μL,分別于同一日內,不同日內重復進樣5次,測得RSD分別為1.19%和2.13%。 3 體外透皮試驗 3.1 離體鼠皮的制備
取體質量20~22 g健康小鼠,處死后立即剃除腹部毛,剝離腹部皮膚,除皮下脂肪,用生理鹽水沖洗后浸泡于生理鹽水中,置于4℃冰箱冷藏,24 h內使用。 3.2 體外透皮試驗
試驗裝置的透皮面積為4.52 cm2,接受池體積為10.05 mL。磁力攪拌器速度為60 r/min,實驗溫度為(37±0.5) ℃恒溫水浴。接受液為生理鹽水。
將雙氯芬酸鈉凝膠均勻涂布于預先處理好的鼠皮上,固定在釋放池下端(角質層朝向玻璃管側),凝膠含壬代環戊雙醚的質量濃度分別為0%,0.5%,1.0%,15%,2.0%,2.5%,3.0%和含2.0%的氮酮在1,2,4,6,8,10,12,14 h取樣4 mL,立即補充同溫生理鹽水4 mL,以0.45 μm微孔濾膜過濾,取續濾液,于284 nm處測定峰面積。 3.3 接受液含量測定和累積透皮量的計算
將所測峰面積代入標準曲線方程計算濃度,并量取接受液的體積,按以下公式計算累積釋放藥量(Q)。 4 統計學方法
數據的錄入和分析處理在SPSS l0.0統計軟件上完成。不同濃度各時間點累積透皮藥量比較采用重復測量的方差分析,用LSD法作多重比較。
3 結 果
體外鼠皮透皮吸收試驗結果見表1。表1 含不同濃度壬代環戊雙醚和氮酮的雙氯芬酸鈉凝膠的體外釋放量(略)
本實驗對含藥量相同,但含壬代環戊雙醚濃度不同的7種凝膠分別進行6次體外鼠皮透皮吸收試驗,經重復測量的分析,表明在6種濃度中,2.0%,2.5%,3.0%組的透皮藥量顯著高于其他濃度組(P0.05),在時間方面以14 h組最高(P0.05);但是2.5%,30%組的透皮藥量與2.0%組的透皮藥量差異無顯著性。同樣2.0%濃度組的氮酮略低于2.0%濃度組壬代環戊雙醚(P0.05),兩者差異無顯著性。
綜合考查,ρ=2.0%的壬代環戊雙醚對雙氯芬酸鈉凝膠累積透皮藥量較高,選擇其為本凝膠的促滲劑。
4 討 論