氯諾昔康對手術致痛影響

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【摘要】目的研究氯諾昔康對手術致痛大鼠脊髓Fos蛋白表達的影響。方法大鼠隨機分為7組：注射用水組、氯諾昔康組、手術致痛組及氯諾昔康預處理組4組（分別于致痛前20min腹腔注射氯諾昔康0.33，1，3，9mg/kg）。3h后取出脊髓,免疫組織化學檢測Fos免疫反應陽性神經元（FLIN），觀察Fos蛋白的表達。結果手術致痛組脊髓背角淺層Ⅰ～Ⅱ層Fos蛋白大量表達,氯諾昔康可減少Fos蛋白表達,并呈量效關系。結論氯諾昔康對手術致痛引起的脊髓背角Fos蛋白的表達能產生抑制作用,且呈劑量依賴性，同時對手術致痛有鎮痛作用。

【關鍵詞】疼痛；氯諾昔康；脊髓；原癌基因蛋白質cfos；免疫組織化學；疾病模型,動物；消炎藥,非甾類

非甾體類抗炎藥氯諾昔康已越來越多用于臨床術后鎮痛[1]。本文擬研究氯諾昔康對手術致痛大鼠脊髓Fos蛋白表達的影響,評價氯諾昔康對手術致痛的鎮痛作用。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1動物與分組健康成年雄性SD大鼠[福建醫科大學實驗動物中心提供，許可證號:SCXK(閩)20040002)]50只,體質量280～320g,隨機分為7組：注射用水組（W組）、氯諾昔康組（L組）、手術致痛組（S組）、4個氯諾昔康預處理手術致痛組（L1S組、L2S組、L3S組、L4S組）。其中W組（腹腔注射注射用水1mL）、L組（腹腔注射氯諾昔康3mg/kg）、S組（手術致痛未預注氯諾昔康）為對照組,每組6只；L1S組、L2S組、L3S組、L4S組為實驗組,每組8只,于手術致痛前20min分別腹腔預注射氯諾昔康0.33,1,3,9mg/kg。

1.1.2試劑一抗兔抗cFos(4):sc52,免疫組織化學染色試劑盒為PV9000（北京中杉生物公司）。

1.2方法

1.2.1疼痛模型制作手術致痛參照文獻[2],從足底近端0.5cm處向趾部作一約1cm的切口,挑起足底肌肉并縱向切割后縫合皮膚。

1.2.2脊髓片制備及免疫組織化學分析手術致痛3h后,3%戊巴比妥鈉60mg/kg麻醉下迅速開胸顯露心臟,經左心室灌注預冷的4%多聚甲醛固定,打開椎板,取脊髓L4～L5節斷,位置相當于腰膨大中下段。將所取標本置于甲醛固定液中固定,經處理后石蠟包埋切片,切片經抗原修復、封閉非特異抗原、一抗兔抗Fos血清（1∶200）、二抗羊抗兔IgG血清及DAB呈色處理后,在光學顯微鏡下觀察,計數Fos免疫反應陽性神經元（Foslikeimmunoreactivityneurons,FLIN）。每次實驗均留取數片用PBS或正常羊血清代替一抗做對照實驗。

1.2.3結果判定免疫組織化學標記顯示：FLIN呈圓形或者卵圓形,細胞核呈棕黃色。每只大鼠隨機取切片8張,計數每張切片脊髓背角淺層（Ⅰ～Ⅱ層）的FLIN數目,其均數為平均FLIN數目。

1.3統計學處理計量數據均以x±s表示,采用SPSS11.0進行統計分析，組間比較用方差分析,兩兩比較用Dunnettt檢驗,P<0.05為差別有統計學意義。

2結果

W組和L組未行手術致痛,FLIN極少,2組比較差別無統計學意義（P＞0.05）。S組經過手術致痛,未用氯諾昔康鎮痛藥,在脊髓L4～L5節斷灰質出現大量FLIN,多集中在手術側脊髓,最多分布在脊髓背角淺層（Ⅰ～Ⅱ層）,其次在深層（Ⅴ～Ⅵ層）,固有核和腹側灰質也有少量FLIN。L1S組、L2S組、L3S組及L4S組大鼠脊髓灰質背角淺層FLIN數目隨氯諾昔康劑量的增大呈減少趨勢,且同S組比較差別有統計學意義（P<0.05）（表1，圖1）。

3討論

3.1疼痛與脊髓cfos的表達自Brennan等提出大鼠切口疼痛模型后[2],文獻報道大鼠切口疼痛可使脊髓背角即刻早期基因cfos原癌基因表達,其產物為Fos蛋白[3]。cfos原癌基因的表達可作為傷害性刺激的標志物。一定程度上,cfos被誘導的數量與所受刺激的強度時間及性質而異[4]。

表1脊髓灰質背角淺層Fos蛋白表達的比較（略）

Tab1TheexpressionofFosindorsalhornofspinalcord

FLIN:Fos免疫反應陽性神經元.W組：注射用水組；L組：氯諾昔康組；S組：手術致痛組；L1S、L2S、L3S及L4S組為氯諾昔康預處理手術致痛組.與S組比較,☆：P<0.05；與L1S組比較,#：P<0.05；與L2S組比較,△：P<0.05；與L3S組比較,□：P<0.05.

脊髓背角淺層（Ⅰ～Ⅱ層）的Fos蛋白表達是支配大鼠后爪的C類傳入神經纖維興奮所致,深層（Ⅴ～Ⅵ層）的Fos蛋白表達是由于淺層輸入會聚結果,而Ⅲ、Ⅳ層主要是由那些僅對非傷害性刺激做了反應的神經細胞構成。它們的分布與傳遞外周傷害性信息的初級傳入纖維終末的終止部位相一致,也與背角痛敏神經元的分布部位相重疊,表明脊髓背角Fos陽性神經元大都是感覺傳遞通路上的二級或中間神經元。因此FLIN主要集中在脊髓背角Ⅰ～Ⅱ層,其次為Ⅴ～Ⅵ層,而Ⅲ～Ⅳ層卻很少。

A:注射用水組;B:氯諾昔康組;C:手術致痛組;D:氯諾昔康0.33mg/kg;E:氯諾昔康1mg/kg;F:氯諾昔康3mg/kg;G:氯諾昔康9mg/kg.A，B:基本無Fos表達;C:可見較多Fos表達;D，E，F，G:隨氯諾昔康增加Fos表達減少.

圖1脊髓灰質背角淺層Fos表達情況(×40)（略）

Fig1TheexpressionofFosindorsalhornofspinalcord

3.2鎮痛藥減少疼痛引起的脊髓cfos表達Honore等研究發現創傷后3hFLIN最多[5]。本研究中L組僅行手術致痛，未用鎮痛藥,與其它組相比,脊髓背角淺層FLIN數目最多,與以上研究結果相似。已有研究顯示,預先給予鎮痛藥嗎啡、曲馬多等可顯著減少各種傷害性刺激所致的脊髓cFos表達,如機械性損傷、足底注射甲醛等[34]。

既往非甾體類抗炎藥較少用于術后疼痛,而近年來研制出的新型非甾體類抗炎藥如氯諾昔康等已在臨床上越來越多用于術后鎮痛,其機制主要是通過作用于環氧化酶抑制可致痛的前列腺素類物質的產生,其次它也能刺激體內產生內源性阿片類物質。在氯諾昔康的鎮痛基礎研究中,Buritova等將氯諾昔康用于大鼠足底的炎癥疼痛模型,表明氯諾昔康有量效關系,隨著給藥量增加,大鼠足底的腫脹減少,脊髓Fos蛋白表達減少[6]。

本研究采用外科手術致大鼠切口疼痛模型,結果提示隨著氯諾昔康劑量增加,脊髓Fos蛋白表達減少,與手術致痛組比較,氯諾昔康（0.33,1,3,9mg/kg）劑量依賴性減少脊髓背角淺層Fos蛋白表達（22%,45%,69%,82%）,說明氯諾昔康對手術致痛有鎮痛作用。

【參考文獻】

[1]趙欣,陳蕾,諸燕,等.氯諾昔康用于術后鎮痛的療效及安全性[J].臨床麻醉學雜志,2006,22（6）：7778.

[2]BrennanTJ,VandermeulenEP,GebhartGF.Charaterizationofaratmodelofincisionalpain[J].Pain,1996,64(3):493501.

[3]高田,胡興國,曾因明.鞘內注射嗎啡對切口痛大鼠脊髓Fos表達的影響[J].蚌埠醫學院學報,2007,32（1）：1821.

[4]林青,楊錫馨,林財珠.曲馬多對福爾馬林致痛大鼠行為學及脊髓Fos蛋白表達的影響[J].中華麻醉學雜志,2004,24（5）：398399.

[5]HonoreP,BuritovaJ,BessonJM.CarrageeninevokedcFosexpressioninratlumbarspinalcord:Theeffectsofindomethacin[J].EurJPharmacol,1995,272(2):249259.

[6]BuritovaJ,BessonJM.Doserelatedantiinflammatory/analgesiceffectsoflornoxicam:AspinalcFosproteinstudyintherat[J].InflammRes,1998,47(1):1825.