小議金標法與滴度法的應用及效果觀察

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【摘要】目的探討金標法以及TRUST滴度法檢測梅毒螺旋體的效果。方法采用酶聯免疫吸附試驗,甲苯胺紅滴度法(TRUST)對147例臨床樣本進行初級篩選試驗，并對初篩結果陽性的49例血清進行金標法梅以及毒螺旋體檢驗。結果酶聯免疫吸附試驗滴度法(TRUST)試驗陽性的49例樣本中，金標法陽性46例，二者的符合率為93.88%。結論金標法與(TRUST)滴度法其靈敏度、特異性無顯著性差異(P>0.05),可以聯合應用于臨床中梅毒的檢測，提高檢出率。

【關鍵詞】梅毒;抗體;金標法;滴度法

大量的臨床資料以及有關的流行病學調查結果顯示，在我國梅毒的發病率有逐年上升的趨勢[1～2]。因此，開發出一種簡便的、快速的同時具有較高靈敏度及特異性的檢查方法，對于該種疾病的預防、治療以及篩查大量的獻血者無疑具有十分重要的意義。對篩查者進行血清學檢測是診斷梅毒的重要依據之一，在梅毒的診斷、治療以及研究上具有非常重要的意義。因此，本院將金標法，TRUST滴度法分別應用于對梅毒的檢測，由于TPPA是公認的比較好的梅毒抗體的確認方法，因此分別對樣本進行檢測，在以TPPA結果進行對比，觀察其結果的一致性，現將分析報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

本組標本選擇作者單位2006年4月以來143例，先對臨床樣本進行初級篩選試驗，再對初篩結果呈陽性的49例血清，進行金標法以及梅毒螺旋體檢驗。其中男性26例，女性23例，年齡18～78歲，平均年齡(48±26.5)歲。

1.2檢測試劑

甲苯胺紅TRUST試劑(上海榮盛生物工程有限公司。批號20010301);金標法試劑(上?？迫A生物。批號：200110225);TPPA試劑(上海實業科華生物技術有限公司。批號：200110201)

1.3方法

梅毒螺旋抗體檢測：采集上述的試劑盒中所要求的血清(漿)樣本，并且按照試劑盒的說明分別進行檢測。

1.4統計學方法

采用SPSS15.0統計學軟件進行統計學分析。配對計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

根據相關文獻，TPPA是公認的較好的梅毒抗體確認方法，以其結果為標準。其中，采用金標法試劑的假陽性率為4.00%(2/50)，假陰性率為12.40%(12/97);TRUST滴度法試劑的假陽性率為6.25%(3/48)，假陰性率為35.05%(34/99)。TRUST滴度法和金標法之間在假陽性之間無明顯的區別(χ2值分別為0.43，0.41，P>0.05)，TRUST滴度法的假陰性率明顯高于金標法(7.08，6.97，P<0.01)。表1金標法和TRUST滴度法陽性例數比較

3討論

梅毒螺旋體檢測,以此明確患者受血前或術前的情況,是如今醫學發展的必經步驟，是新的《醫療事故處理條例》實行舉證責任倒置的參照。在傳染性指標的檢測中，選擇初篩試驗時，試驗的靈敏度很重要，敏感性差的，易出現漏檢，不適合篩選獻血者及輸血前患者各傳染性指標的檢測。

梅毒螺旋體侵入機體后產生兩種抗體：為心磷脂抗體及抗密螺旋體抗體，檢測前者的方法，目前，在國內最為常用的是RPR和TRUST滴度法，且長期以來成為篩查檢測獻血者的主要方法。機體感染梅毒螺旋體后，產生特異性抗螺旋體抗體(TPAb)及非特異性的抗類脂質抗體。梅毒特異性抗體出現早、消失慢，即使經正規的抗梅毒治療，仍然檢出了特異性抗體，甚至可終生檢出[3]。據文獻[4]報道，人體感染梅毒螺旋體后，血清中產生的抗螺旋體抗體相對與抗類脂質抗體早[5]。

膠體金免疫層析法即金標法，是近幾年發展起來的繼三大標志免疫檢測之后一種新的免疫檢測技術[6]。該試驗的原理是將各種試劑逐一固定在同一張試紙條上，檢測標本列于試紙條的一端，一種試劑溶解后，通過毛細血管作用移動，與條上另外的試劑接觸發生反應，像層析一樣[7]。

TPPA檢測血清中的梅毒螺旋體抗體，特異性好、靈敏度高，已是目前公認的檢測梅毒血清試驗方法;但因試劑較貴，檢測用時較長。金標法，采用了純化重組基因的梅毒抗原，膠體金作為其指示標記，硝酸纖維素膜上進行反應，雙抗原夾心法原理為基礎，快速定性的檢測人血清(血漿)中的梅毒螺旋體特異性抗體，其特異性、靈敏度與TPPA相近，符合率為93.88%(46/49)，從而替代TPPA作為快速梅毒血清確證試驗。但是血清(血漿)中特異性梅毒螺旋體抗體濃度過低時，梅毒螺旋體抗體膠體金法會產生假陰性反應，這就需要與TPPA方法結合，再進行綜合的判斷。

本實驗結果顯示，金標法其特異性和TPPA相比無顯著差異，且明顯好于TRUST法。TRUST滴度法和金標法之間在假陽性之間無明顯的區別，但是TRUST滴度法的假陰性率明顯高于金標法，由于金標法檢測在老年患者中存在較高的假陽性率，因此在初篩試驗陽性時，必須進一步選擇TRUST試驗并結合臨床進行綜合分析，才能做出準確診斷。金標法試劑成本低，符號顯示結果明確，操作簡便，可分批或單人份檢測，結果易保存。因此，采用靈敏特異的梅毒螺旋體抗體診斷金標法可以完全與TRUST滴度法相互替代。作為大批量標本梅毒篩查的理想方法，又可以作為診斷試驗。

【參考文獻】

[1]梁慶華.3種方法聯合檢測在老年梅毒診斷中的應用價值[J].檢驗醫學與臨床,2009,6(7):498～499.

[2]秦紅群,馬順高.梅毒螺旋體抗體篩查實驗的選擇[J].中國現代醫生,2008,46(28):146～147.

[3]LambertNL,FisherM,ImrieJ,munithbasedsyphilisscreening:feasibility,acceptalility,andeffectivenessincasefinding[J].SexTransmInfectJT-SexuallyTransmittedInfections,2005,81(3):213～216.

[4]ImrieJ,LambertN,MercerCH,etal.Refocusinghealthpromotionforsyphilisprevention:resultsofacase-controlstudyofmenwhohavesexwithmenonEngland''''ssouthcoast[J].SexTransmInfectJT-Sexuallytransmittedinfections,2006,82(1):80～83.

[5]朱學駿.現代皮膚病性病診療手冊[M].第2版.北京：北京醫科大學出版社,2001:319～321.

[6]信紅霞,王成英,李永海,等.聯合篩查無償獻血者HbsAg/Tp金標試紙的應用評價[J].黑龍江醫藥科學,2008,31(5):69.

[7]李從鳳.梅毒螺旋體兩種檢測方法的比較[J].檢驗醫學與臨床,2010,7(4):355～356.