消斑顆粒質量標準研究論文

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【摘要】目的建立消斑顆粒的質量標準。方法應用薄層色譜法對消斑顆粒中制何首烏、陳皮、當歸與川芎進行了定性鑒別；采用高效液相色譜法對顆粒中2,3,5,4ˊ四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷進行了含量測定。結果薄層色譜斑點清晰，陰性樣品無干擾；2,3,5,4ˊ四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷在0.131～1.965μg范圍內呈良好的線性關系，r=0.99997，加樣回收率在95%～105%之間，RSD為2.05%（n＝5）。結論該方法簡便且精確，重現性好，可以作為消斑顆粒的質量控制標準。

【關鍵詞】消斑顆粒；薄層色譜法；高效液相色譜法

TheQualityStandardofXiaobanGranules

Abstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardofXiaobanGranules.MethodsPolygonummultiflorumThunb.,CitrusreticulataBlanco,Angelicasinensis(Oliv.)DielsandLigusticumchuanxiongHort.wereidentifiedbythinlayerchromatography,andthecontentof2,3,5,4ˊTetrahydroxystilbene2OβDglucosideweremeasuredbyHighPerformanceLiquidChromatography.ResultsChromatographyspeckleswereclear,andthenegativesampleshowednointerference;2,3,5,4ˊTetrahydroxystilbene2OβDglucosideshowedagoodlinearrelationshipatarangeof0.131～1.965μg,r=0.99997,therecoverywasbetween95%and105%,withRSD2.05%（n＝5）.ConclusionThemethodissimpleandaccuratewithgoodreproducibility.ItcanbeusedforqualitycontrolofXiaobanGranules.

Keywords：XiaobanGranules;TLC;HPLC

消斑顆粒由制何首烏、熟地黃、當歸、川芎、陳皮等藥組成，具有益氣養血活血、滋陰填精補腎的功效，主要用于氣血兩虛型黃褐斑的治療。為確保制劑質量，對制劑中制何首烏、陳皮、當歸與川芎進行了定性薄層色譜鑒別，并選擇君藥制何首烏中所含2,3,5,4ˊ四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷作為控制消斑顆粒質量的控制指標，采用高效液相色譜法測定其含量，建立了消斑顆粒中2,3,5,4ˊ四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的HPLC含量測定方法。

1儀器和試藥

1.1儀器HP1100高效液相色譜儀（惠普），惠普化學工作站，二極管陣列檢測器，電子分析天平（十萬分之一,STRTORIUS公司），AS10200超聲波清洗器（50kHz）。

1.2試藥硅膠G、硅膠H（青島海洋化工廠）；甲醇、乙腈（色譜純）；重蒸餾水；其余試劑均為分析純；橙皮苷對照品，批號：7219405；2,3,5,4ˊ四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷對照品，批號：110844200505；何首烏對照藥材，批號：9349403；陳皮對照藥材，批號：9699201；當歸對照藥材，批號：9279202；川芎對照藥材，批號：9189001；以上對照品及對照藥材均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2方法與結果

2.1定性鑒別

2.1.1制何首烏的薄層色譜鑒別取本品5g，加10ml水溶解，用乙醚提取兩次，20ml/次，棄去乙醚液，水層用水飽和正丁醇提取2次，20ml/次，合并正丁醇液，水浴揮干，殘渣加甲醇2ml溶解，作為供試品溶液。取缺制何首烏的陰性樣品5g，同法制成制何首烏陰性供試品溶液。另取2，3，5，4ˊ-四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。取何首烏對照藥材0.25g，加乙醇50ml，加熱回流1h，濾過，濾液濃縮至3ml，作為對照藥材溶液。吸取對照品溶液、對照藥材溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl分別點于同一以0.2%CMCNa為黏合劑的硅膠H薄層板上，以苯乙醇（2∶1），苯乙醇（4∶1）為展開劑(第一次展開3.5cm,第二次展開7cm)，展開，取出，晾干，噴以磷鉬酸硫酸溶液，加熱至斑點清晰，日光下檢視［1］。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點，且陰性對照無相應斑點見圖1。

2.1.2陳皮的薄層色譜鑒別取本品5g，加醋酸乙酯超聲提取兩次，10ml/次，合并醋酸乙酯提取液，水浴揮干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。取缺陳皮的陰性樣品5g，同法制得陳皮陰性供試品溶液。取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。取陳皮對照藥材0.3g，加甲醇10ml，加熱回流40min，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液［1］。吸取對照品溶液、對照藥材溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各2μl分別點于同一聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷丙酮甲醇（5∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色熒光斑點，且陰性對照無相應斑點見圖2。

2.1.3當歸、川芎的薄層色譜鑒別取本品15g，加乙醚30ml，超聲處理10min，分取乙醚液，揮至1ml，作為供試品溶液。取缺當歸、川芎陰性樣品15g,同法制得當歸、川芎陰性供試品溶液。取當歸對照藥材0.5g，加乙醚20ml，超聲處理10min,分取乙醚液，揮至1ml，作為當歸對照藥材溶液。取川芎對照藥材0.5g，加乙醚20ml，超聲處理10min，分取乙醚液，揮至1ml，作為川芎對照藥材溶液。吸取對照藥材溶液、供試品溶液、陰性供試品溶液各10μl分別點于同一以0.2%CMCNa為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色熒光斑點，且陰性對照無相應斑點見圖3。

圖1制何首烏TLC鑒別（略）

圖2陳皮TLC鑒別（略）

圖3當歸、川芎TLC鑒別（略）

2.2含量測定［2～3］

2.2.1色譜條件色譜柱為依利特ODSC18（150mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈水（25∶75），流速：0.6ml/min，檢測波長：320nm，柱溫：20℃。

2.2.2對照品溶液制備精密稱取2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷對照品1.31mg，置10ml量瓶中，用稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3供試品溶液制備取本品約0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，加50%乙醇25ml，稱定重量，回流提取40min，放冷后用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.4線性關系考察精密吸取2，3，5，4，四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷對照品溶液1，3，5，10，、15μl，分別進樣，按上述色譜條件測定峰面積。結果見表1。以峰面積（Y）對進樣量（X）進行回歸，計算回歸方程，并以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，見圖4。

表1線性關系考察結果（略）

圖42，3，5，4ˊ-四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷標準曲線（略）

回歸方程：Y=3781X﹣43.749，r=0.99997結果表明，2，3，5，4，四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷在0.131～1.965μg的范圍內呈良好的線性關系。

2.2.5方法學考察

2.2.5.1精密度實驗精密吸取供試品溶液5μl，按上述色譜條件，重復進樣5次，測定峰面積。結果見表2。

結果表明，供試品中2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷峰面積的相對標準偏差小于2.0%，精密度良好。

表2精密度實驗結果（略）

2.2.5.2重現性實驗取同一批供試品5份，按供試品溶液的制備方法制備，分別進樣5μl，測定峰面積。結果見表3。

結果表明，供試品中2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量相對標準偏小于2.0%，重現性良好。

表3重現性實驗結果（略）

2.2.5.3穩定性實驗精密吸取供試品溶液5μl，于0，2，4，6，8h分別進樣，依次測定峰面積，計算相對標準偏差，結果見表4。

表4穩定性實驗結果（略）

結果表明，在8h內，供試品溶液穩定性良好（RSD＝0.80%）。

2.2.5.4專屬性實驗取二苯乙烯苷對照品溶液，何首烏對照藥材溶液，缺何首烏陰性供試品溶液和供試品溶液，按照2.2.1色譜條件進行測定，結果見圖5。

a2，3，5，4，四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷

b何首烏對照藥材溶液c陰性供試品溶液

d供試品溶液

圖5HPLC圖譜（略）

結果表明，在上述色譜條件下，其他組分對2，3，5，4，四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷峰無干擾，分離良好。

2.2.5.5加樣回收率實驗取已知含量的供試品約0.5g，精密稱定6份，置100ml具塞錐形瓶中，分別精密加入1ml2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷對照品溶液（2.38mg/ml），按照供試品溶液的制備方法操作得供試品溶液，按照上述色譜條件測定，并計算回收率，結果見表5。

結果表明，2，3，5，4四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷平均回收率為100.69%，回收率在95%～105%之間，RSD＝2.05%，加樣回收率良好。

表5加樣回收率實驗結果（略）

2.2.6樣品含量測定取本品3批，每批兩份，取約0.5g，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法，分別制成供試品溶液。分別精密吸取2，3，5，4四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷對照品溶液（0.131mg/ml）、供試品溶液各5μl，按上述色譜條件測定，結果見表6。

表6供試品中二苯乙烯苷含量測定結果（略）

3討論

3.1制何首烏為方中君藥，主要含2，3，5，4四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷，且方中其它藥材無該成分，故選擇2，3，5，4四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷作為控制本品質量的指標成分。

3.2在薄層色譜鑒別研究中，陳皮按照藥典收載方法展開，斑點暗淡,Rf值較小，不易鑒別，根據橙皮苷的理化性質，將藥典中0.5%氫氧化鈉－硅膠G薄層板改為聚酰胺薄膜，斑點清晰，分離度較好，且Rf值合適。川芎和當歸，兩者均含有阿魏酸，易互相產生干擾，將其一起鑒別，結果陰性無干擾，斑點圓整、清晰。

3.3在制何首烏含量測定中，分別考察不同提取方法、不同提取溶劑和不同提取時間對供試品溶液中2，3，5，4四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量的影響，結果以50%乙醇回流提取40min為最佳。

在色譜條件的優選中，對色譜柱、檢測波長、流動相、柱溫、流速進行了考察確定采用依利特ODSC18（150mm×4.6mm，5μm）柱，波長320nm，乙腈水（25∶75）為流動相，柱溫20℃，流速0.6ml/min為測定條件。

3.4在2，3，5，4四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷含量測定過程中，發現對照品溶液和供試品溶液在放置24h后，含量有降解下降的趨勢，故樣品和對照品配制成供高效液相色譜測定用溶液后，應該在8h內完成測定。

本研究應用薄層色譜法對消斑顆粒中制何首烏、陳皮、當歸與川芎進行了定性鑒別，采用高效液相色譜法對顆粒中2,3,5,4ˊ四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷進行了含量測定，操作簡便，結果準確，重現性好，可作為質量控制方法。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：122，132.

［2］劉斌,王曉強，王偉.何首烏配方顆粒質量標準研究［J］.中藥材，2003,26(2)：115.

［3］唐斌，尚北城，張青，等.何首烏中二苯乙烯苷的含量測定［J］.西南國防醫藥，2004,14(5)：496