益母草有效成分分析論文

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1儀器、試劑與藥材

1.1儀器與試劑CS-9301PC雙波長飛點層析掃描儀(日本島津公司);CAMAGLINOMATV半自動點樣儀(瑞士卡馬公司);定量毛細管(美國MICROCAPS公司);XS205雙量程電子分析天平，量程：萬分之一和十萬分之一兩檔(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);硅膠G板(青島海洋化工廠);DU-70紫外-可見分光光度計(美國BACKMAN公司);鹽酸水蘇堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110712-200407;苯酚、濃硫酸和葡萄糖等其他化學試劑均為分析純;水為蒸餾水。

1.2藥材分別采自貴州省惠水縣和貴陽市郊烏當，藥材樣品均經貴陽中醫學院魏升華講師鑒定為紅花益母草LeonurusjaponicusHoutt.，本實驗均用益母草地上部分。

2方法與結果

2.1水蘇堿的分析[5]

2.1.1供試品溶液和對照品溶液的制備精密稱取干燥益母草樣品粉末約1g，置圓底燒瓶中，加入乙醇約50ml，加熱回流1.5h，放冷，濾過，濾渣及回流容器用乙醇50ml分次洗滌，合并濾液和洗液，蒸干，殘渣用乙醇溶解，轉移至10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心(5000轉/min，5min)，取上清液作為供試品溶液。精密稱取在105℃干燥3h的水蘇堿對照品適量，加乙醇制成每1ml含2.030mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2薄層色譜分析條件用硅膠G薄層板，點狀點樣，點樣量10μl。以正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯(8：3：1)為展開劑，展開，取出晾干后，在105℃加熱15min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液-1%三氯化鐵乙醇溶液(10：1)混合溶液至斑點顯色清晰，晾干，立即在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布密封。反射法單波長鋸齒形掃描。波長λS=510nm，狹縫0.4mm×0.4mm。在上述分析條件下對薄層色譜進行掃描分析。

2.1.3線性關系的考察用半自動點樣儀在同一硅膠G薄層板上點鹽蘇堿對照溶液2、4、6、8、10、12、14μl，用上述條件展開顯色后進行薄層掃描測定，以點樣量(μg)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，求出回歸方程為：Y=185.75X-411.09，r=0.996，表明水蘇堿在4.06～28.42μg范圍內線性關系良好。由于直線不通過原點，因此用外標兩點法計算含量。

轉貼于中國論文下載中心2.1.4穩定性考察在同一塊薄層板上分別點8μl樣品溶液和10μl對照品溶液，依上述色譜條件和掃描條件操作，分別在0、0.5、1、1.5、2h掃描測定鹽酸水蘇堿峰面積，結果峰面積的RSD為0.38%，表明鹽酸水蘇堿在本實驗條件下2h內穩定。

2.1.5同板精密度和異板精密度試驗分別在同一薄層板上和在另外5塊薄層板上點同一供試品溶液五個點，每個點10μl，并以水蘇堿對照品溶液3、8μl作為隨行標準，分別掃描測定其峰面積，按上述分析條件測定，以峰面積計算，同板精密度RSD為1.00%，異板精密度RSD為1.90%。

2.1.6重復性試驗和回收率試驗分別稱取同一益母草藥材5份，按2.1.1“供試品溶液的制備”和2.1.2“薄層色譜分析條件”操作，測得水蘇堿平均含量為1.09%，RSD為2.52%。精密稱取鹽酸水蘇堿平均含量為1.09%的益母草藥材5份，每份約0.5g，精密加入水蘇堿對照品5.00mg，同時加入約50ml乙醇回流提取，按上述“供試品溶液的制備”方法和“薄層色譜分析條件”進行溶液制備和測定，結果5次回收率平均值：99.76%，RSD=1.34%。

2.1.7含量測定與結果按上述“供試品溶液制備方法”和“薄層色譜分析條件”對各樣品進行溶液制備和測定，結果見表1。表1益母草樣品中水蘇堿和多糖含量測定結果

2.2多糖的分析[6]

2.2.1供試品溶液和對照品溶液的制備精密稱取干燥益母草粉末約0.3g，置圓底燒瓶中，精密加入50ml蒸餾水后稱重，加熱回流提取3h，冷卻后稱重，用水補足損失量，搖勻，過濾，棄去初濾液，取續濾液4ml于50ml容量瓶中，用水定容至刻度，作樣品液。從樣品液中精密量取2ml于25ml比色管中，分別精密加入5%的苯酚1ml、濃硫酸5ml,搖勻，置沸水浴中保持15min后取出，冷至室溫，即為供試品溶液。精密稱取經105℃干燥至恒重的無水葡萄糖適量，用水制成每1ml含56.17μg的溶液，作對照品溶液。

2.2.2標準曲線的制作精密吸取56.17μg/ml葡萄糖對照品溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0ml,分別置于25ml比色管中,體積不足2ml者用水補足至2ml,以下按2.2.1“供試品溶液的制備”項下“分別精密加入5%的苯酚1ml”起，同法操作即得。以相應試劑為空白，于491nm波長處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標,濃度C為橫坐標,繪制標準曲線,得回歸方程：A=0.0592C-0.00113;r=0.9997

結果表明葡萄糖在2.1064～14.0425μg/ml范圍內，線性關系良好。

2.2.3精密度和穩定性實驗用同一供試品溶液連續5次測定其吸光度和每隔1h測定一次吸光度,共測定4次，計算出精密度實驗的RSD%為0.22;穩定性試驗的RSD%為0.55。表明儀器精密度良好，顯色后的溶液3h內穩定。

2.2.4重復性試驗和回收率試驗精密稱取2005年6月采收的惠水野生益母草樣品5份,每份約0.3g，按2.2.1“供試品溶液的制備”方法制備供試溶液,按2.2.2“標準曲線的制作”項下的相同測試條件進行測定。樣品含量平均值為4.46%，RSD%為0.79。精密稱取已知多糖平均含量為4.46%的益母草供試品5份，每份約0.16g，分別精密加入濃度為0.142g/ml的葡萄糖對照品溶液50ml，以下按2.2.1“供試品溶液的制備”方法制備供試溶液，按2.2.2“標準曲線的制作”項下的相同測試條件進行測定，結果平均回收率為98.87%，RSD%為0.71。

2.2.5樣品含量測定按“2.2.1”項供試品溶液制備方法制備供試品溶液，用“2.2.2”“標準曲線的制作”項下的相同測試條件對各樣品進行多糖含量測定(含量按葡萄糖計)結果見表1。

3討論

水蘇堿是益母草的主要藥用成分之一，而多糖雖不是益母草的主要藥用成分，但對許多疾病的輔助治療作用卻不可忽視。由實驗數據看出，人工種植益母草中水蘇堿含量在開花前隨生長年限變化呈遞增趨勢，此時益母草中的多糖含量也相對較高。而到果期水蘇堿含量明顯下降的同時，多糖含量也明顯下降。多糖類化合物廣泛存在于植物細胞壁中，也就是說多糖的存在是水蘇堿在植物體內合成的一種保障，果期由于植物體內大量消耗糖分，水蘇堿的合成也相應降低，含量也隨之降低。人工種植益母草與野生益母草相比，由于注意管理，人工種植益母草中水蘇堿和多糖含量較高，而野生益母草中卻相對較低。

從人工種植益母草中水蘇堿和多糖含量變化有一定規律來看，中藥制劑的質量首先是原料藥材的質量要得到保證，其質量才可控，而野生益母草生長年限難以確定，水蘇堿和多糖含量變化也不易掌握，因此用其作為原料生產的復方制劑質量也難以保證。人工種植益母草是中藥制劑質量控制的一個發展方向，掌握其最佳采收時間，控制原料藥材的質量，也就保證了中藥制劑質量的穩定。所以，益母草由野生轉為人工種植勢在必行。

【參考文獻】

1范美華，王健鑫，李鵬，等.益母草的研究進展.中藥藥物與臨床，2006，6(7)：528.

2張嫻，彭國平.益母草屬化學成分研究進展.天然產物研究與開發，2003，15(2)：162-166.

3劉吉成,牛英才.多糖藥物學.北京：人民衛生出版社,2008，1.

4吳華振.植物多糖的藥理作用及應用進展.實用醫技雜志，2005，12(7)：1803-1804.

5國家藥典委員會.中國藥典(一部).北京：化學工業出版社，2005，203.

6高言明,陳海云,龔飛.中藥金櫻子不同采收期多糖的含量分析.貴陽中醫學院學報，2005，27(1)：57-58.

【摘要】目的考察益母草野生品和栽培品中主要有效成分水蘇堿和多糖的含量，為人工種植益母草的必要性提供依據。方法分別采用薄層掃描法測定水蘇堿，分光光度法測定多糖。結果栽培品中水蘇堿和多糖含量普遍比野生品含量高，且含量變化有一定規律性。結論為保證益母草藥材質量，應該采用人工種植為好。

【關鍵詞】益母草;水蘇堿;多糖