開口箭總皂苷含量分析論文

導語：開口箭總皂苷含量分析論文一文來源于網友上傳，不代表本站觀點，若需要原創文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的建立開口箭中總皂苷含量測定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶液為發色體系，檢測波長為（458±2）nm。結果標準曲線在0.10～0.40mg范圍內(r=09997)線性關系良好。平均回收率97.2%，方法的變異系數為4.57%，測得開口箭70%乙醇提取物中總皂苷平均含量為13.51%。結論方法簡便，準確，重現性好，可用于開口箭總皂苷含量測定。

【關鍵詞】開口箭總皂苷開口箭比色法

Abstract:ObjectiveTosetupanassaymethodforthedeterminationoftotalsaponininTupistrachinensisBak.MethodsThesamplesweredeterminedbyspectrophotometry.Thedetectivewavelengthwas(458±2)nm.ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.1～0.4mgandtheaveragerecoverywas97.2%(RSD＜4.57%).ConclusionThemethodisreliable,accurate.ItcanbeusedforthequalitycontrolofthetotalsaponininTupistrachinensisBak.

Keywords:Totalsaponin；TupistrachinensisBak.；Spectrophotmetry;Spectrophotometry

開口箭TupistrachinensisBak.系百合科（Liliaceae）鈴蘭族開口箭屬植物。其原植物又名開喉箭、萬年青，為多年生常綠草本，以其根狀莖入藥，作為藥用又名巖七、竹根七、竹節參、竹根七、竹節七、牛尾七等。醫學古籍記載，開口箭味甘微苦，性寒，主治勞熱咳嗽、跌打損傷、風濕痹痛、月經不調等癥。土家族民間用其漱口液治療咽喉炎、扁桃體炎，療效顯著［1］。我國開口箭屬植物約占全世界的70%,分布于陜西、甘肅、湖北、四川、云南、貴州等省。主產于湖北三峽庫區及神龍架林區，栽培面積大，產量高，資源十分豐富。

本實驗室對神農架產開口箭TupistrachinensisBak.的生藥學、化學成分和藥理活性進行了研究，結果表明開口箭正丁醇提取物對Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，細胞毒活性好，抗炎活性也很好。也曾報道了“開口箭中甾體皂苷元的含量測定”［2］。本文進一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法測定開口箭中總皂苷含量的方法。

1材料與儀器

1.1材料

開口箭根莖，采自湖北省神農架林區，其原植物標本于200207采自同一地區，經三峽大學化學與生命科學學院陳發菊副教授鑒定為TupistrachinensisBak.，原植物及藥材現保存于本實驗室（編號TC200207SNJ）?？傇碥諏φ掌罚緦嶒炇易蚤_口箭分離純化的皂苷單體3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b,22a,26-三羥基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC測定）。其他試劑均為分析純。

1.2儀器S3100紫外分光光度計（韓國Scinco公司），BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）。

2方法

2.1對照品、供試品溶液的制備

2.1.1對照品溶液的制備精密稱取經干燥至恒重的開口箭總皂苷對照品0.0050g，加甲醇溶解定容至5ml，制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2供試品溶液的制備精密稱取開口箭粉末0.70g（60目篩，50℃干燥4h）置圓底燒瓶中，加入25ml70%乙醇溶液，浸泡過夜，60℃回流提取兩次，2h/次,減壓抽濾，濾液合并，置蒸餾燒瓶中，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮，除盡溶劑后，加少量甲醇溶解，定容至25ml，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.2測定方法適量供試品溶液置干燥具塞試管，60℃水浴揮干溶劑后，精密加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，搖勻，置60℃恒溫水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中冷卻15min，加入5ml冰醋酸，搖勻，同時做空白，于（458±2）nm波長處測定吸光度值。

2.3標準曲線的繪制與線性關系精密吸取對照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40ml，分別加入干燥具塞試管中，60℃水浴揮干溶劑,依次加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸，置60℃水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中15min，停止反應，加入5ml冰醋酸，搖勻，于458nm處測定吸光度，同時做試劑空白。以吸光度為縱坐標，以對照品質量為橫坐標,繪制標準曲線,得線性回歸方程W=0.0631+0.2835A，r=0.9997，對照品在0.10～0.40mg范圍內線性關系良好。

3結果

3.1精密度及重現性實驗精密吸取對照品溶液0.2ml,共6份，按“2.2”項下方法自60℃水浴揮干起測定（見表1）。其RSD為1.09%，表明方法精密度良好。精密稱取樣品粉末0.07g，共5份，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取0.05ml,顯色測定（見表2）。其RSD為4.58%，表明方法重現性良好。表1精密度實驗結果（略）表2重現性實驗結果（略）

3.2顯色溶液穩定性實驗精密量取對照品溶液和供試品溶液適量，分別按標準曲線的制備方法顯色后放置,于0，30，60，90，120min測定吸收度值（見表3）。結果表明對照品和供試品在120min內顯色穩定。表3顯色后溶液穩定性實驗結果（略）

3.3加樣回收率實驗精密稱取已知總皂苷含量的開口箭粉末，共5份,加入對照品適量,按照供試品溶液制備方法制備，顯色測定。結果見表4,平均回收率為97.2%，RSD為2.26%。表4加樣回收率實驗結果（略）

3.4樣品含量測定精密吸取按供試品溶液0.05ml,按“2.2”測定方法項下操作，同時做空白，計算供試品中總皂苷含量。結果見表5。結果表明開口箭70%乙醇提取物總皂苷含量為135.1mg/g，其百分含量為13.51%，RSD為4.57%。表5樣品中總皂苷含量測定結果（略）

4討論

經過對皂苷類含量測定文獻的統計與分析，選定下列4種顯色劑：0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸、0.5ml8%香草醛乙醇溶液和5.0ml72%硫酸試液、高氯酸、0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8ml高氯酸；4種不同的顯色溫度：55，60，65，70℃；4種不同的顯色時間：10，15，20，25min；通過實驗進行比較。發現用0.2ml5%香草醛-冰醋酸和0.8ml高氯酸作顯色劑，顯色溫度為60℃，顯色時間為20min時，對照品溶液與供試品溶液在（458±2）nm波長處均有最大吸收。

對照品溶液依法顯色后，溶液的波長（400～700nm）掃描圖中，在458和554nm兩處均出現最大吸收峰，但供試品溶液的最大吸收峰分別在456nm和580nm處，表明供試品溶液在580nm處的吸收峰有其它成分干擾，而在456nm處的吸收峰無其它成分干擾，吸收穩定。

供試品溶液制備時分別用水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作溶劑，進行比較，發現70%乙醇溶液浸泡開口箭粉末時其總皂苷溶出量最大。

建立了開口箭總皂苷含量測定方法，采用5%香草醛-冰醋酸溶液為發色體系的比色法測定開口箭中總皂苷的含量，顯色后溶液在120min內穩定，標準曲線在0.10～0.40mg范圍內線性關系良好，方法的精密度和重現性好，RSD分別為1.09%和4.58%；加樣平均回收率為97.2%，RSD為2.26%；測得開口箭70%乙醇提取物中總皂苷平均含量為135.1mg/g，其平均百分含量為13.51%，RSD為4.57%，方法操作簡便，精密度及準確度高,重現性及穩定性好,可用于開口箭藥材的質量控制。

【參考文獻】

［1］翟士輝.土家族藥開口箭漱口液臨床應用治療咽喉炎45例［J］.中國民族民間醫藥雜志，1999，(3):140.

［2］黃麗，廖全斌，鄒坤，等.開口箭中甾體皂苷元的含量測定［J］.三峽大學學報（自然科學版），2003，25（6）:562.