肝愈膠囊的質量標準研究論文

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【摘要】目的建立控制肝愈膠囊的質量標準。方法對肝愈膠囊中主要成分丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子進行了薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法測定黃芩苷的含量。結果薄層色譜法可以對該制劑中的丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子作出準確鑒別；黃芩苷的線性范圍為0.12～0.58μg，r=0.9997，平均加樣回收率為99.06，RSD為1.40(n=5)。結論方法靈敏、簡便、重現性好，可作為該制劑的質量標準。

【關鍵詞】肝愈膠囊黃芩苷薄層色譜高效液相色譜

Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforGanyuCapsule.MethodsRadixSalviaeMiltiorrhiae,FructusGardeniae,CortexPhellodendri,RadixAstragaliandFructusSchisandraewereidentifiedbyTLC.BaicalinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTLCspotsdevelopedwerefairlyclear,andtheblanktestshowednointerference.Baicalinshowedagoodlinearrelationshipintheconcentrationrangeof0.1168～0.5840μg，andtheaveragerecoverywasupto99.06%,RSDwas1.4%.ConclusionThemethodisaccurate,reproducibleandsimple.Itcanbeusedasthequalitycontrolofthispreparation.

Keywords:GanyuCapsule;Baicalin;TLC;HPLC

肝愈膠囊由黃芩、丹參、梔子、黃柏、黃芪、五味子等中藥組成，具有清熱解毒、益氣活血的功效。主治氣陰兩虛型肝炎。為控制本品的內在質量，本實驗采用TLC，HPLC等方法對其進行質量標準研究。

1儀器與試藥

Waters600E2487型高效液相色譜儀﹙美國﹚；Millennium色譜工作站數據處理系統﹙美國﹚；BP211D電子天平﹙德國﹚。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。黃芩苷﹙7159908﹚供含量測定用，純度99.02%﹚、丹參酮ⅡА﹙07669903﹚、梔子苷﹙07499806﹚、鹽酸小檗堿﹙7139813﹚、黃芪甲苷﹙07819806﹚、五味子乙素﹙07659706﹚，對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。肝愈膠囊3批樣品：040105，040108，040111﹙自制﹚。硅膠G﹙青島海洋化工廠﹚。

2方法與結果

2.1薄層鑒別

2.1.1丹參的鑒別［1］

取本品內容物3g，研細，加乙醚20ml，超聲處理20min，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材粗粉1g和按處方量從中除去丹參藥材的陰性對照品粗粉4g，分別同法制成對照藥材溶液和陰性對照液。再取丹參酮ⅡA對照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法實驗［1］，吸取上述4種溶液各6μl,分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯﹙19∶1﹚為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性對照色譜在相應的位置上無此斑點。見圖1。

2.1.2梔子的鑒別［1］

取本品內容物3g，加乙醇20ml，超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取梔子對照藥材粗粉1g和按處方量從中除去梔子的陰性對照品粗粉3g，分別加乙醇10ml和20ml,同法制成對照藥材溶液和陰性溶液。再取梔子苷對照品，加乙醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水﹙5∶5∶1∶1﹚為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，而陰性對照色譜中無相應的斑點。見圖2。

2.1.3黃柏的鑒別

取本品內容物2g，加甲醇20ml,超聲處理20min，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃柏對照藥材粗粉0.2g和按處方量從中除去黃柏的陰性對照品粗粉2g，分別加甲醇10ml和20ml,加熱回流提取15min，過濾，濾液濃縮至干，各加1ml甲醇使溶解，分別作為對照藥材溶液和陰性對照溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各3μl,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液﹙6∶3∶1.5∶1.5∶0.5﹚為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置紫外光燈﹙365nm﹚下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。見圖3。

2.1.4黃芪的鑒別［1］

取本品內容物4g，加正丁醇30ml，超聲處理1h，濾過，濾液用1%氫氧化鈉溶液洗滌3次，20ml/次，棄去堿液，用正丁醇飽和的水洗至中性，棄去水液，正丁醇濃縮至干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。。另取黃芪對照藥材粗粉1g和按處方量從中除去黃芪的陰性對照品粗粉4g，分別加正丁醇15ml和30ml，同法制成對照藥材溶液和陰性對照溶液。再取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液和陰性對照品溶液各8μl，對照藥材溶液6μl，對照品溶液4μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水﹙10∶20∶11∶5﹚10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。見圖4。

2.1.5五味子的鑒別［1］

取本品內容物5g，置索氏提取器中，加氯仿30ml，回流提取3h，回收氯仿，殘渣加氯仿2ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材粗粉2g和按處方量從中除去五味子的陰性對照品粗粉5g,分別置索氏提取器中，各加氯仿15ml和30ml，同法制成對照藥材溶液和對照品溶液。再取五味子乙素對照品，加氯仿制成每毫升含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液和陰性溶液各5μl，對照品溶液3μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上，以石油醚﹙30～60℃﹚-甲酸乙酯-甲酸﹙15∶5∶1﹚的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈﹙254nm﹚下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。見圖5。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件的選擇

色譜柱KromasilC18﹙200mm×4.6mm,5μm﹚,流動相：甲醇-水-冰醋酸﹙55∶45∶0.5﹚流速1.0ml/min；檢測波長280nm；柱溫25℃；理論板數按黃芩苷峰計應不低于1500。

2.2.2標準曲線的制備

精密稱取干燥至恒重的黃芩苷對照品2.92mg，置50ml量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含0.00584mg的對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2，4，6，8，10μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以黃芩苷進樣量微克數為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，得一直線，計算回歸方程為Y=2.43×106X-3.74×104，r=0.9997（n=5﹚.結果表明黃芩苷在0.1168～0.5840μg范圍內線性關系良好。

2.2.3供試品溶液的制備

取本品10粒，傾出內容物，研細，取3.0g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50ml,稱定重量，超聲處理﹙功率250W，頻率40kHz﹚30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2.0ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻后過0.45μm微孔濾膜，濾液作為供試品溶液。

2.2.4精密度實驗

精密吸取濃度為0.00584mg/ml的黃芩苷對照品溶液5μl，重復進樣5次，均值為609299，RSD=0.90%﹙n=5﹚，結果表明儀器精密度良好。

2.2.5穩定性實驗

精密吸取供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，分別于0，1，3，7，12h測定峰面積。結果表明峰面積的RSD為0.90%，表明供試品溶液在12h內基本穩定。

2.2.6空白實驗

取樣品和按處方比例不含黃芩的諸藥，按制劑工藝分別制成供試品溶液和陰性對照液，精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，依法測定，結果陰性對照品溶液在與黃芩苷對照品溶液相同保留時間處無色譜峰，表明無干擾。見圖6。

2.2.7重復性實驗

取同一批號樣品，按供試品制備方法平行制備5份，依法測定黃芩苷峰面積，分別計算含量，RSD為1.24%，表明重復性良好。

2.2.8回收率實驗

采用加樣回收法，精密稱取已知黃芩苷含量的同一批號樣品(040105)5份，1.6g/份，分別精密加入黃芩苷對照品8mg，按含量測定方法操作測定，計算，平均回收率為99.06%，RSD為1.4%。結果見表1。表1回收率考察數據（略）

2.2.9樣品含量測定

取3批樣品依法制備供試品溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，計算樣品中黃芩苷的含量。結果見表2。表2樣品含量測定數據（略）

3討論

在黃柏的薄層色譜鑒別實驗中，黃柏鑒別項下［1］的展開劑，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水﹙10∶6∶1∶1﹚進行實驗，結果分離效果不好，Rf值較小，相鄰斑點分不開。后來選用黃連鑒別項下的展開劑，經過多次調整，把展開劑中的水換成濃氨試液，即展開劑為苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)效果較好，結果較穩定。

流動相的選擇“雙黃連顆?！表椣拢?］黃芩苷含量測定的流動相，試驗結果發現黃芩苷達不到基線，保留時間較短，經調整將甲醇比例增大些，醋酸比例縮小，則達到基線分離、保留時間合適，故流動相選用甲醇-水-冰醋酸﹙55∶45∶0.5﹚。

采用參考文獻［1］方法對肝愈膠囊進行薄層色譜鑒別，重現性好，陰性實驗無干擾，經多批樣品鑒別，均能檢出與對照藥材相同的斑點。采用“雙黃連顆粒”項下［1］黃芩苷含量測定的流動相經調整后，基線分離及保留時間合適，各批次含量較穩定，為肝愈膠囊質量控制提供有效的方法。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典，一部［S］.北京：化學工業出版社，2005：52,173，316，44.