不同產地苦蕎質量評價探究

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【摘要】目的:對云南及四川地區的苦蕎質量進行綜合評價，為苦蕎質量監控提供理論依據。方法:收集云南及四川地區的苦蕎樣品16份，采用藥典方法對蘆丁、槲皮素、肌醇、水分、浸出物、重金屬、砷鹽及農藥殘留量進行測定。結果:16份苦蕎樣品的蘆丁含量在1.02%～2.55%，槲皮素含量在0.12%～0.89%，肌醇含量在0.15%～0.51%，水分含量在7.38%～9.94%，浸出物含量在6.28%～18.22%，重金屬及砷鹽均符合限量要求，2種農藥均未檢出。結論:不同產地苦蕎有效成分含量有一定差異，有害物質殘留均符合規定，規定本品水分不得過10%，水溶性浸出物不得少于10%，醇溶性浸出物不得少于5%。

【關鍵詞】苦蕎;含量測定;重金屬;農藥殘留

苦蕎［Fagopyrumtartaricum(Linn)Gaench］屬蓼科蕎麥屬雙子葉植物，多產于云貴高原、黃土高原兩地［1］。其根、莖、葉、花、種子及籽殼中都含有大量黃酮類化合物，如蘆丁、槲皮素、肌醇。傳統醫學和現代醫學都證實苦蕎具有降血糖、降血脂、降尿糖、防便秘等功效［2－3］，被權威專家稱為“三降食品”和“21世紀人類的健康食品”。因此苦蕎中蘆丁、槲皮素及肌醇含量是評價苦蕎功能性優劣的重要指標之一。此外，苦蕎中蛋白質含量也較高，有極高的營養和醫藥價值［4］。蕎麥蛋白除能顯著降低血液膽固醇濃度，其效果優于大豆蛋白質［5］，還具有抗衰老、抑制大腸癌的發生等作用。隨著其臨床研究和應用越來越廣泛，制訂苦蕎的質量標準迫在眉睫。由于水分過多會導致霉變，引入安全性問題，且影響食藥價值。有效成分的含量多少也直接影響療效。且有專家提出:重金屬、農藥殘留量檢查是中藥材走向世界，創立綠色中藥名牌產品的中藥標志之一［6］。為此，本試驗對苦蕎中有效成分進行測定，及對水分，浸出物，重金屬、砷鹽和農藥殘留進行了檢查，旨在為制訂苦蕎的質量標準提供依據。

1儀器與材料

1.1儀器LC－2010型高效液相色譜儀(包括四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器和蒸發光散射檢測器，日本島津)，ODS柱(4.6mm×150mm，5μm，島津)，LunaC18柱(4.6mm×150mm，3μm，Phenomenex公司)，SK3200H超聲提取器(上海儀器制造廠)，CP－224S電子天平(德國賽多利斯)。1.2材料甲醇(色譜純，美國TEDIA天地試劑公司)，乙腈(色譜純，美國MallinckrodtBaker公司)，水(娃哈哈飲用純凈水)，其余試劑均為分析純。蘆丁(批號:09072231)、槲皮素(批號:09120411)對照品購自上海同田生物技術有限公司，肌醇對照品(純度＞98%，鼎瑞化工(上海)有限公司)?？嗍w樣品分別來自云南和四川。

2方法與結果

為了對苦蕎的內在質量有個全面的認識，分別對產自于云南及四川的16個樣品進行了系統性研究，方便對我們的生產使用提供一定的參考依據。2.1蘆丁、槲皮素、肌醇的含量測定。2.1.1色譜條件2.1.1.1蘆丁與槲皮素島津ODS柱(4.6mm×150mm，5μm)，以乙腈–水(含2%的冰醋酸)為流動相，洗脫梯度為:0～18min，乙腈濃度17%～40%，流速:1mL/min，柱溫:25℃，檢測波長:360nm。2.1.1.2肌醇HPLC:甲醇－水(含0.1%的冰醋酸)為流動相，洗脫梯度為:0～5min，甲醇濃度10%～30%，色譜柱:LunaC18柱(4.6mm×150mm，3μm)，流速:1mL/min，進樣量:6μL，室溫操作。ELSD:漂移0;管溫度5℃，載氣壓力40psi。2.1.2對照品溶液的制備。2.1.2.1蘆丁與槲皮素精密稱取蘆丁對照品4.6mg，槲皮素對照品4.0mg，分別置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，再分別取1mL至10mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得蘆丁和槲皮素對照品溶液濃度分別為0.046mg/mL和0.04mg/mL。2.1.2.2肌醇精密稱取肌醇對照品。6.7mg置于25mL容量瓶中，用超純水溶解并定容至刻度，搖勻，再精密移取0.5mL至10mL的容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液濃度為13.4μg/mL。進樣前取適量溶液用0.22μm微孔濾膜過濾。2.1.3供試品溶液的配制。2.1.3.1蘆丁供試品溶液的制備取苦蕎粉末(過60目篩)約100mg，精密稱定，置于25mL容量瓶中，加入80%乙醇5mL，在常溫下超聲(59KHz)提取30min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進樣前取適量溶液用0.45μm微孔濾膜過濾。2.1.3.2槲皮素供試品溶液的制備取苦蕎粉末(過60目篩)約100mg，精密稱定，置于25mL容量瓶中，加入50%乙醇4mL，在常溫下超聲(59KHz)提取30min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進樣前取適量溶液用0.45μm微孔濾膜過濾。2.1.3.3肌醇供試品溶液的制備取苦蕎粉末(過60目篩)約100mg，精密稱定，置于25mL容量瓶中，加入40%甲醇溶液4mL，在常溫下超聲提取20min，用相應的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進樣前取適量溶液用0.22μm微孔濾膜過濾。分別取10μL進高效液相色譜儀，記錄峰面積，由線性方程計算各自含量，結果見表1。2.1.4線性關系考察。2.1.4.1蘆丁與槲皮素分別精密吸取2.1.1項下的蘆丁和槲皮素對照品溶液0.5、1、5、10、15、20、25μL和0.5、1、5、10、15μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，以進樣量X(μg)為橫坐標，色譜峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，蘆丁和槲皮素的回歸方程和相關系數分別為:Y=1703415X+9229.6，r=0.9996;Y=3833824X－11994.2，r=0.9999。2.1.4.2肌醇精密吸取2.1.2項下的肌醇對照品溶液2、4、6、8、10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，以進樣量X(μg)為橫坐標，色譜峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，得:Y=156739X+43.2，r=0.9997。2.1.5樣品含量測定取不同來源的苦蕎粉末適量，精密稱定，分別按2.2項下方法制備供試品溶液，按1項下色譜條件進行測定，分別記錄蘆丁、槲皮素及肌醇的峰面積，由線性方程計算各自含量，測定結果見表1。2.2水分的測定按照《中國藥典》(2020年版)中水分測定法(四部通則0832)第二法［7］，根據減失的重量，計算苦蕎樣品含水量(%)，結果見表1。2.3浸出物的測定。按照《中國藥典》(2020年版)中浸出物測定法(四部通則2201)［7］，分別計算苦蕎樣品中水溶性浸出物及醇溶性浸出物的含量(%)，結果見表1。2.4重金屬、砷鹽殘留按照《中國藥典》(2020年版)中重金屬檢查法(四部通則0821)［7］第二法檢金屬;按砷鹽檢查法(四部通則0822)［7］第二法檢查砷鹽，檢測結果見表1。2.5農藥殘留本試驗結合蕎麥生長期的病害特點和針對性的用藥，發現吡蟲啉和多菌靈是種植蕎麥最常用的農藥，故本試驗對吡蟲啉和多菌靈進行殘留量檢查，用液－質聯用方法進行檢測。液相條件:WatersACQUITYUPLC－MS/MS(API3200)，色譜柱為ACQUITYUPLCODS柱(2.1mm×100mm，7μm)，以乙腈－水為流動相梯度洗脫:0～2min，乙腈濃度為15%，2～6min，乙腈濃度15%～90%，柱溫30℃，流速0.3mL/min，進樣1μL。質譜條件:氣體為高純氮氣，離子源:電噴霧離子源，掃描方式:正離子掃描，檢測方式:多重反應監測，電噴霧電壓:5500V，霧化氣壓力:0.414MPa，輔助加熱氣壓力:0.345MPa，氣簾氣壓力:0.069MPa，離子源溫度:600℃。對照品和供試品的定性結果見圖1，檢測結果見表1。

3討論

研究考察了16個產地苦蕎樣品的有效成分，其中蘆丁含量最高，在1.02%～2.55%，肌醇含量最低，在0.15%～0.51%;且不同產地苦蕎中蘆丁、槲皮素及肌醇含量有一定差異，說明產地的氣候、土壤特性等生態因子及產地加工方式對藥材質量影響很大。同產地的苦蕎，因加工方式不同含量也有明顯差異。根據測定情況和一般養護經驗，規定本品水分不得過10%。浸出物含量反映了植物體內生物活性物質的積累情況，與藥材質量密切相關［8］。按照測定結果適當下浮來設定指標限度比較符合實際情況，規定本品水溶性浸出物不得少于10%，醇溶性浸出物不得少于5%。按照國際市場對無公害綠色藥材的要求，對不同產地的苦蕎進行了重金屬、砷鹽及農藥殘留檢測，結果表明，苦蕎樣品符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》［9］(中華人民共和國對外貿易經濟合作部)規定，及中國藥品生物制品檢定所《中藥中鉛、鎘、砷、汞測定方法起草說明》［10］中提出的四元素的限量標準，即鉛不高于5ppm，鎘不高于0.5ppm，砷不高于2ppm，汞不高于0.2ppm。本實險對云南及四川地區苦蕎的蘆丁、槲皮素、肌醇含量、水分、浸出物、重金屬、農殘進行測定，為科學評價苦蕎內在質量積累了科學資料，提供了實驗數據。

作者:賓婕 張郴 晏通 胡建林 單位:1.紅河衛生職業學院 2.昆明醫科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室