中藥鑒定學范文

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摘要：以激發學生興趣，培養實用技能為教學目的，從提高教師素質和改革教學內容、教學方法及實驗教學等方面探討了中藥鑒定學教學的創新。

關鍵詞：中藥鑒定學；教學；改革

中圖分類號：C420　文獻標識碼：A 文章編號：1673-7717(2007)05-1025-02

中藥鑒定學是中藥專業的一門重要專業課之一，其在中藥畢業生的知識架構中占有重要地位，因此，在中藥鑒定學的教學中，教師怎樣教與學生如何學才能產生最佳效果成為中藥鑒定師資團隊思索與探討的課題。

經過筆者的探索，取得了一些經驗，即：提高教師整體素質，創新教學內容與方法、激發與提升學生興趣、著力培養實用技能。

1提高教師素質　促進教師的專業成長是創新教學的關鍵

根據中藥鑒定學特點，倡導教師在讀書、集體備課、觀課3個關鍵環節突破。

1.1讀書　知識在更新，學科是交叉的，這就要求我們的教師具備多學科、最前沿的知識架構，教師讀書是為了跟上課程的發展變化，讀書為教師提供足夠的教學支撐。

1.2觀課　帶著學習的意識，收集自己在教學中的一些問題和思考，在觀課過程中以別人的優勢對照自己的不足，思考如何有針對性地進行調整，這會使觀課的效益最大化。同時，觀課前可了解與授課相關的情況，如學生知識基礎、學習方法、學習習慣、學習動機和勤奮程度等，也可以了解課堂可能存在的問題。有了這些基礎，觀課時可以有較好的切入角度、層面，也可以帶著對某一問題的思考、探索進行觀課。

1.3集體備課　集體備課是一個發散思維、集中智慧、整合經驗、共享資源的教研活動過程。集體備課能實現群體優勢和個性特長的完美結合。

2改革中藥鑒定教學

2.1改革教學內容　在“總論”中，將《中藥鑒定學教學大綱》全面透徹地介紹給學生，同時，讓學生自己回答中藥鑒定的目的、內容、應該怎樣學等；這樣，所有的學生都從總體上認知了中藥鑒定學，知道了哪些是必須掌握的、哪些是熟悉與了解的；將教學內容的重點放在“各論”每一章的“概述”部分，因為中藥鑒定是按藥用部位來分類與分章編排的。在“概述”中，把各個部位的定義、各類中藥的性狀、組織構造及顯微鑒別講透，讓學生掌握，這樣，學生就可以對每個具體的藥材舉一反三，很輕松的學好。對于具體的每一種藥，壓縮甚至不講其來源、性狀、顯微、理化等傳統內容，大量增加該藥的研究進展及藥理藥效。同時，滲透現代生物化學、細胞生物學、分子生物學、分子遺傳學的知識，讓學生掌握中藥材化學指紋圖譜及DNA分子遺傳標記技術。

2.2改革教學方法　傳統的教學方法往往是單向式的教學，如何在教學過程中，使學生真正成為教學活動的主體，發揮他們的主動性和創造性?

第一，充分利用教具。對于這個學科來說，最好的教具莫過于樣品藥材本身了。所謂“千聞不如一見”，在進行理論知識學習時，將藥材帶到課堂，理論與實物同步，這樣既能加深學生的直觀理解，也可以活躍課堂氣氛，教學效果特別明顯。同時，學院的標本中心提供了正品、混偽品及部分藥材的炮制品，有些藥材甚至有原植物的臘葉標本和浸制標本，每二周組織學生到標本中心實習一次，這樣，學生從原植物到藥材、從混偽品到飲片都有了系統的學習，印象深刻、興趣濃厚。

第二，注意講解的趣味性和生動性。每一種藥都是來源，產地，加工，氣味，性狀。每一種的性狀都是形狀，顏色，氣味，質地等內容，學生難免感到厭煩。因此，對于《中藥鑒定學》來說，講解如何生動而充滿趣味是不得不關注的一個問題。在改革教學內容的基礎上，通過綜合應用文字、圖片、動畫和視頻等多媒體資料來進行教學活動，通過多媒體課件，教師可以將大量的信息帶給學生，還可以通過互聯網將更加豐富的藥學前沿信息展現在學生面前，從而活躍學生的思維，使課堂教學活動變得生動有趣，富有啟發性、真實性。有的藥材與章節，預先布置下去，讓學生自己講，讓每一個學生都有講授的經歷，我們還可以提提問題，和學生一起溫習以前的知識，這樣不僅我們自己鞏固了知識，也給學生壓力促進他們強化知識，做到教學相長、師生互動。同時，注重人文教育，在專業學習中與學生探討人文內容，拉近與學生的距離，活躍了課堂氣氛，激發學生的學習興趣。

第三，鼓勵學生積極參加學院的藥材識別競賽。大多數的學生，通過大量的藥材識別活動，到最后在全班進行比賽，是提高學習積極性特別有意義的活動。鑒定學的任課老師給積極識別藥材的同學以鼓勵及獎勵。

2.3優化實驗內容　創新實驗教學中藥鑒定實驗一改過去傳統的顯微、理化內容，在幾次基礎的實驗、熟悉地掌握了中藥的顯微制片技術、能進行中藥的顯微測量、微量升華、熒光觀察等操作技能后，每次中藥鑒定實驗都以專題的形式進行。如組織《大黃的生藥學鑒定》，要求學生從原植物、性狀、顯微、理化、含量測定等方面進行系統的鑒定，實驗報告以科研論文的形式提交，要求有摘要、關鍵詞、概述、方法與結果、討論、參考文獻等內容；每次實驗課都要求學生認真實驗，仔細思考，發現問題，解決問題，最后如實記錄實驗過程及結果。對于實驗報告的批改，每次都極其用心，錯誤的描述，正確的描述都記錄在案，以便針對具體情況作出具體的輔導。

通過嚴格的實驗訓練，學生不僅能提高操作能力，還能迅速提高表述及科研能力。

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關鍵詞 獨立學院 中藥鑒定學 實驗技能 實驗室開放

中圖分類號：G424 文獻標識碼：A

“中藥鑒定學”是中藥學類專業的一門主干專業課，是主要培養學生鑒別藥材真偽、評價藥材質量的應用型學科。它是在繼承傳統中藥鑒別經驗和使用經驗的基礎上，運用現代化學及生物學的理論和方法，解決中藥的真實性、安全性、有效性及質量問題并實現中藥材資源可持續發展的一門實踐性很強的學科。本課程的目標是讓學生掌握中藥鑒定的基本理論、基本方法和基本技能，掌握基源鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別及理化鑒別方法，為從事中藥的真偽鑒別、品質評價和質量標準的制定等工作打下堅實的基礎。隨著藥材資源的匱乏，各地商農為了牟取暴利，越來越多的偽品和假藥正在混入藥材市場，直接給病人或老百姓服用不僅影響效果，耽誤病情，甚至有可能造成更為嚴重的后果，所以培養一批批能夠辨別藥材真偽、評價藥材優劣的應用型人才極為重要。

一直以來，獨立學院學生的培養模式不同于普通本科高校，其側重于培養鍛煉學生的應用與實踐能力。雖然，幾年的課程安排與普通本科高?；鞠嗨?，但由于教學環境及學生認知特點等因素的影響，最終培養出的學生能力卻大不相同。如何使得獨立學院學生未來更好地走向市場服務社會，必須加強實踐訓練，或者創新實驗教學模式，以實踐服務理論知識，最終培養出一批批合格的適應市場需求的應用型人才。對于中藥類專業學生而言，在研究中藥之前，必須學會鑒別中藥真偽，評價中藥質量優劣，這樣開展接下來的工作才有意義。同時，學好“中藥鑒定學”這門課程也是為了保證未來藥材市場流通規范，減少假藥劣藥，更好地服務大眾健康。

綜上，提升獨立學院中藥類專業學生的藥材快速鑒別能力是中藥鑒定學課程實驗教學的改革重點。①②本研究以中藥鑒定學實驗為背景，分別以藥材飲片性狀鑒別、粉末顯微鑒別、粉末制片技術為考察指標，擬對中藥1303班學生進行實驗技能打分。課后針對考核成績后20%者開放實驗室進行重復實訓，并再次考核打分，觀察重復實訓考核者實驗技能變化。從而評價開放實驗室與否對獨立學院學生實驗綜合技能提升的重要性。

1 現狀分析

我院中藥學專業一直是熱門專業，培養出的學生能力也得到市場及各界的諸多認可。但近年來，藥品流通、檢測領域人才匱乏，因此加強藥材鑒定方面的教學與實踐勢在必行。同時，在中藥類諸多專業課中，“中藥鑒定學”是一門應用性很強的專業課，單靠理論上枯燥無味的講授，是很難讓學生掌握中藥材鑒別特征及其鑒別技能的，因此需要大量的實習、實踐環節幫助學生去認識。但就之前沿用的教學計劃來看，學生對藥材接觸和應用的機會太少，實際觀摩、實訓環節嚴重不足，使得學生對于課上所學的知識停留于抽象化概念，而不能形象深刻地去認識和記憶。同時，這門課程的藥味極多，需要在一學期內掌握這么多的藥材鑒別知識對于獨立學院學生來說有諸多困難。而且，即便是一些平時學習成績不錯的學生，在學完該課程后一段時間也逐漸忘記所學的內容，畢竟這是一門實踐經驗性學科。那么，如何改變這種現狀，筆者認為，應該加強實踐訓練環節內容，提高學生的基本操作及藥材鑒別能力，不斷循環，這樣才能更好更深入地開展教學，學生的藥材鑒別及評價能力才能得到很大提高。

2 實驗方法

以中藥鑒定學實驗為背景，分別以藥材飲片性狀鑒別、粉末顯微鑒別、粉末制片技術為考察指標，擬對中藥1303班學生進行實驗技能打分。開放實驗室進行重復實訓，并針對每次實驗得分后20%者進行再次實訓考核打分，觀察重復實訓考核者實驗技能變化。

3 實驗結果

3.1 “中藥鑒定學”實驗考核之重復實訓者頻次分布情況

圖1 “中藥鑒定學”實驗考核之重復實訓者頻次分布

圖1結果顯示，該課程在平時每次實驗考核中，重復實訓4次的有1位同學，重復實訓3次的有3位同學，重復實訓2次的有9位同學，重復實訓1次的有9位同學。該結果表明，改班級中絕大部分學生都重復參加過實訓，而僅有少部分學生由于實驗技能較弱而多次參加重復實訓。因此，開放實驗室可以在課余時間使得全班大多數同學的實驗技能得到提升，從而較少或不再被列入再次實訓對象中。

3.2 期末實驗綜合考核之重復實訓考核情況

表1 期末實驗綜合考核之重復實訓考核情況

表1結果顯示，在期末實驗綜合考核中，成績列班級后20%的有5位同學，分別是任同學、杜同學、李同學、劉同學和高同學。但是每位同學的期末實驗原成績都在80分以上，提示經過一學期的實驗室開放和重復實訓，這些學生的實驗技能得到明顯提升。同時，經過再次實訓之后，這五位同學的實訓后考核成績得到明顯提高，其中有4位同學（80%）的實訓后考核成績在90分以上。

3.3 平時實訓頻次分布與期末實驗綜合考核對比分析

在該班級的平時實驗考核中（圖1），張同學重復實訓考核4次，張同學、曹同學和王同學重復實訓考核3次。這4位同學相對全班整體而言，實驗技能較薄弱，但是卻未出現在期末重復實訓考核名單中，提示這些學生在平時的課余時間，積極進入到實驗室開放的環節中，不斷努力提高自身實驗技能，使得自己最終在期末實驗綜合考核中表現優異，脫穎而出。而期末實驗重復實訓者可能由于平時實驗技能相對中等或較好，而較少愿意參與到實驗室開放的環節中，減少了自己重復實訓機會，日積月累，反被后面的同學趕超。這說明，無論平時實驗技能較強或較弱的學生，都應該積極投入到實驗室開放的環節中去，利用課余時間多鍛煉自己的實訓技能，這樣才能使自身的實驗技能得到不斷提高。

4 討論

經過一學期的實驗室開放，班級學生在藥材鑒定方面的技能得到明顯提升。同時，該班級整體實驗成績超出以往同專業或相近專業學生，提示開放實驗室的成效顯著。此外，開放實驗室對于處于各個能力階段的學生都是有利的。

因此，在今后的中藥鑒定學實驗教學中，可以加大實驗室開放力度，不斷循環考核，使得平時實驗成績較低的學生能夠在不斷的自主學習實踐中輕松地提高自己的實驗技能，同時也鼓勵其他能力相對較強的學生也參與到實驗室開放的環節中去，不斷提高實訓技能。

目前市場中藥材質量堪憂，強化對學生中藥鑒定技能的培養顯得尤為重要。同時，隨著時代的不斷發展，中藥鑒定學課程教學面臨很多新的挑戰，我們必須加快教學改革的步伐，提高教學效果，創新教學模式，以適應新時代市場對高素質應用型中藥專業人才的需求。對于該課程，積極深入開展該課程的實踐教學研究是一項十分緊迫并且意義重大的工作。綜上，開放實驗室對于提升獨立學院中藥類專業學生藥材快速鑒別能力具有重要的實踐意義。

*通訊作者：谷巍

基金項目：江蘇省“青藍工程”（2012）

注釋

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關鍵詞：建構主義學習理論；中藥鑒定學；教學質量

《中藥鑒定學》是中藥學專業的專業課程之一，隨著科學的進步和時代的發展，我們賦予了它新的概念，即研究中藥質量標準和鑒定方法的應用學科。這個概念在宏觀上講是兩個內容，一個是質量標準，一個是鑒定方法，二者具有高度的概括性和本質的聯系。研究質量標準是為了控制和鑒定中藥的質量，為中藥的生產、研究和使用提供依據和保障，提升中藥的管理水平；這個標準涵蓋著中藥安全性、有效性和穩定性三項指標的必備內容。研究鑒定方法可使中藥的質量標準不斷提升并趨于完善，是保證質量標準的基礎，適用的標準是由科學的方法來實現的，這里的方法實際上是一個體系包涵形態鑒定法、理化鑒定法和生物鑒定法三大板塊，每一板塊又延伸為多種方法。這種框架的構建可以應用一種新的學習理論來教學，即建構主義學習理論。

中藥鑒定學具有如下特點：一是內容多而枯燥，但卻有其內在的聯系和系統性；二是知識涉及相關學科多，但又不失其自身的完整性；三是實踐性強”。教學中只有使學生真正掌握中藥鑒定學的基本理論、基本方法和基本技能，提高其分析問題、解決問題的能力最終培養出具有終身學習能力、現代社會發展所需的中藥專業人才，才能實現教學質量的提高。鑒于中藥鑒定學的學科特點，為了提高教學質量，傳統的在行為主義學習理論指導下的教學模式已經不能完全勝任。很多學者和教學第一線的教師也在中藥鑒定的教學中嘗試了多種改革，收獲了一定教學成果但基本還是以傳統的教學模式為主，基于建構主義學習理論的中藥鑒定學的教學探索還不多。筆者對建構主義學習理論指導下的中藥鑒定的教學進行了初步探索與實踐。

1理論基礎

建構主義是一種認知理論，其哲學基礎可以追朔至18世紀文藝復興時代的哲學家、人文主義者詹巴帝斯塔·維柯，然而對建構主義學習理論最直接的貢獻是皮亞杰關于兒童認知發展理論的形成。建構主義學習理論認為學習是由學生的內部動機包括好奇心、進步的需要、自居作用和同伴間相互驅動的積極主動的知識建構過程，即知識不是通過教師傳授獲得的，是學習者在一定的情境即社會文化背景下，借助于其他人包括教師和學習伙伴的幫助，利用必要的學習資源，通過意義建構的方式獲得的。意義的建構是指事物的性質、規律以及事物之間的內在聯系。在學習過程中幫助學生進行意義建構，就是要幫助學生對當前學習內容所反映事物的性質、規律以及該事物與其他事物之間的內在聯系達到較深刻的理解。建構主義的核心是強調學生主動的意義建構，因此在教學過程中教師是主導而不是主體，一切以學生為主體、為中心，而每一個環節的落實又離不開教師的主導作用。建構主義理論指導下常見的教學方法有拋錨式、支架式、交互式和隨機訪問式教學法。

2教學目標

建構主義學習理論指導下的中藥鑒定學教學目標不僅僅局限在“學習知識”的膚淺層面，也就是不僅在于使學生掌握中藥鑒定的基本理論、基本方法和基本技能。同時也不只是將目標擴充至提高學生分析問題和解決問題能力的層面上。建構主義學習理論指導下的中藥鑒定學教學目標是使學生掌握知識、培養學生分析解決問題能力和終生學習能力的一個綜合目標。

對于每味藥基原鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定和理化鑒定的這些知識層面的目標一般設置明確。教師在教學過程中通常都明確哪些藥需要掌握哪些方面的鑒定知識。然而學生僅僅掌握這些知識是遠遠不夠的，也不能適應社會的需要?，F行中藥專業4年制本科教材全書共載藥500多種，其常用中藥有350多種。即便學生全部掌握了書中所載中藥的鑒定知識，并且工作后也沒有遺忘，如果不能利用這些知識分析解決問題仍然不能勝任從事中藥專業的工作，更談不上滿足社會發展的需求了。一味的追求擴大掌握鑒定藥物種類的數目，僅注重知識層面的教學也不符合建構主義學習理論的基本思想原則。因此，教學還需要有培養學生利用中藥鑒定知識分析解決問題的能力這一目標。然而工作中遇到的問題也不是簡單明了的，常常利用已有的知識還不能或不能完全解決問題。復雜多變的現實問題和當今飛快的知識更新速度，如果要培養出適合社會發展需求的專業人才，培養其終生學習能力和工作能力就必須是教學目標之一。

所以除了教授知識更重要的是教授方法，掌握了方法可以不斷地獲取新知識解決不同的新問題，最終得以實現培養目標。如我們在大黃的這味藥的鑒定教學中，要設置的目標除了知識掌握的目標外還需要設置提高學生分析解決問題能力的目標。例如可以將學生利用已經掌握基原鑒定、性狀鑒別、顯微鑒別、理化鑒別和生物鑒別的知識去區別正品大黃和土大黃這一能力設為目標。通過培養，學生能夠對于新出現的不同來源的大黃偽品進行鑒別，以及對今后可能出現的新的鑒定方法具備學習能力。 

3教學環節

在建構主義學習理論的深入研究中，目前開發了拋錨式教學和支架式教學等教學方法。無論是運用那種教學方法，最終都是為了達到教學目標，提高教學質量。筆者對建構主義學習理論指導下的中藥鑒定教學環節做了初步探索。

3．1串聯相關學科，設置認知沖突

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一、教學方法

1.課堂講授

由于《中藥鑒定技術》總論部分主要介紹了概念、任務、鑒定方法和當前新技術、新方法等內容，因此，這部分主要以教師講授為主，在講授基本理論的同時，也接受一些當前中藥鑒定的新技術和新方法，為以后學生進一步地學習打下基礎。如：中藥指紋圖譜法、DNA分子遺傳標記鑒定技術等。通過講授，使學生在掌握基本理論的同時，了解當前中藥鑒定技術的發展情況。

2.互動式教學

《中藥鑒定技術》是一門實踐性很強的應用性學科，它要求學生們要有直觀認識，需要大量的中藥材真偽品標本的對照學習，因此，在教學過程中主要采用了如下的方法：①以學生為主體，就是將學生劃分成幾個小組，將本堂課要講授的中藥材標本發下去，讓學生對照書本學習，歸納出鑒別要點，教師根據學生們的講述進行歸納總結。②以教師為主體，以學生為輔，先讓學生們反復觀看真偽品標本，然后教師提問。這樣可以加深學生們對中藥材鑒別要點的掌握和理解。

3.開放式教學

由于中藥鑒定是一個長期而艱巨的任務，其實踐性很強，因此必須充分利用現有的條件，便于學生們的學習。①開放實驗室，要想學好中藥鑒定學，必須接觸實際，而開放實驗室能夠保證學生接觸大量的中藥標本，同時解決實驗課時間不足的問題，進行顯微鑒別和理化鑒別的技能鍛煉，提高學生的動手能力。②開放時間，主要體現在兩個方面，一是每周確定兩課時的輔導時間，以學生自學為主，老師輔導為輔，二是老師的時間開放，學生可以隨時隨地向老師請教，包括學生在市場發現一時難以鑒別的中藥真偽品，都可以請老師到市場現場鑒別。③利用課余時間，帶領學生到植物園進行野外教學，使學生能夠更好地掌握其形態鑒別、生長環境、采集時間、加工方法、資源保護、開發利用等方面的知識。

二、探索新的教學模式和方法

1.調整理論教學與實驗教學的比例

根據職業教育的培養目標，理論講授與實驗實訓課時的比例為2：1，而在實際教學中，《中藥鑒定技術》的課時一壓縮再壓縮，一學期要講完500多頁的一本教材，要讓學生在很短的時間內學懂學會，難度可想而知。筆者在講授《中藥鑒定技術》時，嘗試調整了理論講授與實驗實訓課時的比例，由過去的2：1改為1：1，加大了實踐教學的比重，學生的學習興趣和實驗能力明顯增強。

2.性狀鑒定教學

在講授藥材的性狀鑒定的教程中只講鑒別要點和難點，不把每一種中藥的所有性狀特征都講到。講授的中藥材隨堂配備，每一種中藥準備原藥材和飲片各一份，這樣有利于觀察中藥的外部形態和切面特征，上課時教師講解一個鑒別要點，學生要馬上跟著做，眼觀、手摸、鼻聞、口嘗、水試和火燒，每一項都要做到。講完內容后，在課堂上隨機抽查，隨堂打分記錄；另外，在講完一個或幾個章節后，組織學生進行性狀實驗考核，也打分記錄，這些都作為總評成績的一部分。

3.顯微鑒定教學

講授過程中嘗試將中藥粉末顯微鑒定由單味藥辨認改為按組織特征分類鑒別。這樣既增強了實驗的系統性和科學性，使學生能夠從中掌握中藥粉末鑒定的規律性，同時也節省了學時， 為增設新的實驗創造條件。所謂按組織特征進行分類鑒定，即是將生藥粉末特征分為厚壁組織纖維和石細胞，導管，分泌組織，保護組織，細胞后含物等。在實驗時每類選擇有典型意義的一到兩種中藥供學生進行觀察鑒別，然后再由教師對每一類進行歸納總結，找出規律性。例如，在觀察石細胞時，讓學生觀察厚樸分枝狀石細胞、肉桂馬蹄形石細胞、苦杏仁近圓形石細胞，這樣學生就會對石細胞的種類形態有一個全面的了解，并在以后的鑒定中加以運用。在粉末特征分類鑒定實驗后，我們將幾種生藥粉末發給學生，讓大家運用學到的粉末分類知識，對照教材加以識別辨認。從結果看，即使課堂上未做過的粉末，絕大多數學生均能夠根據教材提供的特征準確地加以識別。對橫切面顯微鑒定，由教師總結出規律，掌握共性，記住特殊部分和典型個例。

4.重視理化鑒定教學，教學重點與時俱進

隨著科技的飛速發展，中藥的研究內容也在發生著日新月異的變化，只要比較一下幾個版本的藥典就知道變化有多大。這個變化的特點是應用現代技術全面研究中藥的有效成分及藥理藥效，以全面評價中藥的質量。為了適應跨世紀的中藥學?？迫瞬诺呐囵B要求以及職業教育目的，迫切需要改革原來的簡單實驗，開設一些水平相對較高的綜合性實驗，如：理化鑒別、薄層色譜、紫外分光光度、高效液相色譜等定性定量實驗。其指導思想是讓學生較全面系統地熟悉各類實驗方法，這不僅僅是這個學科的培養需要，還是對以前開設的課程的一個大融合。實驗內容體現現代中藥學的研究內容，從形態特征到成分的定性定量分析、炮制等均有所體現。

5.改革現有的考試方法

多年來，學校往往用一張試卷、一個分值就肯定或者否定學生的學習成果，這就造成很多學生在學習過程中只關心所謂的考點，死記硬背，導致不少學生高分低能?？荚嚫母锖?，即降低筆試成績的比例，加入綜合能力的考查，改革的方法是科目考核成績由總評成績決定，總評成績又包括卷面成績、實驗成績、平時成績，實驗成績又包括實驗技能、實驗報告、實驗考查成績等，平時成績包括作業、提問、測驗、課堂紀律等成績，把這幾部分按比例換算成總評成績。

6.讓學生參與到教學活動中，發揮學生的主體意識

為學生授課，不能不顧忌學生這個主體的感受，以學生為中心，給了學生更大的學習空間，并且進一步提高了他們的參與熱情。一直以來，教師習慣于在講臺上講解，學生的學習處于一種被動填鴨狀態，角色互換，讓學生主動參與到教學活動中來，就能很好地發揮學生的主體意識，如：讓學生利用課余時間去查閱相關資料、制作課件并上臺講授，講完之后教師再對他們的優、缺點進行點評。再如，經常和學生交流，了解學生對課程的意見和建議，根據學生的實際和需要添加或刪除一些講授內容，講課盡量朝滿足學生需要的方向靠近。

7.教書育人，注重道德教育

教師在教會學生知識的同時，要教會學生做人，做一個有公德、有職業道德、有專業才能的人。道德教育，課內課外、隨時隨地地進行。經常與學生交流，解決學生的困惑及難題，糾正學生的不良習氣，使學生樹立正確的價值觀、人生觀，增強事業心和責任感。

8.結合執業藥師考試，加強中藥鑒定技術知識點的重點講解

根據2012版國家醫藥安全十二五規劃，2012年開始新開辦的零售藥店必須配備執業藥師，逾期達不到要求的“十二五”末即取消售藥資格，所有零售藥店法人或者主要管理者必須具備執業藥師資格。一時間，醫藥行業對執業藥師的重視程度很高，執業藥師缺口嚴重。在講課時參考歷年執業藥師考試真題，給學生講解執業藥師考試題型及難點重點。

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1.1實物標本的選擇

選擇實物標本依托中國藥典，以教材中收載的常用藥材為主。然而，將教材中的藥材品種一一收錄既不現實、也不必要，應根據教學大綱的要求和教學實際，選擇具有代表性的藥材標本。在品種的選擇上要力爭具有代表性，如根和根莖類、莖木類、皮類、花類、果實種子類、全草類、其它類、動物和礦物類藥材等都要涉及;且應根據分類學涉及代表科屬的藥材，如毛茛科選取了黃連、烏頭、白芍、威靈仙等，分別涉及了黃連屬、烏頭屬、芍藥屬和鐵線蓮屬等;同時，根據地方使用習慣的不同，有意識收集本地習用品種，如紫萁貫眾、斷血流等;道地藥材是中藥鑒定技術中最具特色的，收集實物標本還應對道地藥材有所側重，如安徽的鳳丹皮、宣木瓜、貢菊等。基于以上思路，我們根據課程教學的需要，編寫《中藥鑒定技術》教學實物標本目錄，加大收集工作，并應用于教學實踐中。

1.2實物標本的制作

《中藥鑒定技術》教學用實物標本編寫目錄后，根據目錄進行收集和制作工作，主要有三種方法:⑴從市場采購。利用去藥材市場參觀學習的機會，從市場采購典型的藥材標本，主要是一些本地不產的藥材，如人參、大黃等，且經過不同批次的采購能得到不同等級和規格的藥材。⑵與兄弟院校和同行之間交換、交流。通過與同行之間進行教學標本的交換和交流，可以擴大藥材標本的種類，減少收集標本花費的精力，有利于建立整套標本。⑶實地采集和制作。這是最重要的方法，將收集實物標本與藥用植物學采藥實習等結合起來，通過實地采集收集本地地產藥材和習用品種。例如，我校每年會到南陵丫山進行藥用植物學采藥實習，可收集到牡丹皮、半夏、魚腥草、金蕎麥、桔梗等地產藥材。同時，還可以利用野外資源調查的機會，搜集各地藥材標本，如岳西的茯苓、僵蠶、靈芝，霍山的霍山石斛、天麻，滁州的和全蝎等。通過野外采集，可以準確鑒定藥材的來源，從而做到在課堂上教授給學生科學、準確的藥材知識。

1.3影像標本的制作

收集的藥材標本有時個體較小，如冬蟲夏草、半夏、太子參等，使用時難以滿足教學需要，還有一些標本容易變色變質，如黨參、大黃等。如何能給予學生最真實的藥材特征，就需要通過制作影像標本來完成。顏色是標本最重要的特征，在制作影像標本時也容易失真，為此，我們引入了專業的攝影設備，同時邀請專業的攝影和計算機老師，協助影像標本的制作，專業教師則根據藥材的鑒別要點提出拍攝意見，如大黃要拍攝斷面的“星點”特征、黃連要拍攝“過橋”特征、冬蟲夏草要特寫頭部特征等。為了增加藥材照片的立體感，還須對藥材的不同面進行拍攝，以期得到最完整的藥材性狀特征。同時，利用野外資源調查的機會，拍攝新鮮藥材的照片，并制作了產地采集、加工等的視頻短片，后期利用專業軟件制作了《黃山采藥錄》等視屏資料，作為對理論課的補充，在課堂上也收到了較好效果。

2體會

2.1理論教學和實踐教學應選用不同的標本理論教學

一般是大班教學，對實物標本的需求量較多，標本數量少時難以顧及到所有同學，此時配合影像標本的使用，才能取得較好的效果;而像蘇子、菟絲子這些較小的藥材，可以給每位學生準備一份標本，看著標本學習和講解才能取得最佳的效果。實踐教學一般是小班教學，學生和教師互動交流的機會較多，一般選用實物標本，對于人參、冬蟲夏草等貴重藥材標本，也可讓學生有充分的觀察機會。另外，還可以根據藥材的性質制作不同的藥材標本，展示于實踐教學場所。比如全草類藥材可以制作成臘葉標本和彩色照片，懸掛于實驗室墻上，讓學生在日常學習中受到潛移默化的影響。

2.2注意標本和影像資料的積累

篇6

【關鍵詞】榴果黑種草化學成分；結構鑒定

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.681文章編號：1004-7484（2013）-07-4065-01

榴果黑種草為毛茛科黑種草屬植物，新疆地區是其主產區。瘤果黑種草具有利尿、活血、解毒、延緩衰老的作用。為了研究黑種草發揮藥理作用的主要成分。利用各種色譜分離技術把乙醇提取液進行分離純化，得到五種化合物。

1儀器和材料

RY-1G型數字熔點儀。Autospec-Ultima ETOF型質譜儀。Bruker400核磁波譜儀。色譜柱用硅膠、薄層色譜。美國同位素公司氘代試劑，其他試劑均為分析純。

2提取與分離

將榴果黑種草7.5kg用熱的乙醇（體積分數30%）回流提取三次，提取時間為3個小時/次。將提取液進行冷凍干燥得到300克的浸膏。把浸膏用適量的溫水溶解，按照順序用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯進行萃取。取正丁醇萃取物75g過硅膠柱色譜。用三氯甲烷-甲醇（體積比為10：1-1：1）為流動相進行梯度洗脫，所得組分經sephadexLH-20、OSD柱處理得到化合物II（150mg），化合物IV（30mg）、化合物V（45mg）。稱取（萃取物）乙酸乙酯9g過硅膠柱色譜，用三氯甲烷-甲醇（體積比為15：1-1：1）為流動相進行梯度洗脫，得到化合物I（60mg），化合物III（105mg）。

3結構的鑒定

化合物I：白色粉末狀，熔點（mp）287-288℃.醋酐-濃硫酸（Libermann-Burchard）反應呈現陽性。紫環反應（Molish）呈現陽性。做KBr壓片IR，譜圖以及EI/MS，所得數據與已知物胡蘿卜苷對照，IR譜圖一致、Rf值相同、混合熔點不發生變化。根據上述結果判定此化合物為谷甾醇-3-O-葡萄糖苷。

化合物II：白色結晶，熔點（mp）222-224℃。醋酐-濃硫酸（Libermann-Burchard）反應呈現陽性。紫環反應（Molish）呈現陽性。樣品在薄層板上進行酸水解后薄層色譜（TLC）分析顯示有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖。根據以上理化性質和該化合物的H-NMR（300MHz，C5D5N）及C-NMR（75MHZ，C5D5N）的光譜數據，參考文獻鑒定該化合物為常春藤皂苷元-3-O-β-D-吡喃木糖基-（13）-α-L-吡喃鼠李糖基-（12）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷。

化合物III：白色方晶，熔點（mp）217-219℃。醋酐-濃硫酸（Libermann-Burchard）反應呈現陽性。紫環反應（Molish）呈現陽性。樣品在薄層板上進行酸水解后薄層色譜（TLC）分析顯示有鼠李糖和阿拉伯糖。根據以上理化性質和該化合物的H-NMR（300MHz，C5D5N）及C-NMR（75MHZ，C5D5N）光譜數據，參考文獻鑒定該化合物為常春藤皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（12）-α-L-吡喃阿拉伯糖苷。

化合物IV：黃色固體，和三氯化鋁發生反應出現黃綠色的熒光，和鹽酸-鎂粉反應呈現陽性。紫環反應（Molish）呈現陽性。樣品在薄層板上進行酸水解后薄層色譜（TLC）分析顯示有葡萄糖、山奈酚和半乳糖。根據以上理化性質和該化合物的H-NMR（600MHz，DM.SO-d6）及C-NMR（150MHZ，C5D5N）的光譜數據，并參考文獻鑒定鑒定化合物為山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-（12）-β-D-吡喃半乳糖基-（12）-β-D-吡喃葡萄苷，此化合物為該種植物中首次分離得到的。

化合物V：白色結晶，醋酐-濃硫酸（Libermann-Burchard）反應呈現陽性。紫環反應（Molish）呈現陽性。樣品在薄層板上進行酸水解后薄層色譜（TLC）分析顯示鼠李糖、葡萄糖、木糖、阿拉伯糖。根據以上理化性質和該化合物的H-NMR（600MHz，C5D5N）及C-NMR（150MHZ，C5D5N）的光譜數據，參考文獻鑒定該化合物為kaempferol3-O-[β-D-glueopyranosyl-（12）-β-D-galactopyranosyl-（12）-glucopyranosyl]此化合物為該屬植物中首次分離得到的。

4結論

中藥榴果黑種全草甲醇提取液經過分離純化得到5種化合物，其中第四五類化合物為首次從該屬植物中分離得到。

參考文獻

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篇7

關鍵詞：直接藥敏試驗；常規藥敏試驗；血液細菌；鑒定與檢驗；價值比較

近年來，由于臨床上抗生素的濫用現象嚴重，導致耐藥菌的出現進而引起抗生素的治療失效[1]。臨床上，做好細菌的臨床檢驗，確定各種細菌的藥物敏感性具有重要的意義，它是臨床用藥的前提和依據[2]。隨著現代醫療技術的進步，越來越多智能化、自動化的醫療儀器已經在臨床治療的各個環節中得到廣泛應用，為臨床上各種疾病的診斷和治療提供了極大的幫助[3]。先進的醫療儀器具有其檢測特異性和靈敏性的優勢，但是通常自動化的醫療機器往往價格均較為昂貴，難以在基層醫院推廣應用。藥敏試驗法和生化微管法細菌鑒定目前在基層醫院的檢測中仍占有重要地位，尤其是對菌血癥及敗血癥患者及時的獲取有效的抗生素的藥敏結果具有著重要的臨床治療意義[4-5]。本研究回顧性分析本院2010年10月～2013年10月診斷陽性的血液樣品資料，對陽性樣品進行培養后，進行直接藥敏試驗與常規藥敏試驗，比較兩種檢測結果，探究直接藥敏試驗與常規藥敏試驗在臨床血液細菌鑒定與檢驗中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究中485例均為我院2010年10月～2013年10月診斷陽性的血液樣品，全自動血培養儀培養（北京伯盛泰科技有限公司，京藥監械（準）字2012第2400316號），細菌鑒定時所使用的API鑒定板條（Remel Inc.國食藥監械（進）字2012第2401104號）。其他儀器及試劑包括： 細菌鑒定、藥敏綜合板、藥敏紙片（Becton Dickinson and Company，國食藥監械（進）字2012第2403040號）、MH干粉、血平板（濟南賽爾生物科技有限公司，魯濟食藥監械（準）字2012第1400066號）、巧克力平板（烏魯木齊宏信科創生物科技有限公司，新烏食藥監械（準）字2011第1400089號）、麥康凱平板（成都瑞琦科技實業有限責任公司，川食藥監械（準）字2011第2400016號）、無菌拭子及一次性無菌注射器。

1.2 方法

1.2.1 直接藥敏試驗 從全自動血培養儀取出陽性樣本后用無菌注射器抽取部分樣品并加入無菌離心管中，置入離心機內進行離心1500rpm，離心5min。然后吸取離心管上層清液置入另一離心管中，3000rpm離心15min，棄去上清后，對沉淀物進行0.9%氯化鈉溶液洗滌3次，收集均細胞黏液行涂片革蘭染色，顯微鏡下觀察細菌形態。結果為常規菌則接種到MH-平板上，無菌拭子涂抹均勻并貼上藥敏紙片。革蘭氏染色結果為革蘭陽性球菌（G+）呈鏈狀，則以MH+羊血平板并進行初步藥敏試驗，根據結果選擇適當酶試驗，最后調整菌液濃度到6.2×102cfu/L涂到綜合板上行藥敏試驗和細菌鑒定。

1.2.2 常規藥敏試驗 同樣無菌環境中取陽性樣本接種于各種不同平板，放置于溫度為35℃，5% CO2的孵箱中孵育18～24h后，之后進行革蘭染色。同樣根據染色檢測結果選擇相應的酶試驗。

1.3藥敏紙片選擇 一般情況下，革蘭陰性桿菌（G-）多選擇頭孢類抗生素，革蘭氏陽性菌（G+）多選擇β-內酰胺類、部分萬古霉素及大環內酯類。

1.4數據處理 本研究中所有實驗數據均采用SPSS20.0軟件進行統計學處理，計量資料采用t檢驗，表示方法采用平均數±標準差表示；計數資料采用χ2檢驗，結果以P

2 結果

共培養485例陽性樣品，其中直接藥敏試驗檢出410例，常規藥敏試驗檢出485例，符合率為84.54%。485例樣品中，革蘭氏陽性菌（G+）87株，占總數的17.94%；革蘭氏陰性菌（G-）398株，占總數的82.06%，兩種方法檢測G-菌結果差異不顯著（P>0.05），見表1。

3 討論

隨著臨床上抗生素使用的增多，不合理的抗生素使用率逐年增高，多重耐藥細菌感染的患者比例也明顯增高，這往往誘發患者全身感染性疾病，敗血癥和菌血癥是臨床嚴重危及患者生命的疾病，因此快速準確的藥敏試驗與細菌鑒定是臨床診斷和治療的關鍵。故高效、快速耐藥性試驗和細菌鑒定在臨床治療方面顯得極為重要，從而能快速控制感染，提高患者的治愈率[6]。

目前，臨床血液細菌鑒定與檢驗以常規藥敏試驗最為常用。其基本原理為臨床定性試驗，往往通過測量抑菌環直徑與抗生素的抑菌濃度來設計相關試驗。由于該方法對環境和設備等條件要求較高，在臨床推廣方面造成了許多不便；其次常規藥敏試驗檢測所需時間一般較長，通常在2～3d后才能獲得試驗結果，沒有得到藥敏結果前，往往只能依靠醫生臨床經驗去判斷，選擇相應的抗生素進行治療，此時，對于感染多重耐藥性細菌的患者臨床療效往往較差，并且導錯過誤最佳治療時間，從而加重病情[7]；該方法還存在誤差率偏高，相關文獻報道，在測量抑菌直徑時誤差約在±2mm左右[8]，忽略誤差后準確率約>95%。種種條件均限制常規藥敏試驗快速、高效檢驗。

直接藥敏試驗最早是1973年提出后便逐漸引起各界學者的廣泛關注，1986年美國Fincgold等人再次提出這一說法，他們認為直接對臨床患者血液標本進行藥敏檢驗，可達到快速、高效檢驗目的[9]。

本研究結果表明，臨床上采用直接藥敏試驗和常規藥敏試驗進行血液細菌鑒定與檢驗，能達到快速確定病原菌的藥敏特性的目的，從而減少了盲目用藥，提高臨床治愈率和治療效果。

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篇8

【摘要】 目的研究補腎中藥杜仲含藥血清對骨髓間充質干細胞(BMSCs)增殖及定向分化的影響。方法將第4代MSCs以5×106接種于9塊96孔板，3組，每組8孔;2塊6孔板，每板3孔，2 d后換液，加入誘導液。分為空白組、地塞米松組、杜仲組?？瞻捉M加入含10%胎牛血清(FBS)的 L-DMEM培養基繼續培養，地塞米松組在基礎培養基加入誘導劑(含β甘油磷酸鈉10mmol/L，地塞米松0.1 μmol/L，維生素C 50 mg/L)，杜仲組為含10%杜仲含藥血清的L-DMEM培養基。分別自加誘導液第1天起，采用MTT法測量96孔板細胞數，每天1塊板;在第10天取出1塊6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素紅染色。結果杜仲含藥血清組OD值呈現出明顯的上升趨勢，而空白組和地塞米松組無明顯上升趨勢;第10天杜仲組及地塞米松組ALP染色陽性，第13天起可見白色鈣結節，第20天茜素紅染色陽性。結論杜仲含藥血清能促進骨髓間充質干細胞向成骨細胞分化，并刺激細胞增殖。

【關鍵詞】 杜仲; 骨髓間充質干細胞 ; 成骨細胞

Abstract：ObjectiveTo study the generation and directional differentiation of BMSCs induced by Duzhong(eucommia bark ) which can invigorate the kidney. MethodsInoculated quartus generation MSCs in nine ninety six-hole cell culture plates and two six-holes cell culture plates by 5×106 cells per milliliter， all the holes were pided into three groups named blank group， DXM group and Duzhong(eucommia bark ) group ， each group had eight holes or three holes， two days later， changed medium and added new medium. The medium of DXM group contained 10mmol/L β-sodium glycerophosphate， 0.1 μmol/L DXM， 50mg/L vitamin C， that of Duzhong(eucommia bark ) group contained 10% blood serum containing Duzhong(eucommia bark ). Measured cell number of 96-hole plates from the second day to the eighth day， one of the 6-holes plates was colored by AKP staining solution at the tenth day， the last one was colored by alizarin Bordeaux on the twentyth day.ResultsThe OD value of Duzhong(eucommia bark ) group rose obviously， blank group and DXM group had no obvious ascensus; on the tenth day DXM group and Duzhong(eucommia bark ) group were colored masculine; white calcium nodus could be seen on the undersurface of the holes 13days later， which could be colored by alizarin Bordeaux twenty days later. ConclusionBlood serum containing Duzhong(eucommia bark ) can induce BMSCs differentiate to osteoblast and stimulate growth of cells.

Key words：Duzhong(eucommia bark ) ; MSCs; osteoblast

間充質干細胞 (MSCs ) 是一種多潛能成體干細胞，主要存在于骨髓，還存在于胚胎時期間充質來源的骨外組織，如皮膚成纖維細胞、脂肪干細胞、骨骼肌的衛星細胞和血管內皮細胞等。骨髓MSCs ( BMSCs )是骨髓基質的組成成分，體外分離培養后，在一定的誘導條件下，具有向成骨細胞、軟骨細胞、神經細胞、脂肪細胞、心肌細胞等多向分化的能力。在骨組織工程的種子細胞來源主要有成骨細胞和BMSCs等。成骨細胞雖然具有良好成骨活性，但來源有限，大量分離獲取困難，體外大量擴增的潛力不足，難以滿足骨組織工程臨床應用的需要;BMSCs不僅具有良好的成骨細胞分化潛能和高成骨活性，而且具有強大的增殖潛能，來源方便，可以滿足自體組織工程。中醫認為，腎主骨，生髓。本實驗擬研究補腎中藥杜仲含藥血清對BMSCs增殖及定向分化的影響。

1 材料與儀器

1.1 動物 SPF SD大鼠50只，體重150～200g，雌雄不限，由廣州中醫藥大學實驗中心提供。

1.2 試劑 L-DMEM培養基、南美洲胎牛血清(FBS、?？寺?，β甘油磷酸鈉、地塞米松、維生素C、茜素紅、MTT(廣州威佳)，DMSO(sigma)，杜仲(產地云南)，堿性磷酸酶染液、堿性磷酸酶試劑盒(南京建成生物有限公司)，0.25%胰酶(GIBCO公司)。

1.3 器材75cm2培養瓶、96孔板、6孔板(Coning)，酶標儀(Thermo)，CO2培養箱 (Heraeus)，注射器針頭濾器，0.22μm濾膜(MILLIpore)，SIGMA-3K15離心機(sigma)。

2 方法

2.1 杜仲含藥血清的制備取杜仲藥材粗粉150g，加70%乙醇10倍量，加熱回流兩次，1 h/次，過濾，合并濾液，濾液減壓濃縮至300ml，室溫冷卻，4℃冰箱保存備用。將中藥藥液稀釋至0.3g生藥/ml灌胃，1 ml/次，2次/d，連續給藥4 d，最后一次給藥后1 h經腹主動脈采血，室溫靜置3 h后置4℃冰箱過夜，2 500 r/min離心20 min，收集上清液，針頭濾器過濾除菌，置-20℃保存備用。

2.2 培養基配制空白組為含10%FBS的 L-DMEM培養基;地塞米松組在空白組基礎上加入誘導劑，其終濃度分別為β甘油磷酸鈉10 mmol/L，地塞米松0.1umol/L，維生素C 50 mg/L;杜仲組在L-DMEM培養基中加入10%杜仲含藥血清。

2.3 MSCs分離培養SD大鼠經腹腔10%水合氯醛0.7ml麻醉后，75%酒精浸泡頸部以下軀體5 min，無菌條件下取出雙下肢股骨和脛骨，修潔軟組織后，咬骨鉗修剪骨端，暴露髓腔，10 ml注射器吸取含10%胎牛血清的L-DMEM培養基反復沖洗髓腔，直到骨質外觀微微透亮。75cm2培養瓶收集骨髓沖洗液，放37℃、5%CO2孵箱培養。每3天換液1次。

2.4 MSCs傳代當細胞長滿瓶底90%后，0.25%胰酶消化后，以1∶3比例傳代。

2.5 MSCs誘導分化取P4細胞，當細胞長滿90%后，0.25%胰酶消化制備細胞懸液后，以每孔150μl ，細胞密度5×106左右接種于9塊96孔板中，3組，每組8個復孔;2塊6孔板，每板3孔，每孔2ml。當細胞長滿瓶底80%以上后換液，加入成骨誘導液。

2.6 MTT測量細胞數從加入誘導液24 h后開始測量，每天測一塊96孔板。向96孔板每孔內加入5 mg/L的MTT 15 μl，置37℃孵箱培養4 h后，吸出培養液，顯微鏡下可見孔底有黑色甲簪沉積，加入二甲亞楓(DMSO)150μl，搖床振蕩10 min后，酶標儀上測量490nm處OD值。取各組平均值繪制細胞增殖曲線。

2.7 堿性磷酸酶染導培養第10天取出1塊6孔板，吸去培養基， PBS清洗2遍，加入固定液固定10 min后;加入底物，37℃水浴15min，水洗;再加入蘇木素復染10 min，水洗，晾干，鏡下觀察。

2.8 茜素紅染導培養第20天取出1塊6孔板，吸去成骨細胞誘導液， PBS 洗3 次，95%酒精固定 10min， 加入 0. 1%茜素紅- Tris- HCL (pH 8. 3) 37℃，30 m in， 鏡下觀察結果。

3 結果

3.1 細胞形態學觀察MSCs為成纖維樣細胞，貼壁后成梭形(見圖1a)。加入誘導液后，空白組細胞無明顯變化;地塞米松組第5天開始出現細胞成聚集生長，細胞體積增大(見圖1b);杜仲含藥血清組從第3天開始出現細胞成聚集生長，細胞體積增大(見圖1c)。12 d后地塞米松組和杜仲組見明顯結節形成(見圖1d)。

圖1 細胞形態學觀察

3.2 細胞增殖曲線見圖2。

圖2 細胞增殖曲線

可見當細胞貼壁長滿瓶底后，由于接觸抑制，空白組處于一條平緩的曲線，地塞米松組細胞增殖不如杜仲組明顯。

3.3 堿性磷酸酶染色第10天，經細胞堿性磷酸酶染色，可見細胞內藍色顆粒，細胞聚集區成紫黑色。(見圖3)。

圖3 堿性磷酸酶染色(10×10) 圖4 茜素紅染色(10×10)

3.4 茜素紅染色第20天，茜素紅染色可見紅色結節堆積(見圖4)。

4 討論

4.1 杜仲含藥血清的制備血清藥理學在某種程度上可以克服中藥制劑本身的理化性質等不確定因素對實驗結果的干擾， 而且相對接近藥物在體內生物轉化的真實過程。即其具有兩大優點：①體現復方體內生化轉化效應;②克服藥物本身理化性質對實驗的直接干擾[1]。選用同源性的動物制備血清，可以減少因種屬差異而造成的免疫反應，提高實驗結果的可靠性[2]。有人認為含藥血清中原有許多酶、抗體、補體、細胞因子及其它生物活性物質， 它們對體外培養的細胞、病毒、病原菌以及用于體外實驗的組織器官可能產生直接影響而干擾實驗結果， 影響藥物療效的客觀評價。血清滅活后可排除這些干擾因素對實驗結果的影響， 有助于減少血清的非藥理性干擾[3]。但中藥成分復雜，在體內的藥理作用復雜，非滅活血清更能體現藥物在體內的作用，且實驗過程中未見細胞毒性作用。

4.2 原代MSCs分離培養常用于MSCs分離的方法主要采用密度離心法和全骨髓法，而流式細胞儀分離法與免疫磁珠法操作繁瑣、費用昂貴，并且對細胞活性影響較大，使用受到限制。本實驗采用全骨髓貼壁分離法，得到形態均勻一致的MSCs。離心法是根據間充質細胞與其他細胞密度不同，用分離液分離的方法。全骨髓法是根據間充質細胞能在培養瓶中貼壁生長的特點進行分離，實驗發現與密度離心法所獲細胞純度無統計學差別[4]。全骨髓法操作簡單、設備要求低、費用低廉，血液成分的存在以及其所含的生長因子與促貼附物質提供了一個穩定的培養環境和營養物質，有利于MSCs的貼附與增殖[5];研究表明擴增一代、兩代后細胞純度可以達到95%和98%[6]。也有人將不同的分離方法合用[7]發揮更好的作用。

4.3 杜仲含藥血清誘導MSCs的臨床意義骨組織工程學具有廣闊的臨床應用的前景，成為現代骨科學的研究熱點。BMSCs作為目前最為理想的骨組織工程種子細胞，對其作用研究的中心任務則是如何使之在盡可能簡單的條件下定向分化為成骨細胞，進而轉化為成熟的骨細胞。

目前對MSCs定向分化常用的誘導劑由地塞米松、維生素C、β-甘油磷酸鈉組成。而在體外培養中，地塞米松對細胞增殖具有抑制作用[8]，與本實驗所見相同;臨床上地塞米松具有引起感染、骨壞死、骨質疏松等副作用，將會限制MSCs移植后在體內的作為誘導劑的運用。杜仲具有補腎、強筋骨的作用，實驗證明具有促進MSCs增殖和誘導MSCs向成骨分化的作用。長期的臨床運用中，未見杜仲的毒副作用，將其作為體內誘導劑具有廣泛的臨床運用前景。

總之，目前對于MSCs作為骨組織工程種子細胞的研究，大多還處于實驗階段，如何能在較短時間內得到足夠的MSCs，并運用簡單的方法誘導其向成骨分化，是目前研究的重點。盡管具有補腎、強筋骨作用的杜仲促進MSCs分化和增殖作用的機制尚有待進一步研究，但將其作為MSCs分化誘導劑，用于MSCs移植治療骨折延遲愈合、不愈合、骨壞死等具有光明的前景。

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篇9

【關鍵詞】 中藥鑒定；分子生物學技術；免疫法；綜述

近年來，許多新學科理論和試驗技術不斷滲透到中藥鑒定領域，中藥鑒定技術有了一定的發展，現綜述如下。

1 聚類分析法

聚類分析是按照對象的定性或定量特征進行分組歸類的一種現代統計方法。選取不同的模糊相似系數或長短距離計算公式，將一批樣品或變量進行數據處理，得到不同的動態聚類圖，從數圖上即可分類、鑒定和評價藥材質量。經李慧珍等［1］對馬勃等18種真菌顯微特征聚類分析、蘇薇薇［2］以砂仁及其偽品的紫外光譜為量化特征在計算機上用聚類分析法進行分析的實踐，證明該法的實驗結果與傳統的生物學方法吻合，顯示了該技術在中藥鑒定中的廣闊前景。常璇等［3］利用此法對寧夏中寧縣、平羅縣兩地枸杞中銅、鋅、錳、鍺、硒、砷等6種微量元素的含量進行了綜合評價，以比較研究不同產地之間的枸杞。聚類分析結果表明，該法在整體水平上可區分不同產地枸杞中6種元素含量，誤判率為0。提示經過更多的驗證之后，在不同省區枸杞之間進行聚類分析比較研究，可為枸杞道地性質量標準的制定提供有價值的理論依據。張水寒等［4］應用系統聚類法，對20批關黃柏樣品的HPLCFP中各特征峰的相對峰面積進行分析。聚類結果顯示16、17、18、19、20號樣品為道地藥材樣品，質量均較好，且以湖南的道地藥材樣品為好。此方法可用于中藥的鑒別，方法較為簡便，且樣品處理較簡單，這將對中藥質量的規范化起到一定的積極作用。

2 指紋圖譜法

中藥指紋圖譜技術［5］是指某中藥材或中成藥中所共有的，具有特征性的某類或幾種成分的色譜或光譜的圖譜。即用一定的方法（如HPLC、GC、TLC、HPLCMS、GCMS、FTIR、Xray和UV等），對特定的對象（如中藥材、提取物、飲片、注射液等）和過程進行分析，得到的有特征性的相對穩定的圖譜。其最大的特點就是通過指紋圖譜的特征性，有效鑒別樣品的真偽。目前使用最多的中藥化學指紋圖譜是采用HPLC法［6］，可提供大量的信息，符合中藥復雜體系研究的需要。

3 免疫法

不同的動植物藥材含有不同的特異蛋白，免疫鑒別即利用該蛋白制備的特異抗體與待檢品中的特異抗原結合產生沉淀反應來鑒別藥材的真偽。該技術適用于動物藥材的鑒別，尤其是親緣關系比較接近的動物藥間的鑒別［7］。國內學者［8］采用免疫電泳法及瓊脂免疫擴散法準確鑒定了虎、豹等多種動物的骨骼，還能將豹骨進一步鑒定為雪豹、石豹或金錢豹，說明免疫鑒別方法是一種特異性很強的鑒別法。

4 DNA分子遺傳標記技術

分子標記技術也稱DNA分子診斷技術，是基于研究DNA分子由于缺失、插入、易位、倒置、重排或由于存在長短與排列不一的重復序列等機制而產生的多態性的檢測技術［1］。現代分子生物學研究發現，中藥材（不含礦物藥）物種的多樣性是由于其基因多態性的結果，而基因多態性可在分子水平上檢測，它比在形態、組織和化學水平上檢測更能代表其變異類型的遺傳標記。由于DNA分子標記直接分析的是生物的基因型而非表現型，鑒別結果不受環境因素、樣品形態（原品、粉狀或片狀）和材料來源的影響，因此可為中藥品種鑒別提供更加準確可靠的手段。如：限制性片斷長度多態性分析技術（RFLP）；多聚酶鏈反應（PCR）測序技術；隨機引物PCR技術（RAPD）； DNA序列標記技術等。

綜上所述，現代中藥鑒定學發展的目標是：建立包括聚類分析、基因組成特征、指紋圖譜法、等多層面的中藥鑒定學科體系，同時通過這種學科體系建設，為尋找和擴大新藥源提供可靠的指導資料。

參考文獻

［1］李慧珍，李水福，胡清宇，等.馬勃類18種真菌顯微特征的聚類分析［J］.基層中藥雜志，1996，10（3）： 8.

［2］蘇薇薇.聚類分析法在砂仁及其偽品鑒別分類中的應用［J］.數理醫藥學雜志，1998，11 （2）： 158.

［3］常璇，胡奇林.用聚類分析方法對寧夏中寧縣和平羅縣枸杞中6種元素綜合指標的比較研究［J］.寧夏大學學報（自然科學版），2006，27 （3）： 248.

［4］張水寒，郭偉偉，蔡光先.HPLC指紋圖譜結合系統聚類法對不同產地關黃柏藥材的分析研究［J］.科技導報，2006，24（9）： 53.

［5］王睿，徐偉，方翼，等.中藥指紋圖譜研究進展［J］.中國藥師，2004，7（10）：764767.

［6］路飚，彭詠梅.HPLC法測定心腦健滴丸中兒茶素和表兒茶素的含量［J］.湖南中醫雜志，2007，23（1）：7878，83.

篇10

1實驗設計與內容

1.1實驗設計

在臨床之中對中藥的應用以復方為主,方劑學同中藥學均屬于中醫藥學中基礎的學科,是將臨床同理論二者之間進行連接的紐帶,因此,在對中藥學進行多學科性的實驗之中,也需要遵從方藥結合的方式,將二者有機地聯系在一起。在對方劑進行選擇時,不僅需要考慮學生本身屬于初步接觸到專業課這一特點,將組成方劑的藥味設定在3味至4味便可,最理想的是對某一類疾病進行治療的藥方,同時,還能夠對藥方的療效進行保障,中藥藥理學具有著十分可靠的實驗結果,這也能夠有效地增強學生學習的自信心與積極性,還需要保證組成該藥方的藥物能夠為學生帶來更加理想的感知性,在對藥材進行選擇時,應盡可能地保障其形狀特點以及質地等的多樣化,且需要具有明顯的特征,藥物最好能夠包括礦物藥、植物藥以及動物藥等。在對實驗的方法進行設計時,應盡可能地選擇簡明扼要、直觀的教學方式,通過對不同學科知識結構之中一些較為淺顯的要點進行抽取,將顯微鏡之下所觀察到的特點以及肉眼所觀察到的特點進行結合,保證對知識進行傳授時能夠由點到面,形成一個系統的教學路線。

1.2實驗內容

貫徹方藥結合,多學科感知性的實驗思想,在本次研究中選擇應用名方麻杏甘石湯作為研究的內容,該藥房主要有種仁、麻黃、根莖、草質莖、石膏、杏仁、礦石以及干草組成,具有清肺平喘、辛涼解表等效果,在臨床中主要對外感風邪等疾病進行治療,研究的主要內容是將組成麻杏甘石湯的方藥進行鑒定,并對其鎮咳的藥效進行實驗。第一部分:主要對藥用植物的形態進行鑒別。通過專門對藥用植物學進行講授的教師引領學生在植物園內對所種植的藥用植物具體的特征與形態進行觀察。第二部分:對藥材的形狀進行鑒別。通過專門對中藥鑒定學進行講授的教師引領學生到藥標本館對藥材的形狀進行鑒別,在此過程中,教師應引導學生使用肉眼對干草、麻黃、石膏以及杏仁等藥材的特點與性狀進行觀察。第三部分:對藥材進行顯微鑒別。通過專門對中藥鑒定學進行講授的教師引領學生在顯微鏡下對藥材進行鑒別與觀察,引導其自行應用顯微鏡去對干草、麻黃、石膏以及杏仁等藥材特點與性狀進行觀察。第四部分:對方藥藥理進行的實驗。通過專門對中藥藥理學進行講授的教師應用麻杏甘石湯對小白鼠進行鎮咳,提高學生自單一的藥、聯系直至成方,最終完成對方劑藥效的實驗,使學生能夠更加清晰地了解到方劑同中藥之間所存在著的緊密聯系。

2評價與思考