青春啊青春范文

導語：如何才能寫好一篇青春啊青春，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

各大論壇都流行著一句話，韓劇核心理念是閃閃發光的我在你眼里閃閃發光，日劇的理念是我平凡又渺小，好比一塊黑面包，可這樣的我，在你眼里依舊能夠閃閃發光。

這部《對不起，青春》也秉承著日劇一向的核心理念，關鍵詞是青春、熱血、有趣。男主角是近年有著超高人氣，并且和女神新桓結衣有過一段情的錦戶亮，帥氣的外表也為整部劇添色不少，被稱為耷拉眼版本的陳坤。

男主角戀上氣質女神，卻不幸被好友撬了墻腳，一氣之下，怒放煙花，卻導致了隔壁女校的火災。這場火災導致兩所學校之人一直彼此憎惡著對方，十四年后，女高面臨破產，不得不嘗試與隔壁男高合并。

合并前的試點班級班主任，便是十四年前引發那場火災的男主角。十四年前的火災一直是男主角心中無法釋懷的原罪，他想要盡自己最大的努力彌補自己的過錯。

整部劇的人設就是：女主角是神經病一樣的存在，氣場暴烈，能瞬間手撕雞；男主角軟萌可愛，每集耍一次嘴皮，愛說教；保守的大嫂以前拍過熱辣寫真集；神神道道的媽媽會常常扮成各種臥姿奇怪的佛像。

總有人呵斥國產青春劇不屬于我們這一代人，又窮又丑的人沒有青春，只有堆滿課桌的試卷和習題冊。其實青春里點點滴滴的快樂如同被海浪沖上沙灘的貝殼，繽紛且多彩，關鍵是看你是否有心采擷。

劇中每個人物都詮釋著自己在青春時面臨的種種問題，男主角為自己十四年前犯下的錯耿耿于懷，女主角不明白自己為什么會喜歡上完全不是理想型的男主角。有人因為壓力一直壓抑著自己，有人因為自卑一直不敢向喜歡的人表白心跡。

可身為男主角的班主任鼓勵他們勇敢去做――

“喜歡一個人，就應該讓他（她）知道，否則不是白白喜歡了嗎？”

“青春只有一次，貪婪點有何不可？”

置身事外的人永遠最輕松，停頓在原地的人永遠不用擔心未來，可是不努力邁出一步，就永遠不知道前面等待著自己的是什么，是他（她）的“我也喜歡你”抑或是“對不起”？無論答案是哪一個，只有邁出這一步的人才有權利知道。

青春不是一條一通到底的大道，它是一條有著無數岔道的小路，每一個岔路口，我們都要選擇往哪里走。偶爾走了錯誤的路，繞了遠一點的路，又有什么關系呢？或許這條小路有更美麗的風景，或許你在這條小路上能碰到志同道合的好朋友。

我們每個人都有權利犯錯誤，也都有權利說對不起，年輕的時候，要勇敢地去走那條自己向往的路。

我讀書的時候喜歡一個人，我覺得他有一點傻，像橫道世之介，也像堂吉訶德，勇敢到莽撞，善良到蠢笨?？赡贻p時的驕傲總是阻止我告訴他自己的心意。后來我跌跌撞撞長大了，我喜歡的那個人卻早已經有了一個對他好、喜歡他的姑娘。

所以我一度認為自己是一個很糟糕的人，年少時候的虛榮讓我不敢承認自己的心思，后來又成了一個膽小鬼，總也不敢說自己那點忐忑的念想。

因著這點經歷，我看這部劇時，幾乎哭成了淚人。

篇2

“女硬漢”VS“小嬌羞”

小時候堅信婦女能頂半邊天，長大了后才發現不對勁，但凡頂天立地的女子們都變成了一群會痛經的“女硬漢”，有些甚至還引以為榮。這讓人挺傷感的，女人哪能是這樣的?

我們是該在超市掰碎袋裝泡面報復社會?還是該痛罵男人不夠爭氣?還是該詛咒那些不肯跟我們一起做一條真的漢子的“小嬌羞”呢?一切的一切都只能無解，“女硬漢”和“小嬌羞”的關系就好比劉三好與姚金鈴、聶寶言與小唐菜、四眼衰女與金發啦啦隊長、奧斯卡影后與杰西卡?阿爾芭。

如果你?？疵朗角啻盒@片，就會發現，片子里雷打不動會有啦啦隊長與橄欖球四分衛或籃球隊長的“官配”組合，要是啦啦隊長恰好是不起眼女主角的死對頭，那么橄欖球四分衛或籃球隊長在影片最后必定會被豬油蒙了心，發現外在美雖重要，四眼衰女的內在美卻更好。

那些驕縱任性、美麗動人的拉拉隊長們，她們自小貌美優秀、充滿自信、人見人愛，早上上學去，呼風喚雨帶著小嘍，雙手叉腰貓步橫行于休息區，眾人如迎接公主駕臨。這樣的生活多么美好，直到被女主角使絆子、插足。然后，就沒有然后了，你用腳趾頭想都該知道，代表主流價值觀的女主角徹底贏了，美女的命運再無人關心。

筆者年輕的時候很喜歡看這類滅美女威風的橋段，但是隨著年齡的漸長，卻越來越喜歡漂亮的人物，尤其是年輕的啦啦隊長們都酷似杰西卡?阿爾芭的翻版。她可是全民寶貝啊，是自從《風度》雜志2000年開始設置“年度最性感100人”名單以來，唯一每年都榜上有名的女人。業界總有各種關于杰西卡的“神話”――《美國周刊》聲稱，杰西卡曾是湯姆?克魯斯與凱蒂?霍爾姆斯交好之前的首選目標。而痞子阿姆則在歌曲《My Band》中念叨：“昨天Kuniva(說唱樂隊D12成員之一)拿刀威脅我，因為我告訴他，杰西卡?阿爾芭會成為我的老婆。”《碧海追蹤》的導演斯托克威爾則回憶道：“米高梅的主管們在后期監制過程中，都被杰西卡的美貌所分神。我會時不時地受到質問：‘為什么你把她游泳那段剪掉了?’”

少年記憶女主角

沒錯，能讓觀眾幾年來都忽略演技，只求一睹銀幕上芳容的女星，似乎也只有杰西卡?阿爾芭一人。其實杰西卡并不是一個囂張跋扈的姑娘，只是那樣一張陽光明媚如五月天的臉龐，和如蜜糖裹身般的身段，就該是一個顛倒眾生的校園尤物。

據美國IMDb電影網站的一項統計表明，杰西卡的美貌正好符合15-28歲常上電影院觀影的男青年的審美標準。在他們心里，杰西卡是青春的影像，當歷史背景褪色、記憶渾濁的時候，只有她的笑容和美好還是清晰的，定格在16歲暑假的海邊假期里，鮮明在和死黨的中――少年始終不敢沖上前去和她說聲“嗨”，因為她身邊已經有一個高大英俊的他，她是一個愛欺負人但本性不壞的17歲姑娘，并忠于愛情，即使他是一個人渣，少年也深知就算他和她分手了也沒自己的事兒。于是漫漫長夜里，為情所困的少年擼完一管又一管。

于是杰西卡成了所有少年心事中的女神，是他們儲藏柜深處的秘密，是從美國東海岸到西海岸天空上呼嘯而過的飛機，是返校舞會皇后評選時斬釘截鐵的選票，是再也回不去的高中時代里最后一絲憂郁。

如今已經是兩個孩子媽媽的杰西卡，仍然保持著神奇的少女美態，仿佛從未走出過少年們的夢中。她一直站在原地，像個符號，指導大家完成青春必修課。雖然身邊除了高大英俊的外，還多了兩個小奶瓶，但這無損她愛情導師的形象。

齙牙妹都是潛力股

現實中的杰西卡并不是一路從美少女長成大美人的。小時候的她根本就不是學校里的風云人物，她在接受采訪時表示：“我在學校時總是被欺負得很慘，爸爸不得不經常護送我進學校以免受到襲擊。中午我要躲在護士的辦公室吃午餐，這樣就不必跟其他女孩坐在一起。總是蓬頭垢面的我，上課時則得時刻保持警醒。這些遭遇除了因為我是混血人種外，還因為我的爸媽沒錢。我既沒有漂亮衣服，也沒有酷酷的背包，你想，一個講話帶著濃厚得克薩斯州口音的齙牙妹，誰不想順帶欺負一下?”

杰西卡長到十五六歲的時候，才開始穿短裙和泳裝，蛻變由此開始。她一步步地突破自我，擺脫拘束，重拾自信。拍攝電影《罪惡之城》時，導演羅德里格斯覺得她應該把頭發染成金色，于是人生中第一次杰西卡上沙龍換了發色。那段時間，當她頂著金發出入比弗利山酒店或四季酒店的酒廊時，都不需要自己掏錢買酒?！熬频昀飻D滿了王子或富有的老男人，每次都會有人請我喝一杯，我對自己說：‘噢，天啊，難道就是因為我的金發?!’那是我最大限度地賣弄自己了，僅此而已。我一直遵循媽媽教給的道德標準，自我尊重和尊重他人。我希望我的孩子也能學到這點?！?/p>

看看今時今日的杰西卡，不曉得當年欺負過她的男同學們作何感想。筆者不得不提醒大家，齙牙妹都是潛力股，好好珍惜吧。

表演自在街頭

在國內即將上映的系列電影《非常小特工之時間大盜》中，杰西卡?阿爾巴飾演一個孩子的親媽，兩個孩子的后母，隱藏身份還是一個身手不凡的女特務。這是杰西卡第一次在大銀幕上扮演母親的角色，看似是個挑戰，實際上是她最拿手的――去年杰西卡生下了第二個女兒海文?加納?沃倫，辣媽春游的隊伍又壯大了。

說到好萊塢的辣媽街拍，就必須得提杰西卡?阿爾芭，雖然她沒有“精靈嫂”米蘭達?可兒的模特身材，沒有“貝嫂”維多利亞?貝克漢姆的大女人氣場，也沒有“阿湯嫂”凱蒂?霍爾姆斯的全身貴氣名牌，但是杰西卡勝在溫婉親切，家?？扇?。更重要的是，她隨身攜帶的最佳配飾――大女兒奧娜，實在是太古靈精怪了。被圍觀群眾親切稱為“圖娃”的奧娜，完全不是小蘇瑞那樣的小公主派頭，你永遠都想不到頭戴各種莫名其妙、五彩斑斕發卡的娃，在面對狗仔鏡頭時的下一個表情和動作是什么，吐舌頭還是斗雞眼?猩猩步還是僵尸舞?萌得太刺激了。

比起演技時常被評論家詬病的媽媽來說，娃更有表演天分，這就叫上帝關上一扇門，又會為你打開一扇窗――輩子都可能無緣奧斯卡獎的杰西卡，收獲了一個小表演藝術家。

一個能把孩子捌飭成這樣的媽媽，也一定是個極天真和有趣的人。所以在街拍這件事情上，杰西卡也總給人一種“我很認真地想知道，你們到底喜歡我穿什么”的敬業態度。她的出鏡率特別高，以至于街拍都快成了她的主業。在所有好萊塢辣媽中，杰西卡的穿著打扮有很高的學習價值。不拍戲時，她做的最多的事情就是把自己和孩子打扮得漂漂亮亮，挑一個光線最佳的時段出門，有意無意地配合著狗仔拍美照。

篇3

太陽是金梭，月亮是銀梭，織出生活的燦爛，織出歲月的壯美。這是青春的主旋律，也道出了生命之于時光的意蘊。

光陰荏苒，轉瞬離開共青團崗位已經十多年了，也許日常工作的瑣屑漸次淡然，但青年工作朝氣蓬勃、昂揚奮發的氣息和精神，一直激勵著我在不同的工作中進取。回首過往，那是一段深刻而美好的記憶。之所以深刻，是因為共青團工作讓我感悟到，青年人敢作敢為的情懷只有與祖國和人民的念想緊緊擁抱在一起，才會顯得那樣的開闊和博大；之所以美好，是因為共青團工作讓我從一種職責、一種使命的角度去透視赤橙黃綠青藍紫，讓我認識到青春是以奉獻印證出自己最靚麗的本色。故此，我多有感慨：人生能有在共青團工作的經歷，端的是一種緣分，一種精神的財富，它能讓你跟隨時代的走向一往無前，終身受益。

由青年工作我想到青年人，由青年人我想到青春。青春不屬于某個年齡段的專利，青春是進取的標志，是創新者的宣言。青春是一種精神，是書山勤為徑、學?？嘧髦鄣淖穼?，是路漫漫其修遠兮的求索，是苦其心志勞其筋骨的磨礪，是百尺竿頭更進一步的跋涉。青春是一種使命，是成就偉業舍我其誰的氣魄，是天下興亡匹夫有責的胸襟，是我以我血薦軒轅的赤誠，是只問耕耘不問收獲的超脫。

人生短暫，平凡而偉大；青春不朽，純粹而燦爛。生命因奮斗而壯美，青春因追求而風流。朋友們，該是我們寫下傳說的時候了。

謹以此感言向《時代青年》創刊60周年暨復刊30周年表示熱烈的祝賀。

(作者王新強系河南省西平縣人民政府縣長。曾任河南省直機關團委書記)

精彩的驛站，無悔的青春――寫在《時代青年》創刊60周年復刊30周年之際

朱良才

六十甲子，歲月輪回，滄海桑田，流逝的是歲月，孕育的是希望；

三十而立，時光荏苒，崢嶸年華，留下的是足跡，收獲的是輝煌。

《時代青年》，譜盡青春風華；《時代青年》，指引青春航向。

“聚是一團火，散作滿天星?！闭沁@種生生不息的共青精神，感召我們奮斗在鮮艷的團旗下。有緣投身團的工作，是組織的信任，更是個人的光榮。

我從鄉鎮最基層的崗位上一步步走進共青團的大家庭，既經歷了戰天斗地的豪情、面朝黃土背朝天的艱辛，也感受了泥土芳香中播撒希望、歡慶收獲的喜悅?；厥酌篮秒y忘的流金歲月，五彩斑斕的廣闊天地，浸潤這片沃土的滋養，沐浴共青團工作洗禮，砥礪了自己的品性，堅定了自己的意志，陶冶了自己的情操，真正領會了“春夏秋冬共青路，東南西北共青情”的內涵。

我摯愛共青團工作，并榮幸能成為共青團大家庭的一員，先后兩次團的工作經歷，四年難忘的共青歲月，讓我深切感受到共青團火一樣的生命力和青年的熱情、無畏、朝氣與潛能。與青年志愿者一起支援四川災區，和小朋友共值“紅領巾交通崗”，為留守兒童送去發自內心的關愛，同周口青年英模傾情交流，幫外出務工青年撐起一片晴空……我正是在朝氣蓬勃、實事求是的追求與挑戰中感受著青春的魅力與永恒。

篇4

Sarah Jessica Parker五官塌陷的太過明顯，法令紋特別突出，更可怖的是，她畫了一個小煙熏，讓她的眼睛像一只靈巧的貓或者豹子，頭發亂糟糟的黃黑相間，這一切搭配著John Galliano的白色“軍裝”，在熱愛SJP的粉絲眼中，無疑是一個車禍現場。

社交平臺更加無情，把Sarah Jessica Parker的照片和《俠膽雄獅》中的獅子（其實是一個長著獅子臉的人）擺放在一起，獅子并沒有顯得太難看。

搜索了一下，Sarah Jessica Parker最近一直熱衷的這款眼妝，也是有名有姓的造型師造型，并且是刻意為之的。

據說，這是Sarah Jessica Parker自己設計的造型，她希望在出席任何party和名人出現的事件中，這雙小煙熏的貓眼是她的眼睛。

最近一直在哼唱這個曲子，“時光一逝永不回，往事只能回味，憶童年竹馬青梅，兩小無猜日夜相隨?！?/p>

唱著唱著覺得是在講我們愛過的女主角們。

記憶中的Sarah Jessica Parker是什么形象呢？

金黃色的波西米亞卷發，永遠傳遞出半夢半醒的黏膩感，臉長，但是脖子也是頎長的，她是敢穿基本款出門仍然很美艷的人，就是因為那標志性的卷曲頭發。

Carrie（《欲望都市》女主角）的長相大概是毀譽參半，有人甚至說，長這么難看還能當主角的，除了史萊克，也就只有她了。比長相更不招待見的，是她的神態，一遇到男人，就開始搖頭晃腦，說話裝可愛，像個情竇初開的loli，但是就是這種做作搭配她的臉她的大嘴她的眼睛，一切都合理很多。雖然個子矮，但是比例奇好，不跟別人站一起，都顯不出她矮，腿尤其漂亮，又細又直又長。

她敏感脆弱，聰明幽默，有點小才情，有點矯情虛榮，診斷起別人的感情來一針見血，但輪到自己了就滿腦袋漿糊，對朋友好，但也經常重色輕友……好多女人愿意成為她。

看豆瓣有一則提問――怎樣才能過上這樣的生活？回答一睡覺；回答二做夢。

可是時間都去哪里了？

好多人還是沒有機會長大成為Carrie，Carrie就已經老了。

有人說，人的衰老就是細胞含水量的減少，我們看到的干干巴巴的歐美老人只是因為他們瘦啊，咱這兒五十來歲的瘦人也是干干巴巴的，再加上他們經常曬太陽什么的，紫外線對于皮膚的傷害其實還挺大的，于是看著就像干尸了……大寫的一個遄幀

痛定思痛，打開一瓶高倍補水面霜，拯救自己，從現在開始吧。

TIPS！

尋找欲望的都市道路很長

劉瑜老師說了，“雖然我生活在紐約，雖然我也有幾個死活嫁不出去的女朋友，但是我特別討厭看《欲望都市》。討厭的原因很簡單：這些女人得到男人們怎么就那么容易？”

如果說年輕女子前往紐約是為了尋找兩個“L”――品牌（Label）和愛情（Love），那么看罷該片我們不妨也捫心自問，你呢？

這個提問始于2000年初第一次看《欲望都市》的時候自己問自己的話。時間過去了十幾年了，這個問題還是通用的，還是捫心自問。

現在說起《欲望都市》，真的有點朝花夕拾的感覺。

關于紐約，1979年，伍迪?艾倫曾在他的電影《曼哈頓》里這樣饒舌

――無論季節如何流轉，對他而言，紐約都是浸沒在喬治?蓋希文爵士樂之中的城市。

他恰是他所深愛的紐約的化身，黑邊眼鏡下是他叢林豹般不可抗拒的魅力，紐約是他的城市，并將永遠如此。

Sarah Jessica Parker亦是紐約的形象代言人。只要有她在，即使失去了傲人高聳的雙子塔，紐約依然是個充滿致命誘惑的不夜城。

她是《人物》雜志全球25位最具吸引力人物之一，拿過三回金球獎喜劇和劇情類電視最佳女主角。她被人稱做“紐約街頭時尚風向標”，她自己更自稱是時尚的“風眼”，她說：“一切流行的旋風都從我身邊刮過去?！?/p>

女人們花一個晚上看她主演的電視劇，再花一整個白天研究她的包包和鞋子。從Carrie在1998年第一次用她微醺的嗓音，向她們發出“hello stranger”的召喚開始，她們觀摩了關于她和她的三女友們落力出演的一場場關于愛和友誼的悲喜劇，其中Carrie擅長成人童話??；Miranda熟捻金領諷刺??；Charlotte擔綱家庭輕喜劇，Samantha領銜情場傳奇劇。

而這十年劇場人生，四女子除了臉上風云“皺”起外，其他一概未變，依然高唱著Love和Label的凱歌。而在現實生活中跌宕了十年的作為觀眾的她們，對愛和婚姻的認識卻已經完全改變：那些曾經的愛大抵已經下落不明，而即使仍有殘影，對于那些愛的糾纏，往往也是出于慣性。

Sarah Jessica Parker飾演的那個著名的時尚女Carrie Bradshaw甚至穿著很隆重的黑色Burberry和trilby款的帽子進超市，即使在家里也要扮富貴的Nina Ricci女郎，然而，以平均兩分鐘的速度更換的八十一件衫，終歸還是不及最后那雙Manolo Blahnik高跟鞋來得意味深長，不僅是代表了感受，也是愛的抉擇。

如同她們和時斷時續糾纏了十年的老情人的愛事一樣，她們對《欲望都市》和與它有關的一切影像記憶，其實已經和熱愛沒有關系，她們只是在青春的影子里，和自己談著一場一廂情愿的戀愛。

篇5

作者：梁英民　蔣姍姍　孫強　吳絨麗　陳萍　李榮　周鵬　王鍵　韓驊

【關鍵詞】 基因表達

關鍵詞: bcr/abl;基因表達;融合蛋白;抗血清

摘 要:目的 克隆并表達bcr/abl融合基因片段，并制備其抗血清. 方法 PCR擴增包含蛋白融合點的bcr/abl癌基因片段，序列測定后克隆入帶有His標簽的原核表達載體pET-16b，轉化宿主菌BL21，IPTG誘導表達，SDS-PAGE分析表達結果，Ni-NTA樹脂親和純化，皮下多點注射免疫小鼠，ELISA確認抗血清的滴度. 結果 PCR擴增得到大小約523bp的目的片段，序列測定表明與發表序列完全一致;得到了一種新的癌基因bcr/abl片段的原核表達載體pET-16b-bcr/abl，在BL21中表達可見于Mr21×103 處有一蛋白新生帶，表達的BCR/ABL蛋白免疫小鼠后，ELESA確認抗血清的滴度>1∶2000. 結論 成功的克隆、表達了bcr/abl融合基因片段，并制備了相應的抗血清.

Keywords:bcr/abl;gene expression;fusion protein;immune serum

Abstract:AIM To clone and to express bcr/abl fusion gene fragment and to produce immune serum against the expressed fusion protein.METHODS PCR-amplified bcr/abl gene fragment was inserted into plasmid pET-16b with His tag　to form a new plasmid pET-16-bcr/abl（pEb）.The BCR/ABL fusion protein was expressed in E.coli BL21trans-formed with pEb and induced with IPTG.The expressed pro-tein was purified by affinity resin-Ni-NTA and analyzed by SDS-PAGE.In order to produce anti-serum，Mice were im-munized by subcutaneously multi-site injection with BCR/ABL protein.The anti-serum was assayed by ELISA.RESULTS Molecular weight of the PCR-aimplified bcr/abl gene fragment which was consistent with the published se-quence was about523bp.Plasmid pEb was constructed.The molecular size of BCR/ABL protein expression was about Mr21×103 .The titer of the BCR/ABL protein anti-serum was more than1∶2000.CONCLUSION Fragment of bcr/abl fu-sion gene is successfully cloned and expressed.The antiserum of BCR/ABL protein fragment has been produced.

0 引言

慢性粒細胞白血?。–hronic myelogenous leukemia，CML）是起源于骨髓造血干細胞的惡性腫瘤.絕大多數CML患者的腫瘤細胞帶有染色體異常，即9∶22號染色體易位，形成特征性的費城染色體（Pheladophia，ph染色體）［1，2］ .在分子水平，這一染色體易位造成bcr基因和abl基因的融合，表達的BCR/ABL融合蛋白具有持續性的激酶活性，引起細胞的轉化［2］ .Bcr/abl融合蛋白被認為是CML特異性腫瘤抗原，可作為CML診斷和治療的指標［3-6］ .我們用PCR擴增了BCR/ABL融合蛋白的基因片段，并在大腸桿菌中進行了表達.表達產物經純化復性后，用于免疫小鼠，得到可識別該抗原的小鼠抗血清.

1 材料和方法

1.1 細菌和質粒 大腸桿菌XL-10gold由本室保存.質粒pET-16b及大腸桿菌BL21均來自Nav-agene公司.帶有人bcr/abl（b3a2）融合基因的質粒pGD210由本校附屬唐都醫院血液科劉立博士提供.

1.2 引物設計與bcr/abl融合基因表達質粒的構建 DNA重組所用試劑來自Promega、寶生物工程公司及華美生物工程公司.以質粒pGD210為模板，用PCR擴增了bcr/abl基因跨越融合點的523bp基因片段（93aa-265aa）.PCR引物的序列為:上游引物:5’-CTCGAGACGTTCCTGATCTCCTCT;下游引物:5’-GGATCCTTAGTAGTTGCTTGGGACC-CA.PCR產物經電泳回收純化后插入pGEM-T載體（Promega），進行DNA序列分析.從正確克隆的載體中，用Xho I和BamH I雙酶切下含有bcr/abl融合基因插入片段，插入質粒pET-16b，得到表達BCR/ABL融合蛋白的質粒pET-bcr/abl（Fig1），以下簡稱pEb.

1.3 重組蛋白的誘導表達和純化 用表達質粒pEb轉化大腸桿菌BL21，加入IPTG至終濃度1mmol?L-1 ，誘導不同時間后，收集菌體.懸浮于PBS，超聲裂菌，離心棄去上清.向沉淀中加入2mol?L-1 尿素，離心除去雜蛋白.再用8mol?L-1 尿素溶解沉淀的蛋白，在Ni-NTA-agarose柱（Vector公司）上進行親和層析.用250mmol?L

-1 咪唑洗脫.收集洗脫的蛋白，透析后凍干保存.

圖1 略

1.4 抗血清的制備 BALB/c小鼠由第四軍醫大學實驗動物中心提供，用50μg基因重組的BCR/ABL融合蛋白與等量的福氏佐劑混后皮下多點注射，每周一次，第四周腹腔注射加強一次，加強免疫后14天取血，分離血清備用.

1.5 酶聯免疫試驗（ELISA） 向96孔板中加入純化的BCR/ABL融合蛋白（5μg/μL）100μL，4℃包被過夜.加入稀釋的經免疫小鼠的血清與未經免疫小鼠的血清，血清稀釋度均為1∶500，1∶1000，1∶2000，1∶4000，1∶8000，1∶16000，設一陰性對照孔， 37℃水浴1h，加入酶標抗體，37℃1h，TMB顯色15～30min，酶聯免疫檢測儀測定，測定波長為492nm.

1.6 DNA序列分析 按說明書用PE公司的熒光DNA序列測定試劑盒（Big-dye）進行序列測定反應，用310型DNA序列測定儀進行電泳及結果分析.

2 結果

2.1 bcr/abl基因的亞克隆 為表達BCR/ABL融合蛋白融合點兩側約200個氨基酸的片段.以全長bcr/abl基因為模板，用PCR擴增了這一片段的cD-NA.Fig2顯示523bp的目的片段被擴增出來.將這一片段插入T載體后，進行DNA序列分析，但在5’和3’端分別插入了設計的Xho I和BamH I酶切位點.

圖2 略

2.2 BCR/ABL融合蛋白的誘導表達 用bcr/abl表達質粒pEb轉化大腸桿菌BL21，培養后用IPTG進行誘導.SDS-PAGE分析結果表明，與用pET-16b轉化的BL21及未轉化質粒的BL21裂解產物相比，在21kd處有一新生蛋白帶，與預期的融合蛋白分子大小相同.灰度掃描顯示IPTG誘導3h后融合蛋白的表達約占細菌總蛋白的20%.

2.3 BCR/ABL融合蛋白的純化 用Ni-NTA-a-garose親和層析柱進行BCR/ABL融合蛋白的純化.收集蛋白峰，PBS透析后，進行SDS-PAGE分析（Fig3）.表達的融合蛋白被純化為單一條帶.

2.4 BCR/ABL融合蛋白在小鼠中的抗體應答 收集免疫小鼠的抗血清，ELISA檢測結果見圖4，與正常對照比較，接受融合蛋白免疫的小鼠產生了較高滴度的血清，說明基因重組的BCR/ABL融合蛋白對小鼠具有免疫原性.

圖3 － 圖4 略

3 討論

bcr/abl融合基因是CML的分子標記，bcr/abl融合基因編碼一個分子量為Mr21×104 的融合蛋白.由于融合蛋白連接區的氨基酸序列是其他任何正常蛋白質不具有的，被認為是CML細胞所特有的.BCR/ABL融合蛋白是一種胞漿內蛋白，研究bcr/abl融合蛋白在細胞表面的表達的類型和該融合蛋白的免疫學特點對開展CML的免疫治療有重要意義［3-6］ .然而，由于融合蛋白很難從患者體內獲得，而且在細胞內加工和提呈的效率也難以檢測，為此，本文用體外基因重組的方法獲得了bcr/abl融合蛋白的原核表達產物，經純化復性后，用于免疫小鼠，得到了可識別該抗原的小鼠抗血清，為隨后的單克隆抗體制備及免疫治療的研究奠定了基礎.

參考文獻

［1］Kurzrock R，Gutterman JU，Talpaz M.The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias ［J］.N Engl J Med，1988;319（15）:990-998.

［2］Shtivelman E，Lifshitz B，Gale RP，Canaani E.Fused transcript of abl and bcr genes in chronic myelogenous leukaemia ［J］.Na-ture，1985;315（6020）:550-554.

［3］Liang Y M，Sun Q，Jiang S S，Cheng P，Wang J S，Liu L，Han H.Expression of PTD-bcr/abl fusion oncoprotein fragment carrying protein transduction domain and its transmembrane transportation ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（7）:Cover2.

［4］Feng Q，Sun BZ，Zhao YT，Sun K，Yan Z，Han W，Zhang YQ.Study on the cleavage ability of three ribozymes specific to the different sites of bcr-abl fusion gene ［J］.Di-si Junyi Dax-ue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），1999;20（4）:284-287.

篇6

[關鍵詞] 阿法骨化醇；IgA腎??；腫瘤壞死因子-α；白細胞介素-6；轉化生長因子-β1

[中圖分類號] R692.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）03（b）-0150-04

[Abstract] Objective To explore the effect of different doses of Alfacalcidol on serum levels of tumor necrosis factor alpha （TNF-α）， interleukin 6 （IL-6） and transforming growth factor beta 1 （TGF-β1） in patients with IgA nephropathy （IgAN）. Methods 52 patients with IgAN admitted to Three Gorges University People's Hospital from October 2012 to February 2015 were selected and randomly divided into group A and group B， with 26 cases in each group. While 30 healthy adults were selected as normal group. On the basis of routine RAS therapy plan， group B was treated with Alfacalcidol （0.5 μg， once a day） for 12 weeks， while group A was treated with Alfacalcidol （0.25 μg， once a day）. The changes of serum TNF-α， IL-6， TGF-β1， cystainCm（Cys-C）， blood urea nitrogen （BUN）， serum creatinine （Scr） and 24 hours urinary total protein （UTP） in two groups were compared before and after treatment. Results Compared with normal group， serum TNF-α， IL-6 and TGF-β1 levels were significantly higher than those in IgAN group （P < 0.01）. After 12 weeks of treatment， the level of TNF-α， IL-6， TGF-β1， Cys-C and 24 h UTP had obviously declined （P < 0.05）， compared with that before treatment in two groups， and the reduction of group B was higher than group A （P < 0.05）. There was no significant difference in BUN and Scr between the two groups before and after treatment （P > 0.05）. Conclusion Inflammation reaction exists in IgAN， Alfacalcidol can significantly reduce TNT-α， IL-6， TGF-β1 level in serum of IgAN patients， reduce albuminuria， improve renal function， and the dose of 0.5 μg/d is better than 0.25 μg/d.

[Key words] Alfacalcidol； IgA nephropathy； Tumor necrosis factor-α； Interleukin-6； Transforming growth factor-β1

IgA腎?。↖gA nephropathy，IgAN）是導致我國終末期腎病的主要原因之一。盡管其病因與發病機制尚未完全闡明，但IgAN發病機制的中心環節與細胞炎性因子的分泌異常有關，且被認為是導致各種腎小球腎炎腎臟損傷的重要物質。既往已有研究報道在IgAN患者血清中炎性因子表達升高[1]，且臨床研究證實活性維生素D能降低IgAN患者的蛋白尿，已作為IgAN治療新的嘗試[2-3]，但目前尚不清楚在不同的病理生理狀態下，活性維生素D作用于維生素D受體，進而能產生抗炎性反應作用所需的合理劑量[4]。本研究旨在觀察已應用雙倍劑量腎素血管緊張素系統（RAS）阻斷劑治療3個月以上、但蛋白尿未降至0.5 g/24 h以下的IgAN患者血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）和轉化生長因子-β1（TGF-β1）水平的變化及探討不同劑量阿法骨化醇對其的影響，現將結果報道如下：

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2012年10月～2015年2月在三峽大學人民醫院（以下簡稱“我院”）隨訪的IgAN患者52例。納入標準：①Lee分級Ⅱ級或Ⅲ級；②雙倍劑量的RAS阻斷劑治療時間3個月以上，血壓控制在130/80 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）以內；③24 h尿蛋白定量0.5～3.0 g伴或不伴血尿，估算腎小球濾過率（MDRD計算公式）>50 mL/（min?1.73 m2）。排除標準：①繼發性IgAN患者；②阿法骨化醇過敏者；③計劃妊娠者；④使用糖皮質激素或其他免疫抑制劑者；⑤合并嚴重心、腦、肝等慢性疾病者；⑥高鈣血癥者；⑦2周內應用過維生素、阿司匹林、調脂藥及抗氧化劑藥物者；⑧依從性差不能完成隨訪者。符合入選標準的IgAN患者52例，其中男29例，女23例，平均年齡（35.1±13.2）歲。按隨機數字表法分為A組和B組，每組26例，兩組患者在性別、年齡、病程、血壓、腎臟病理及RAS阻斷劑藥物治療方面比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。同期選取性別和年齡與患者相匹配的健康成年人30例為正常組，其中男16例，女14例，平均年齡（34.9±13.1）歲，均來源于我院健康體檢者。本研究方案經我院醫學倫理委員會通過，所有患者均簽署了知情同意書。

1.2 方法

所有IgAN患者均維持原有雙倍劑量RAS阻斷劑等常規治療，在此基礎上，A組患者口服阿法骨化醇膠丸（中美合資昆明貝克諾頓制藥公司生產，國藥準字J20130162）0.25 μg，1粒/d，B組口服阿法骨化醇膠丸0.5 μg，1粒/d。兩組療程均為12周。

1.3 檢測指標及方法

雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗法檢測外周血中TNF-α、IL-6和TGF-β1含量。日立7600型全自動生化分析儀檢測血胱抑素-C（Cys-c）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）水平。雙縮脲法測定24 h尿蛋白總量（UTP）。

1.4統計學方法

應用SPSS 20.0統計軟件對本研究所得數據進行分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，同組內治療前后比較采用配對t檢驗，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IgAN組和正常組血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平比較

與正常組比較，IgAN組患者血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平明顯升高，差異均有高度統計學意義（P < 0.01）。見表2。

2.2 A組和B組Cys-c、BUN、Scr、24 h UTP比較

治療前，A組和B組Cys-c、BUN、Scr、24 h UTP差異比較無統計學意義（P > 0.05）。12周后，A和B組患者Cys-c、24 h UTP均較本組治療前顯著下降（P < 0.05），且治療B組患者Cys-c、24 h UTP均低于治療A組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。兩組患者BUN、Scr水平比較以及與本組治療前相應指標水平比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。見表3。

2.3 A組和B組血清TNF-α、IL-6和TGF-β1比較

治療前，A組和B組患者血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平比較差異無統計學意義（P > 0.05）。12周后，A組患者血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平較治療前明顯下降，差異有統計學意義（P < 0.05）；B組血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平較本組治療前及治療A組治療后明顯下降，差異均有統計學意義（P < 0.05）。見表4。

3 討論

IgAN是多因素參與的免疫相關性腎小球腎炎，現代分子生物學研究認為，免疫介導的炎癥反應在IgAN發生、發展中起關鍵作用[5]，免疫反應為始動因素，IgAN患者體內的異常多聚IgA1沉積于腎系膜細胞（glomerular mesangial cells，GMC）后釋放了多種炎性因子而致病，其中炎性因子TNF-α、IL-6、TGF-β1 在IgAN進程中的作用逐漸引起人們的廣泛關注[6]。

TNF-α主要由活化的單核巨噬細胞產生，但腎臟固有細胞如GMC、上皮細胞均可分泌TNF-α。研究表明[7]，TNF-α可影響腎小球GMC功能，導致細胞形態和細胞骨架的改變，刺激GMC增殖及表達黏附分子，并能刺激成纖維細胞增生，促進腎臟纖維化。有報道顯示[8]，IgAN患者血、尿及腎組織中TNF-α的濃度均明顯增高，其升高程度與病情成正相關，隨著病情的好轉，TNF-α含量明顯下降。IL-6既可作為各種腎臟病急性期反應的調節因子，又可通過自分泌或旁分泌方式與多種細胞炎性因子如TNF-α、TGF-β1等相互作用，參與免疫調節和炎癥反應。目前有研究顯示IgAN患者血清IL-6水平明顯增高，IL-6可促進內皮細胞和巨噬細胞的促凝血活性、增加系膜細胞蛋白激酶的活性，加重腎臟損害[9]。馬云霞等[10]研究表明，在系膜增殖性腎炎病變中，免疫復合物沉積刺激GMC分泌IL-6，IL-6又可以進一步刺激細胞外基質的增生，形成惡性循環，導致腎小球纖維化。有學者應用抗IL-6抗體，既可抑制GMC分泌IL-6，又可抑制系膜增殖[11]，進一步表明IL-6在IgAN的發生、發展及轉歸中的重要意義。TGF-β1在IgAN進展過程中起重要作用，其過度表達可通過多種途徑促進GMC增殖及細胞外基質聚積[12]。多項對TGF-β1/Smad通路的研究發現，拮抗該通路的活化，可以抑制腎間質纖維化[13]。有學者報道中國華北地區IgAN患者的腎小球和血清中TGF-β1水平明顯升高，且與病理級別、尿蛋白呈正相關[14]，提示可以通過抑制TGF-β1生成來防治IgAN的發生、發展。

阿法骨化醇主要成分是1α-羥基維生素D3，臨床主要用于骨質疏松、甲狀旁腺功能亢進、維生素D缺乏癥和腎性骨病等。近期的動物實驗發現活性維生素D具有抑制腎素活性、調節免疫功能，可以通過核因子κB信號通路及Toll樣受體4路徑抑制腎臟局部炎癥反應[15-16]。Fishbane等[17]發現活性維生素D 治療CKD患者，可抑制T淋巴細胞的增殖與活化，減少細胞因子及TGF-β1的產生，抑制粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子及樹突狀細胞的生長。Andress等[18]在CKD中的研究表明，活性維生素 D 可抑制炎癥因子IL-1B、IL-6合成，促進IL-10、IL-4分泌，抑制巨噬細胞活性。以上研究提示，活性維生素D可以減輕CKD患者的免疫炎癥，但在不同的病理生理狀態下所需要的最佳劑量尚不明確。

本研究嘗試在已使用雙倍劑量RAS阻斷劑治療3個月以上、但尿蛋白水平未降至0.5 g/24 h以下的IgAN患者中，采用不同劑量阿法骨化醇探討其對IgAN患者血清TNF-α、IL-6 、TGF-β1水平的影響，結果顯示：與正常組比較，IgAN患者治療前血清TNF-α、IL-6和TGF-β1水平明顯升高，差異均有統計學意義，提示IgAN患者存在炎性反應，疾病處于進展狀態。經12周治療后，兩組患者Cys-C及24 h UTP自身前后對照均明顯降低（P < 0.05），組間比較差異有統計學意義（P < 0.05），說明兩種治療方法均有效，但是B組優于A組。有研究表明[19]，雙倍劑量活性維生素D治療糖尿病腎病，其降低尿蛋白程度與單倍劑量相比，有明顯的增加，與本研究結果類似。表4結果顯示：兩組患者血清TNF-α、IL-6、TGF-β1水平較治療前均明顯下降，差異有統計學意義（P

綜上所述，阿法骨化醇對IgAN患者具有減輕炎癥反應、減少蛋白尿及保護腎功能的作用，本研究初步結果顯示阿法骨化醇0.5 μg/d劑量效果優于0.25 μg/d劑量。當然，由于本研究納入的樣本量偏少、時間較短，阿法骨化醇對IgAN腎臟保護作用與劑量依賴性是否相關有待進一步探討。

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篇7

青春期的煩惱，真的可能說不清吧。經歷過青春期的人應該都知道那應該是最難熬的一段日子了，所有人都不理解你來的莫名其妙地小情緒，你臉上時不時冒出來的幾顆紅痘痘，又紅又腫，更是讓一些外協的人對你的印象不好了，痘痘在青春期簡直算是家長便飯了吧……

青春期還有很多很多說不盡的煩躁啊，雖然青春期的時候身高會漲得更快一些，讓你看上去很高挑，可是正因為身體激素分泌的太多，我們會發現自己的眼睛看東西也越來越模糊了??？是的，青春期的時候眼睛度數也越長越快，給戴眼鏡的小伙伴們造成了無限的煩躁，青春期有一段日子就是叛逆期了，那段時間你會遭受所有人的不理解， 會遭受各種冷嘲熱諷，嘲諷你的為人態度，嘲諷你的脾氣暴躁，嘲諷你最近一段時期的挫敗，幾乎你身上發生的所有的事情都會因為你對別人的態度而遭受別人的非議。想做一個沒有青春期和叛逆期的人啊，可有時候我又想通了。誰沒有經歷青春期的時候呢？誰沒有一段青澀稚嫩的青春呢？經歷過青春期之后的我們那才是真的成熟了，如果一個人從頭到尾都是成熟的話，那怎么可能呢？我們都不是圣人，誰都有七情六欲誰都有曾經懵懂無知的時候啊，我們不可能每一刻都保持住自己的理智啊，誰沒有青春時候沖動過呢？多少人渴望青春的季節，可現在的我們正在青春的好時期，卻總是不懂得珍惜，人生就是這樣，你擁有的時候不懂得珍惜，等你失去的時候也就是你追悔莫及的時候了。人生充滿了太多的惋惜和后悔了，可我們唯一能做的就是讓我們自己的遺憾和后悔……

青春期，多少人想要回頭再重新經歷，可現在的我們又想拋棄青春期這個磨人的小妖精，是苦是樂一切盡在不言中，有人惋惜，有人后悔，有人留戀……

篇8

09年第二天我摔跤。

09年第三天我被OBAS罵。

……

難道這就是青春？

第四天我又會干什么？

青春啊，為什么你總是讓我的運氣這么損？為什么你總是讓我的心受傷？

孩子啊，每個人都是這樣走過青春的。

徐老大說，你一年的第一天認真寫作業，你一年就都會認真寫作業。一開始我不屑一顧，覺得我的IQ不會低到被老師騙的程度吧？可是現在我卻好怕，好怕我這一年都會摔跤，都會挨罵。

哎，青春啊青春，為什么你總是這么喜歡捉弄人呢？

媽媽說，我已經長大了，懂事了，需要抵抗的誘惑也越來越多了。我知道。媽媽不準我晚上太晚回來，不可以去偏僻的地方，不可以和無所事事的人玩……好多好多的規定啊，搞的我好煩好煩。沒辦法，媽媽也是為了我好嘛，所以只好盡量去做媽媽心中的好女兒了。

哎，青春啊青春，為什么你總是有這么多束縛呢？

爸爸說，人不可以活的太張揚。我深深的記住了這句話，因為我覺得這話對我一定會有用的。“虛榮心是女孩子的弱點，也是致命的弱點。”爸爸的話我都記得很清楚。我上了中學，感覺世界也變得復雜了很多。以前在小學的時候，不用擔心會有誰欺負我，因為在小學大家都是規規矩矩的?？墒堑搅酥袑W，我走路都是低著頭的，而且見到穿著古怪的學生就趕緊繞道而行。有時候我都覺得自己有點太過敏感了，因為我生性就怕流氓，看到了總是躲的遠遠的，好像他們是老虎獅子似的。爸爸的話讓我明白了，做人不可以太張揚，要學會低調做人，那樣才不會有危險。

篇9

回首過去，展望未來，可能有太多值得思考和留戀的了，現在，正值青春期的我們，十二三四的年齡，我們是怎樣的呢？

正值青春期的我們，是叛逆？是反感？曾一而再，再而三的與父母頂撞，一切都按照自己的意愿為所欲為。不曾再像小時一樣，為父母捏腰捶背，關心父母，而是對他們冷眼相對嗎？在那個充滿溫馨的母親節中，你做了什么？這可能就是：青春期。我們。

正值青春期的我們，開始愛美，?？?，這都是可以了解的個性，因為畢竟我們還都是一個個正擁有青春面容的孩子，更何況：愛美之心，人皆有之??！可當我們在擺弄著那些衣櫥中的愛衣時，爸爸媽媽呢？他們在為我們奔波，為我們這些所有的一切而奮斗??！我們曾有想過他們嗎？我們從來都是那樣刁蠻任性嗎？從來就沒有為他人著想過嗎？我想：這錯了！也許，這就是：青春期。我們

現在，我們每一個孩子，可以說都在正值青春期，而祖國需要的是一個個可以建設我們國家的棟梁之才??！青春期的我們，還會是那樣嗎？叛逆？強詞奪理？我想：青春期。我們應該是另一個新面貌，另一個世界的我們……所有青春期的朋友，也許，我們的青春期應該是另一個面貌，不是嗎？

四小，五一五年級：唐一鳴

篇10

斑駁在童年的夢上，

那綺麗的南柯一夢；

那嫣然的芳菲夢想；

那縹緲的真摯諾言。

可愛的青春，

倒映在母親的搖籃上，

那綿綿的天籟絮語；

那迷人的溫馨童話；

那愜意的搖籃曲音符。

莫名的青春，

相逢在十五歲的路上，

那壯闊的藍天蒼穹；

那輕柔的雀躍步履；

那點滴的容貌蛻變。

深邃的青春，

相約在陌生的欲望上，

那澎湃的人生舞臺；

那素顏的青春傷疤；

那破繭的酸楚悲痛。

朋友??！

別做昏庸的無知者，

一起擁護青春，

喝彩青春，

珍惜青春，

把握青春。

朋友??！

用一顆無暇的心，