復方生物黃酮實驗研究論文

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【摘要】目的為了研究復方生物黃酮（圣安泰牌百力康片）的潛在致突變性。方法我們對該產品進行了Ames實驗、小鼠骨髓細胞微核實驗和小鼠精子畸形實驗。結果Ames實驗，小鼠骨髓細胞微核實驗，小鼠精子畸形實驗等結果均為陰性，均未見毒性改變。結論復方生物黃酮在服用劑量內未見致突變性。

【關鍵詞】復方生物黃酮；Ames實驗；小鼠骨髓細胞微核實驗；小鼠精子畸形實驗

【Abstract】Inordertostudythepotentialmutationgenesisofcompoundflavine，wehaveperformedAmestests，ratmarrowosteocytemicronucleartestsandratspermdeformationtests.Theresultsareallnegative，notoxicchangeshavebeenobserved.Itisconcludedthatnomutationgenesiseffectsofcompoundbio-flavinehavebeendiscoveredinfeedingdosage.

【Keywords】compoundbio-flavine；Amestests；ratmarrowosteocytemicronucleartests；ratspermdeformationtests

隨著生命科學的不斷發展，人們對生物黃酮有了廣泛的研究，發現黃酮類化合物具有良好的抗氧化性能［1］和清除自由基的能力［2］；具有抗腫瘤作用［3］；植物雌激素樣作用；減少體內膽固醇的合成，降糖作用［4］和降低血清膽固醇濃度和對心腦血管的保護作用［5］；對細胞免疫功能和非特異性免疫功能均有提高作用。生物黃酮的種類眾多，其來源不同，所發揮的生物活性也不同。根據傳統中醫理論以枸杞、黃芪、銀杏葉為主要原料，輔以其他輔料制成的復方生物黃酮，可以更好的發揮黃酮的提高免疫作用，盡管這些主要原料均來源于“既食又藥”的物質，但是關于復方成分的致突變性研究較少。為了研究復方生物黃酮（圣安泰牌百力康片）可能對人體造成的潛在致突變性，我們對該產品進行了Ames實驗、小鼠骨髓微核實驗和小鼠精子畸形實驗，以期為今后開發利用我國“既食又藥”的醫藥寶庫提供科學依據。

1材料與方法

1.1樣品復方生物黃酮的商品名稱為圣安泰牌百力康片，由哈爾濱圣安泰生物科技有限公司提供。樣品以枸杞、黃芪、銀杏葉為主要原料，輔以其他輔料制成，功效成分為總黃酮。

1.2材料昆明種小白鼠（批準證號：醫動字第09-2-7號），購自黑龍江省腫瘤研究所實驗動物中心。TA97a、TA98、TA100和TA102四種菌株引自美國加州大學Ames實驗室。

1.3方法

1.3.1鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗（Ames實驗）TA97a、TA98、TA100和TA102四種菌株引自美國加州大學Ames實驗室。經菌株特性鑒定均符合實驗要求?；罨到y為PCB-五氯誘導的雄性Wistar大鼠肝s-9液。按1：9加入輔助因子（Ames1983年配方）配成10％s-9混合液，經陽性誘變劑活性鑒定符合實驗要求。實驗樣品經XAD-11樹脂柱過濾及洗脫預處理，最后以DMSO為溶劑，劑量設計分別為5mg/皿、1mg/皿、0.2mg/皿、0.04mg/皿和0.008mg/皿受試物。除上述5個劑量組外，又設未處理對照組、溶劑對照組（DMSO）和陽性對照組［加s-9用2-AF（TA102用1，8-二羥蒽醌），不加s-9用DEXON（TA100用疊氮鈉）］。采用平板滲入法進行實驗。在保溫的頂層培養基中依次加入測試菌株新鮮增菌液0.1ml，混勻；加受試物或對照物0.1ml［需活化時加入10％s-9混合液0.5ml（含s-95μl）］，再混勻，迅速傾入底層培養基上，轉動平皿使頂層培養基均勻分布在底層上，平放固化，37℃培養48h觀察結果。每個劑量平行做了3皿，并重復一次，最后以3皿平均值報告實驗結果。

1.3.2小鼠骨髓細胞微核實驗昆明種小白鼠，體重25～30g，共50只，在本實驗室適應環境7天后，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半。高劑量組劑量為10g/kgbw；中劑量組為5g/kgBw；低劑量組為2.5g/kgbw；陰性對照組經口灌胃蒸餾水；陽性對照組灌胃給予環磷酰胺，劑量為40.0mg/kgbw。按20ml/kgbw灌胃容積進行灌胃。采用30h給受試物法，即二次給受試物間隔24h，第二次給受試物后6h頸椎脫臼處死小鼠，取股骨，常規制片。顯微鏡雙盲法閱片，每只小鼠觀察1000個嗜多染紅細胞（PCE），記錄有微核的嗜多染紅細胞數，計算出微核率。每只動物計數200個嗜多染紅細胞，觀察嗜多染紅細胞與成熟紅細胞比值。

1.3.3小鼠精子畸形實驗昆明種小白鼠25只，體重25～30g；隨機分成5組，每組5只。設3個劑量組，劑量設計同小鼠骨髓微核實驗，即高劑量組為10g/kgbw，中劑量組為5g/kgbw，低劑量組為2.5g/kgbw。陰性對照組給予蒸餾水，陽性對照組給予環磷酰胺，劑量為40mg/kgbw。所有各組均按20ml/kgbw容積灌胃，每日1次，連續5天。各組動物均于首次投入檢樣后35天處死。按常規方法制片，固定，2％伊紅溶液染色，每只小鼠鏡檢1000個完整精子，計算畸形率。

2結果

2.1鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗（Ames實驗）圣安泰牌百力康片二次Ames實驗結果見表1和表2。

表1圣安泰牌百力康片第一次Ames實驗結果(x±s)

注：以上結果為3皿回變菌落數的平均值

表2圣安泰牌百力康片第二次Ames實驗結果（x±s）

注：以上結果為3皿回變菌落數的平均值

實驗結果表明，受檢樣品對Ames各實驗菌株在加與不加活化系統條件下均呈陰性結果，即鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實驗為突變陰性結果。

2.2小鼠骨髓細胞微核實驗圣安泰牌百力康片的小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗結果見表3。

表3圣安泰牌百力康片小鼠骨髓細胞微核實驗結果

注：與陰性對照組相比**P<0.01

對實驗結果進行泊松分布檢驗，結果兩個性別小鼠除陽性對照組外，各劑量組微核率與陰性對照組相比均無統計學差異（P>0.05），亦無劑量效應關系，說明受試物小鼠骨髓細胞微核實驗為陰性結果。此外，各組動物PCE/RBC值經方差分析差異無顯著性，說明各組動物均未見到細胞毒性作用。

2.3小鼠精子畸形實驗圣安泰牌百力康片的小鼠精子畸形實驗結果見表4。

表4圣安泰牌百力康片對小鼠精子畸形發生率的影響

注：與陰性對照組相比**P<0.01

從表4可見，各組小鼠均可見到一定數量的畸形精子，除陽性對照組外各實驗組小鼠的精子畸形與陰性對照組相比，均沒有超過2倍，且無劑量效應關系，亦無統計學意義，說明受試物對小鼠精子畸形發生率無影響。

3討論

復方生物黃酮的主要來源為枸杞、銀杏葉和黃芪。研究證實這幾種成分未見致突變毒性結果。枸杞的Ames實驗（TA97、TA98、TA100、TA1024個菌株）結果為無論加S9與不加S9回變菌落數均未超過空白對照的兩倍。雌性和雄性動物的微核率分別為1.6‰與1.2‰，與陰性對照組微核率相比，差異不顯著。小鼠精子畸形實驗精子畸形率均在正常范圍內，與陰性對照組精子畸形率相比，差異無統計學意義［6］。對銀杏葉的遺傳毒性實驗研究也未見致突變作用［7］，目前尚未見黃芪的突變性研究。本文在急性毒性實驗的基礎上進行了復方生物黃酮的Ames實驗、小鼠精子畸形實驗和小鼠精子畸形實驗，結果表明復方生物黃酮對Ames各實驗菌株在加與不加活化系統條件下均呈陰性結果。各劑量組微核率與陰性對照組相比均無統計學差異（P>0.05），亦無劑量效應關系，說明受試物小鼠骨髓細胞微核實驗為陰性結果。各組小鼠均可見到一定數量的畸形精子，除陽性對照組外，各實驗組小鼠的精子畸形與陰性對照組相比，均沒有超過2倍，且無劑量效應關系，亦無統計學意義，說明受試物對小鼠精子畸形發生率無影響?？傊狙芯拷Y果說明實驗劑量的復方生物黃酮沒有致突變性。

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