超聲波提取馬鞭草總黃酮研究論文

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【摘要】目的為充分利用馬鞭草植物資源，避免資源的浪費，探討馬鞭草總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從馬鞭草中提取黃酮類物質，對所提取的黃酮類物質進行驗證，并用分光光度法測定含量。結果測得樣品中總黃酮的含量C=0.2028mg/ml，回收率為101.4%，其純度和產率均較高。結論該方法采用全物理過程，無任何污染，是提取馬鞭草黃酮類物質的有效途徑。

【關鍵詞】超聲波提取馬鞭草總黃酮鑒別

TheTotalFlavanoneofHerbaVerbenaeExtractionandtheIdentificationbyUltrasonicWave

Abstract：ObjectiveTomakeuseoftheresourcesofherbaverbenae,avoidwastingandapproachtheextractionoftotalflavanoneofherbaverbenae.MethodsTheflavonoidswereextractedbyethanolasthesolventfromHerbaVerbenaewithultrasonicwaveandethanolextraction.UsingspectrophotometrytoextractandchecktheflavanoneofHerbaVerbenae.ResultsThedensityofthetotalflavanoneofherbaverbenaewasC=0.2028mg/mlandtherateofrecoverywas101.4%.Ttheoutcomeandthepurityoftheflavanonewereallveryhigh.ConclusionThismethodisapurelyphysicalprocessandhasnotanypollution.ItisanidealwaytoextracttheflavanoneofHerbaVerbenae.

Keywords：Ultrasonicwavetreatment；Herbaverbenae；Totalflavanone；Identification

馬鞭草Herbaverbenae始載于《名醫別錄》，為馬鞭草科植物馬鞭草VerbenaoficinalisL．的全草，廣泛分布于我國中南、西南及山西、甘肅、新疆、江蘇和浙江等地［1］。馬鞭草性苦、辛，微寒，具有清熱解毒、活血通經、利水消腫、截瘧的功效，用于感冒發熱、黃疸、痢疾、痛經、水腫、瘧疾、跌打損傷等［1］。其主治癥瘕積聚、經閉痛經、瘧疾、喉痹、癰腫、水腫、熱淋等癥，可用于治療瘧疾、白喉、傳染性肝炎、流行性感冒、絲蟲病、咳嗽等［2］。馬鞭草亦可利尿，止血，促進泌尿系統結石的排出，減少黏膜出血，緩解疼痛，配合其它常用利水通淋化石的中藥，臨床常獲良效［3］。除此之外，其外用可治療痔瘡、關節痛、跌打損傷、水疝等［4，5］。馬鞭草含有鞭草苷、5二氫馬鞭草苷、桃葉珊瑚苷、熊果酸、3α，24二羥基齊墩果酸、十六酸、β谷甾醇、羽扇豆醇、蒿黃素、β胡蘿卜素等化學成分［2］。由于其在臨床應用中有明顯的療效，近年又發現有新的藥理活性，現代研究又發現馬鞭草醇提取物具有抗生育、抗癌作用［1］。因此馬鞭草中的化學成分及藥效物質引起了新的關注。馬鞭草由于臨床應用無毒副作用，前景具有潛在優勢，對其研究受到重視。

近年來，超聲技術應用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質、動物組織漿的毒質等研究已有報道［6，7］，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。很多研究表明，利用超聲波產生的強烈振動、高的加速度、強烈的空化效應、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時間，并且還可避免高溫對提取成分的影響［7］。但超聲技術應用于提取馬鞭草中黃酮類物質的研究尚未見報道，本文報道用超聲波提取馬鞭草總黃酮及鑒別。

1儀器與試劑

1.1儀器KQ5200DB型數控超聲波清洗器（超聲工作頻率40kHz、昆山市超聲儀器有限公司）；UV755B紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）；ZFI型三用紫外分析儀(上海顧村光電儀器廠)；SHBIII循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）。

1.2試劑95%乙醇；亞硝酸鈉AR；硝酸鋁AR；氫氧化鈉AR；三氯化鋁AR；鹽酸AR；氨水AR；乙酸鎂AR；鎂粉AR；正丁醇AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；新鮮馬鞭草購自廣西百色市人民菜市。

2方法與結果

2.1總黃酮成分提取取新鮮馬鞭草，烘干，粉碎。稱取馬鞭草粉末約6g，加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾。濾渣再加80ml95%乙醇，超聲波提取2.5h，抽濾，合并兩次濾液，減壓回收乙醇至濾液僅剩25ml左右為止，放置250ml容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，得樣品液。

2.2測定方法依據以蘆丁為對照品測定馬鞭草中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適宜pH值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡合物，在可見光區能獲得穩定的特征吸收峰。

2.3定量實驗-總黃酮的含量測定

2.3.1波長的選擇

取樣品液適量，在0.30ml5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下，經硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液在420～700nm波長范圍測定絡合物的吸光度，絡合物于510nm波長處有最大吸收，故測定時選用此波長。

2.3.2標準曲線的繪制

分別精密吸取蘆丁對照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.30ml，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.00ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min，以試劑作空白參比液，于510nm處測吸光度。結果見表1。表1紫外可見分光光度計測定蘆丁對照液吸光度（略）

根據上表得回歸方程：A=-0.03110+13.52C，r=0.9999。

2.3.3提取物含量的測定精密吸取樣品液0.50ml，置10ml容量瓶，按標準曲線的制備方法測定吸光度A=0.106，根據回歸方程：A=-0.03110+13.52C，計算樣品中總黃酮的含量C=0.2028mg/ml。

2.3.4回收實驗精密量取樣品液2.00ml，加入標準蘆丁對照品2.00ml（0.10mg/ml），同前樣品測定方法操作測定吸光度，求出回收率為101.4%。

2.4定性實驗-總黃酮的鑒別

2.4.1顏色反應

紫外光下呈色反應：取該樣品溶液點在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈灰褐色并有熒光斑點。

濃氨水反應：取該樣品溶液點在濾紙上，將濾紙在氨水上方熏30s，立即在紫外光下觀察，呈極明顯的黃褐色熒光斑點。

三氯化鋁反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1％三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，在紫外光下呈黃色熒光斑點。

乙酸鎂反應：取樣品溶液點在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黃色斑點。

鹽酸-鎂粉反應：取乙醇提取液1ml于試管中加鎂粉，再加入濃鹽酸數滴（一次加入），在泡沫處呈紫紅色。

2.4.2紙層析取樣品溶液10μl點在濾紙上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（體積比）為展開劑，上行展開5h，取出晾干。噴1%氯化鋁乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可見熒光斑點。

3討論

3.1實驗結果表明，本實驗方法工藝簡單，回收率為101.4%，提取效率高于傳統方法，利用本文所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質其純度較高。超聲波可以強化乙醇浸提法，達到省時、高效、節能的目的，此方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取黃酮類物質的途徑，具有廣闊的應用前景。

3.2黃酮類化合物是一大類天然產物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分，具有很高的藥用價值。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等［8］。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細胞的功能。

黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、消心腦血管疾病、抗炎鎮痛、調節免疫力、降血糖、治療骨質疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用［9～14］。近年來，世界上掀起了植物藥開發的熱潮，植物藥以其天然低毒的特點倍受青睞，而黃酮類化合物以其廣譜的藥理作用引人矚目。本文實驗結果表明，馬鞭草中含有較為豐富的黃酮。因此，馬鞭草具有廣泛開發和利用價值，值得綜合利用，加強資源開發。

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