土壤滅菌方法范文

導語：如何才能寫好一篇土壤滅菌方法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

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關鍵詞 腐霉利；微生物；降解

中圖分類號 X503 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2012）22-0209-02

腐霉利（procymidone）又名速克靈、殺霉利、二甲菌核利，屬于低毒性殺菌劑，主要是抑制菌體內甘油三酯的合成，具有保護和治療的雙重作用。適用于果樹、蔬菜、花卉等菌核病、灰霉病、黑星病、褐腐病、大斑病的防治[1-2]。它作為高效殺菌劑被廣泛使用的同時，殘留問題也日益突出。為了評估其對土壤環境的危害，了解其在土壤中的降解速率以及與土壤微生物間的相互關系，選擇廈門市具有代表性的土壤作為供試土壤，在實驗室控制其他因素的條件下，開展腐霉利在滅菌及不滅菌土壤中的降解研究。

進入土壤中的農藥主要來自直接施用或葉面噴施，為了評估其對環境的危害，了解其在土壤中的降解規律是非常重要的。農藥在土壤中同時存在生物和非生物2種類型的降解和轉化[3]。影響其降解速率的因素有土壤特性、溫度、濕度及農藥特性等[4]。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗儀器。Agilent-7890N型氣相色譜儀（美國安捷倫公司）、恒溫振蕩器（國華企業）旋渦混合器（上海琪特分析儀器有限公司）、氮吹儀（廣州智真生物科技有限公司）、美國centurion K220型多功能高速離心機等常用實驗儀器。

1.1.2 試驗試劑。弗羅里矽柱（1 000 mg/6 mL，安捷倫公司）、腐霉利標準品（農業部環境保護科研監測所）。乙腈、甲醇、丙酮、正己烷為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.1.3 供試土壤樣品的采集、處理和性質。采集廈門市具有代表性的無腐霉利殘留的土壤。將耕層（0～20 cm）土壤樣品研碎，風干過2 mm篩后備用。

1.2 腐霉利在土壤中的降解試驗

1.2.1 土壤的活化培養。試驗前將土樣分別置于搪瓷盆中，含水量添加到土壤飽和持水量的60%，用薄膜覆蓋盆口，放在25 ℃恒溫培養箱中進行微生物活化培養1周。

1.2.2 試驗設計。設4個處理，分別為添加腐霉利滅菌土、空白滅菌土、添加腐霉利未滅菌土、空白未滅菌土。每個處理3次重復，處理土樣置于25 ℃培養箱中恒溫培養。土壤中腐霉利的添加濃度為4 mg/kg。添加農藥后1、3、5、8、14、21、28、42、56 d采樣測定腐霉利殘留量及土壤含水量。

1.3 腐霉利殘留分析方法

1.3.1 樣品處理[5-6]。稱取勻漿試樣5.0 g，加入乙腈25.0 mL，旋渦混勻后，在恒溫振蕩器上振蕩提取30 min。高速離心（8 000 r/min）5 min后，取乙腈5.0 mL提取液于離心管，緩緩通入氮氣，將乙腈吹近干，加入正己烷2.0 mL溶解殘留，待凈化。

將弗羅里矽柱用丙酮5.0 mL+正己烷（10+90）、正己烷5.0 mL預淋洗，條件化，當溶劑液面到達柱吸附表面時，立即加入上述待凈化液，用15.0 mL離心管收集洗脫液，再用丙酮5.0 mL+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，重復1次。把收集液的離心管置于氮吹儀，水浴溫度50 ℃，氮吹蒸發至近干，用正己烷定容到合適的濃度，在混合器中混勻后，待測。

1.3.2 色譜條件。色譜柱：100%聚甲基硅氧柱（DB-1MS）30 m×250 μm×0.25 μm；柱溫：80 ℃（保持1 min） 230 ℃（保持1 min） 270 ℃（保持10 min）；進樣口及溫度：毛細管進樣口，240 ℃；檢測器及溫度：u-ECD，320 ℃；分流模式：不分流；進樣量1 μL；載氣：高純氮氣1.2 mL/min，恒流；尾吹：高純氮氣60.0 mL/min。

1.4 方法的準確度、精密度與最低檢測濃度

取空白土樣5.0 g，分別添加質量濃度為0.10、0.50、1.00 mg/kg腐霉利，按照上述方法對待測樣品進行處理和測定，每個處理有3個平行，計算加標回收率，結果見表1?？煽闯觯翗又懈估訕嘶厥章蕿?8.3％～91.1％，RSD值為2.2％～3.9％。該方法土壤中腐霉利的測定下限為0.01 mg/kg。表明該分析方法符合農藥殘留試驗的要求。

2 結果與分析

（1）空白滅菌與未滅菌土壤都未檢出氯氰菊酯殘留。

（2）在試驗過程中，添加腐霉利后經過一段時間的培養，按不同的時間間隔取樣分析。結果表明，無論滅菌與否，隨著培養時間的延長，添加到土壤中的腐霉利含量均逐漸降低，兩者之間具有一定的相關性，這和胡瑞蘭等的研究結果是一致的[7]（表2、圖1、）。施藥56 d后，腐霉利在滅菌土和未滅菌土中的降解率均達到90％以上，表明腐霉利在土壤中的消解速度較快，屬易消解農藥。

（3）添加試驗中，土壤中腐霉利的殘留量與腐霉利施用后的取樣時間之間呈較明顯的負指數函數關系，可以用一級化學反應動力學方程式來擬合試驗數據[5，7-8]（圖1）。按照動力學一級方程式計算半衰期（T1/2）。Y（滅菌土）=3.516 3exp（-0.049 1）x（R2=0.987 4），T1/2=14.1 d。Y（未滅菌土）=2.682 8exp（-0.073 7）x（R2=0.970 3），T1/2=9.4 d。滅菌土壤中腐霉利降解速率要小于未滅菌土壤（表2），未滅菌土中腐霉利的降解半衰期低于滅菌土的半衰期（圖1、2）。土壤滅菌處理，主要殺滅了土壤中的微生物，也就是說，腐霉利在有微生物存在的土壤中降解較快，說明腐霉利在土壤中的降解過程，微生物參與的生物降解起了很大作用。

3 結論與討論

(1）建立了一套用于測定腐霉利在土壤中的殘留量的氣相色譜分析方法，乙腈溶劑超聲提取，固相萃取凈化，操作簡便快捷，且節省溶劑和時間，添加回收率、精密度及最低檢測濃度試驗結果均符合農藥殘留分析的要求。

（2）腐霉利在土壤中的降解動態規律符合一級動力學模型。無論滅菌與否，隨著培養時間的延長，添加到土壤中的腐霉利含量均逐漸降低，兩者之間具有一定的相關性。微生物參與的生物降解有利于腐霉利在土壤中的降解。

4 參考文獻

[1] 農業部農藥檢定所.農藥殘留量實用檢測方法手冊：第3卷[M].北京：中國農業出版社，2005.

[2] 沃解明.新型農用殺菌劑—腐霉利[J].上海化工，2000，22（2）：5-7.

[3] 喬雄梧.農藥在土壤中的環境行為[J].農藥科學與管理，1999（S1）：12-16.

[4] 薛琦.土壤微生物和農藥[J].農藥譯叢，1994，16（4）：51-54.

[5] 樊曉青，陸貽通，汪傳炳.腐霉利在生萊和土壤中的殘留動態研究[J].上海交通大學學報，2007，25（6）：570-573.

[6] 農業部環境質量監督檢驗測試中心（天津），農業部環境保護科研監測所.NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定[S].北京：中國標準出版社，2007.

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【關鍵詞】復合微生物肥料；虹源；苦瓜栽培；施肥效應

當前的蔬菜種植多采用化肥施肥為主的速效功利性種植，為求早上市，見產量，品質要求難以兼容，對土壤的掠奪性種植導致地力失調，造成土壤酸化、板結，病蟲害發生泛濫，當前通過增加土壤有機質，利用特定功能微生物促進土壤有機質和養分的釋放與分解，使得益生菌群落占據優勢地位，達到改善土壤理性，調節土壤酸堿度，降低土壤病害發生的危害是農業技術人員重點研究和推廣的土壤改良及施肥方法，研究和推廣優質復合微生物肥料是其中方式之一。復合微生物肥料是運用特定微生物與營養物質復合而成，能提供、保持或改善植物營養，是一種提高農產品產量或改善農產品品質的活體微生物制品（國家農業部門關于復合微生物肥料標準的釋義），博羅縣農技部門通過運用復合微生物肥料開展蔬菜生產試驗，獲得復合微生物肥料的田間使用數據，為大面積引進和推廣復合微生物肥料提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試肥料：山東省魯西化工集團股份有限公司生產的“魯西”牌尿素（46%）；深圳市芭田生態工程股份有限公司生產的“芭田”牌復合肥（氮∶磷∶鉀=15∶15∶15）；中山市祥源環保有限公司生產的“虹源”牌復合微生物肥[登記證號：微生物肥（2012）臨字（1559）號]（總養分≥6% ，有效活菌總數≥5千萬/g）。

供試苦瓜品種：廣州市農業科學研究院研育的“碧豐2號”豐產型油青苦瓜

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗處理

本試驗設4個處理，各處理施肥量見表1。

T1：空白試驗

T2：常規施肥（CK對照）

T3：復合微生物肥（N、P、K總養分≥6%），滅菌后的生物肥；膨大期少量補充復合肥（補充P、K養分）

T4：復合微生物肥（N，P，K總養分≥6%）；膨大期少量補充復合肥（補充P，K養分）

1.2.2 試驗地與田間設計

試驗地屬砂壤土，肥力中等，地力均勻，排灌方便，前茬作物菜心。試驗地設計采取隨機區組排列，三次重復，小區面積20m2，區內設置兩畦一溝，畦長10m，雙畦加溝寬2m（即單畦寬80cm，溝寬40cm），本試驗采用棚架（平棚）疏植栽培方式，搭架雙行對向“品”字型栽培。種植規格株行距120cm×150cm，小區植株16株，小區四周設置保護行。

1.2.3 栽培管理

2月6日大棚育苗，注意防寒管理。2月15日瓜苗兩葉一心移栽前第一次施肥，薄施0.1%比例水肥；2月16日整地起畦，第二次施肥為均勻撒施基肥，耙平畦面，劃分小區，下午移植定苗，淋足定根水；2月24日幼苗開始抽蔓時進行第三次撒施追肥；3月6日搭架引蔓初花后進行第四次撒施追肥；3月18日盛花期（不同處理存在差異，見表二）進行第五次撒施覆土追肥；4月3日進行統一采收，以后每采收兩次（10d左右）按第六次施肥量進行追肥（每次施肥量見表一）；5月17日統一清園結束生產。全生育期進行水分管理和病蟲害防治等常規管理，及時采收商品瓜。

2 結果與分析

2.1 田間表格及調查數據

注：根據采購價格，采用與化肥成本約相等的復合微生物肥料進行施肥，以相同的投入成本來進行對比試驗。復合肥價格約為復合微生物肥料的3.5倍，尿素價格稍高于復合微生物肥料，可視作為與其價格相等，但仍具有有力的說服力。

2.2 產量結果分析

參加本次試驗的苦瓜處理T1空白試驗折畝產1470.7kg（空白仍具一定產量，為前作之后，土中仍殘留一定底肥，而該品種苦瓜屬豐產型品種，根系吸收能力較強），較對照處理T2減產1971.0kg，減產57.3%，減產達到極顯著水平，在本實驗中產量排名第四；處理T3（滅菌后的復合微生物肥料試驗）折畝產3545.1kg，較對照處理常規施肥增產103.4kg，增產率3.0%，增產未達到顯著水平，本實驗中產量排名第二；處理四（復合微生物肥料試驗）折畝產4355.5kg，較對照處理T2畝增產913.8kg，增產率26.6%，增產達到極顯著水平，比處理T3（滅菌后的復合微生物肥料試驗）增產810.4kg，增產率22.9%，增產達到極顯著水平，產量在本實驗中排名第一。

3 結論

本次肥料試驗旨在試驗“虹源”牌復合微生物肥料的肥效和對苦瓜產量、品質及抗性的影響，從田間調查表表3可以看出其對苦瓜的生長勢和田間抗性影響效果不明顯，但根據表4總產量及方差分析表明滅菌前復合微生物肥料增產效果達到顯著水品，與滅菌后產量對比，增產亦達到明顯效果，得出結論：“虹源”牌復合微生物肥料在本地區對苦瓜的產量有明顯的增產效應，復合微生物肥料中的微生物有效促進土壤肥份分解釋放，加強吸收，對苦瓜的產量上升和質量改善有著顯著的促進作用。

參考文獻

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關鍵詞 土壤微生物 分解作用 涂布平板法

中圖分類號 G633.91 文獻標識碼 B

“土壤微生物的分解作用”是人教版高中生物必修內容中的探究實驗之一，旨在讓學生通過宏觀的實驗現象了解微觀的實驗原理，明白微生物在生態系統物質循環中的重要作用。然而由于實驗周期長，實驗現象較不明顯，開展該實驗的學校寥寥無幾。

1 教材分析與實驗條件選擇

在人教版“土壤微生物分解作用”的實驗中，教材提出了2個參考案例。第一個案例，使用落葉為實驗對象，設置滅菌土壤為對照組，對比得出土壤微生物具有分解作用;第二個案例：使用淀粉為實驗對象，通過斐林試劑和碘液的顯色反應，得出土壤微生物具有分解作用。對比發現，第二個案例實驗時間適中，實驗現象較為明顯;同時復習了斐林試劑的使用方法，較適合開展實驗教學。因此，筆者選用第二個案例（土壤微生物對淀粉的分解作用），對“土壤微生物的分解作用”進行實驗研究。

溫度、淀粉糊濃度和反應時間是影響土壤微生物分解作用的主要因素。筆者選取了15°C、20°C、25°C、30°C和室溫等5個溫度，2%、4%、6%和8%等4個淀粉糊濃度以及5 d、7 d和9 d等3個反應時間，探究它們對土壤微生物分解作用的影響。

特定土壤的pH是確定值，而pH的變化會影響土壤微生物的分解作用。在確定適宜的溫度、淀粉糊濃度和反應時間之后，以pH為變量，繼續探究pH對土壤微生物分解作用的影響。

為了使實驗結果更具科學性，需要設置對照組。筆者在教材的基礎上增加了滅菌土壤浸出液作為第二對照組，排除了土壤浸出液中其他非生物因素的干擾，增加了實驗的嚴謹性。

在教學研究中，有學者使用不同種類的土壤進行實驗，以確定哪種土壤微生物的分解能力最強。土壤微生物分解能力的強弱，主要受微生物種類和數量的影響。因此，為了揭示土壤微生物數量對分解作用的影響，筆者根據《微生物實驗》的相關內容，采用涂布平板法，對實驗的土壤微生物進行計數，初步確定土壤微生物的分解能力。

綜上所述，“土壤微生物的分解作用”實驗可劃分為三個小實驗，分別是：（1） 土壤微生物對淀粉分解作用實驗;（2） pH對土壤微生物分解作用的影響實驗;（3） 土壤微生物計數實驗。其中第一個小實驗為主實驗，第二、第三個小實驗為擴展實驗。

2 實驗設計

2.1 實驗器材

實驗器具：小燒杯、試管、三角瓶、玻璃棒、pH計、恒溫光照培養箱、牛皮紙、紗布。

材料和試劑：土壤、淀粉、斐林試劑、碘液、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、稀HCl、稀NaOH、無菌水。

2.2 實驗步驟

2.2.1 土壤微生物對淀粉的分解作用

（1） 土壤浸出液的制備：按照課本介紹的方法制備。

（2） 淀粉糊的制作：分別稱取10 g、20 g、30 g和40 g淀粉，溶于500 mL開水中，充分攪拌，制成糊狀，得到濃度分別為2%、4%、6%和8%的淀粉糊。

（3） 滅菌：將蒸餾水、部分土壤浸出液、各濃度淀粉糊、實驗所用的燒杯和試管等器皿放入滅菌鍋中滅菌。

（4） 加樣培養：按照課本介紹的方法，在無菌環境中操作加樣，并將實驗溶液分別放入15°C、20°C、25°C和30°C的培養箱及室溫中培養

（5） 顯色反應：按照課本介紹的方法取出實驗溶液進行顯色反應。

2.2.2 pH對土壤微生物分解作用的影響

（1） 土壤浸出液pH的測定和調節：使用北京哈納HI8424NEW型pH計測出土壤浸出液的原始pH值為8.12;使用稀HCl和稀NaOH溶液，將土壤浸出液的pH上下各調節1.5和3.0個pH單位，選擇5.12、6.62、8.12、9.62和11.12等5個pH作為實驗pH。

（2） 制作淀粉糊、滅菌、加樣、培養與顯色反應操作同2.2.1。

2.2.3 土壤微生物的計數（涂布平板法）

計數實驗包括配制細菌培養基、倒平板、制備土壤稀釋液、涂布和培養等五個步驟，具體操作同《微生物實驗》教材。

3 實驗結果

3.1 土壤微生物對淀粉的分解作用

實驗結果表明，土壤微生物對淀粉的分解作用與溫度、淀粉糊濃度和分解作用的時間有關。30°C下，土壤微生物的分解作用最強烈，室溫（25°C～30°C）下次之，25°C、20°C和15°C下的分解作用依次減弱。土壤微生物對4%淀粉糊的分解作用最強，其次是2%、6%和8%。隨著時間的推移，土壤微生物對淀粉的分解作用逐漸增強;培養的第5 d，已有顯色現象;第7 d顯色現象顯著;第9 d和第7 d的實驗現象相差無幾。從顯色劑的顯色效果看，加入斐林試劑的實驗現象更直觀明顯。淀粉被分解后，產生的葡萄糖與斐林試劑作用，生成很明顯的磚紅色沉淀;加入碘液后，實驗溶液依舊變藍，只是顏色較對照組淺。這說明，一方面斐林試劑的顯色效果較顯著;另一方面，短時間里淀粉不能被分解殆盡。

3.2 pH對土壤微生物分解作用的影響

pH為8.12的原始土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果最明顯，出現最多的磚紅色沉淀;弱酸（pH6.62）和弱堿（pH9.62）性的土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果出現較多的磚紅色沉淀，但均少于原始pH的土壤浸出液;強堿性（pH11.12）的土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果產生較少的磚紅色沉淀;強酸性（pH5.12）的土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果產生最少的磚紅色沉淀。碘液的顯色反應結果并沒有明顯的差別，說明只有部分淀粉被分解。

3.3 土壤微生物的計數

涂布平板結果顯示，土壤浸出液中微生物的含量約為668 889個/mL;根據之前的實驗步驟得知，實驗土壤浸出液濃度為0.1 g/mL，因此土壤中微生物的含量約為6 688 890個/g（表1）。有教學條件的學校可設計該實驗，分析不同土壤微生物具有不同分解作用的原因，讓學生更深入地理解和掌握知識，培養學生的科學素養和探究精神。

4 討論

“土壤微生物的分解作用”實驗中，材料易得，操作簡單，可以在教學活動中順利實施。許多學校由于實驗時間較長，影響教學安排，而很少開展這一探究活動。但筆者發現，該實驗不但可以在短時間內完成，而且能開發出與之相關的教學實驗，如pH對土壤微生物分解作用的影響、土壤微生物計數等，這對學生創新思維的培養大有裨益。如果學校教學條件有限，無法順利開展該實驗，可由教師演示或者播放實驗錄像，以取得一定的教學效果。

在本實驗中，筆者并未以土壤類型為實驗變量，探究不同土壤中微生物分解作用和微生物數量的異同。但學校在安排教學活動時，可以將學生分組，不同小組以不同的土壤為研究對象開展實驗。這樣既節約了時間，又可以達到很好的實驗效果。

本研究確定的適宜實驗條件，可以為廣大師生提供參考。各學校也可以借鑒筆者的思路，開展類似實驗，并安排不同學生完成不同條件下的實驗，最后匯總結果，探討比較。這不僅能幫助學生培養團隊合作精神和創新實踐能力，也能激發學生對生物學實驗的熱情，進一步培養學生對生物學科的興趣。

參考文獻：

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關鍵詞：克菌丹；蘋果；農藥殘留；氣相色譜分析

中圖分類號：TQ457.2+5 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）05-0951-02

DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2017.05.041

Degradation Dynamics and Residues of Captan 80% WG in Apple and Soil

GE Qian， LI Zhen-yong， NIU Yan， GOU Chun-lin

（Quality Standards and Testing Institute of Agricultural Technology， Yinchuan 750001， China）

Abstract： The dynamic degradation and final residues were tested in 3 sites during 2 years，to study the degradation of captan 80% WG in apple and soil. The captan residues in apple and soil were determined by GC. The results showed that the degradation rate of captan in apple and soil in the dynamic tests was fast，and all accorded with the first-order dynamics equation. The half-lives of captan in apples and soil were 7.3～12.6 d and 9.8～17.8 d respectively，the final captan residues were all less than the maximum residue limit of 15 mg/kg. In apple planting， it should be safe and reliable to apply captan （80% WG，800×，a. i. 4 000 mg/kg） with the recommended dose 3 times at most.

Key words： captan； apple； pesticide residue； gas chromatography

克菌丹是一種保護性殺菌劑，有一定的保護作用和光譜治療作用[1]，化學名稱為N-三氯-甲硫基-1，2，3，6-四氫苯鄰二甲酰亞胺，主要用于防治白粉病等，可與大多數常規農藥混合使用[2]?？司こＳ玫臏y定方法主要有氣相色譜-質聯用法[3]、液相色譜分析法[4]、薄層色譜法[5]和氣相色譜分析法[6，7]。

試驗選擇寧夏、安徽和北京3地，進行了80%克菌丹水分散粒劑在蘋果和土壤上的殘留試驗，為評價80%克菌丹水分散粒劑在蘋果上使用后的環境安全性，為農藥的合理使用準則和農藥最大殘留限量標準的制定提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

試驗作物：富士蘋果。

供試試劑：克菌丹標準品，純度98.5%（德國DR公司）；乙腈、正己烷、丙酮、氯化鈉（分析純，將氯化鈉于140 ℃烘箱中烘烤4 h）。

試驗設備：16型B普蕾噴霧器；Agilent 6890N型氣相色譜儀（ECD檢測器）；RE-301型旋轉蒸發儀；TG20-WS型臺式高速離心機；XH-D型上海比朗旋渦混合器；Vitamix 6300型破壁調理料理機。

1.2 方法

1.2.1 儀器條件 色譜柱DB-35MS色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），載氣N2，加熱器300 ℃，壓力189.0 kPa，總流量105 mL/min，流量3.6 mL/min，平均線速度62 cm/s，柱箱溫度60～280 ℃，尾吹氮氣流量55 mL/min，進樣量1.0 μL。

1.2.2 動態殘留試驗 蘋果：消解動態試驗設3個重復，處理間應設置保護隔離區。選無農藥污染處為清水空白對照。施藥劑量為200倍稀釋（制劑用量），分別施藥2 h和1、2、3、5、7、10、14、21、30、45 d后采集蘋果樣品。每個處理重復3次。

土壤：以制劑用量2.0 g/m2施藥，對單獨選擇的30 m2的地塊進行施藥。分別在施藥后2 h和1、2、3、5、7、10、14、21、30、45 d采樣。每個處理重復3次。

1.2.3 最終殘留試驗 設低劑量和高劑量。低劑量按800倍稀釋（制劑用量），高劑量按533倍稀釋（制劑用量）。每小區選2棵樹，共低劑量施藥3次、高劑量施藥3次、低劑量施藥4次、高劑量施藥4次4個處理，每個處理重復3次，每次施藥間隔10 d，末次施藥后14、21、28 d采集蘋果及土壤樣品。

1.2.4 檢測方法 將樣品于破壁調理料理機中勻漿后稱取10.00 g，放入50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，振蕩器中振蕩1 h，加入已高溫烘干的5 g氯化鈉。振搖1 min后，4 000 r/min離心3 min，取5.0 mL上清液于饉跗恐校旋轉蒸發近干后，用5 mL丙酮-正己烷（體積比1∶9）預淋洗弗羅里硅柱層析柱中，用12.0 mL丙酮-正己烷（體積比1∶9）分4次洗脫，每次3.0 mL，洗脫并收集濃縮瓶中的克菌丹提取液。最后將收集液于35 ℃，旋轉蒸發至干，2.5 mL正己烷定容，待測。

2 結果與分析

2.1 蘋果中克菌丹消解動態

2013年克菌丹在安徽、北京、寧夏3地中蘋果的半衰期分別為10.8、8.5、8.5 d，原始沉積量C0分別為5.0、2.7、4.4 mg/kg；2014年克菌丹在安徽、北京、寧夏蘋果中的半衰期分別為7.3、12.2、12.6 d，原始沉積量C0分別為4.7、7.6、3.5 mg/kg。2年3地施藥10 d后，3地消解率均達到50%，施藥21 d后消解率達到78%～92%。根據《GB 2763-2014》（食品中農藥最大殘留限量）規定，蘋果中克菌丹MRL值為15 mg/kg，由以上結果可知，克菌丹在蘋果上降解速率較快，且克菌丹殘留量均低于最大殘留限量15 mg/kg，其結果見圖1、表1。

2.2 土壤中克菌丹消解動態

2013年克菌丹在安徽、北京、寧夏土壤中的半衰期分別為17.8、11.6、16.9 d，原始沉積量分別為5.0、4.7、3.3 mg/kg；2014年克菌丹在安徽、北京、寧夏土壤中的半衰期分別為9.8、12.6、13.4 d，原始沉積量分別為6.7、4.5、4.7 mg/kg；2年3地施藥10 d后，3地消解率均達到50%，施藥35 d后消解率達到77%～96%。由此可知，克菌丹在土壤中降解速率較快，其結果見表2、圖2。

2.3 克菌丹在蘋果和土壤中的最終殘留量

2013-2014年在寧夏回族自治區銀川市、安徽省宿州市和北京市2年3地殘留試驗結果（表3），80%克菌丹水分散粒劑，用藥量533～800倍液（制劑用量），分3次和4次施藥，間隔期為10 d。施藥后間隔14、21、28 d采樣，蘋果中克菌丹的殘留量分別為0.70～5.0 mg/kg、0.17～2.9 mg/kg、

3 結論

根據GB 2763-2014，克菌丹在蘋果中最大殘留限量值（MRL）15 mg/kg。由上述結果可知，克菌丹在蘋果和土壤中降解動態符合一級動力學模型。在所有蘋果和土壤樣品中，克菌丹殘留量均小于最大殘留限量值，且相對于蘋果生長周期，克菌丹降解速率較快。在蘋果種植中，以推薦劑量800倍稀釋（有效成分4 000 mg/kg），最多施藥3次，使用該農藥對蘋果及土壤環境安全可信。

參考文獻：

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[2] 李友順，范騰飛，馬 超，等.80%克菌丹分散粒劑高效液相色譜分析[J].農藥，2010（3）：184-185.

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[5] 周艷明，關 麗，牛 森，等.氣相色譜法測定蔬菜中克菌丹、滅菌丹、敵菌丹殘留量的研究[J].食品科學，2009（12）：187-189.

篇5

關鍵詞木霉;黃瓜枯萎病菌;生防

木霉(Trichodermaspp.)屬真菌界、雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科、真菌屬,是迄今為止研究和應用最多的一類生防菌[1]。木霉的生防機制復雜,主要包括競爭、重寄生、抗生、溶菌等[2]。研究木霉對病原菌的作用機制及防治效果,可以優選木霉菌株,從而提高生防效率。

1材料與方法

1.1試驗材料

以病株上分離的黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)為拮抗對象,土壤中分離的木霉菌株為拮抗菌。

1.2試驗方法

1.2.1競爭作用。采用對峙培養法[3],在直徑為9cm的PDA平板一側接種直徑為5mm的病原真菌菌絲塊,在平板另一側接種拮抗菌,28℃共培養,觀察兩菌的生長情況。

1.2.2重寄生作用。在PDA培養基中央放置1塊20mm×20mm無菌蓋玻片,在左側距蓋玻片40mm處接種木霉,右側距蓋玻片20mm處接種黃瓜枯萎病菌,28℃恒溫培養。取下蓋玻片,于顯微鏡下觀察菌絲體的作用方式。

1.2.3抗生作用。在裝有100mLPDB的三角瓶中接入直徑5mm的木霉菌塊,28℃、150rpm培養6d,取濾液離心后過0.22μm細菌濾器。在90mL、45℃的PDA中加入10mL上述濾液,搖勻倒成平板,接種直徑為5mm的黃瓜枯萎病菌菌塊。28℃恒溫培養,觀察生長情況。

1.2.4溶菌作用。將培養4d的木霉發酵液8000rpm離心10min。取15mL上清液倒入培養皿中,接入黃瓜枯萎病菌菌塊。淺層培養5d后觀察生長情況。以高溫滅菌的木霉上清液中培養的病菌菌塊為對照。

1.2.5盆栽試驗。將黃瓜種子經70%乙醇消毒1min,2%NaClO消毒5min,55℃溫水浸15~20min,25℃浸泡2~3h,無菌水沖洗3次,25~30℃下催芽1~2d。將黃瓜枯萎病菌接種到麩皮∶玉米粉為3∶1的培養基中,28℃恒溫箱中培養至長滿整個三角瓶。將催芽基本一致的黃瓜苗在木霉菌懸液(約1×108cfu/mL)中浸1h,取出于滅菌濾紙片上干燥1h后,播種于拌有黃瓜枯萎病菌制劑的土壤中。以無菌水浸種處理為對照。2結果與分析中國編輯。

2.1競爭作用

平皿對峙試驗顯示,木霉生長迅速,可快速占據空間,有很強的生長競爭優勢,能有效抑制黃瓜枯萎病菌的生長。

2.2重寄生作用

顯微鏡下觀察到木霉菌絲體纏繞著黃瓜枯萎菌絲生長,并在病菌菌絲上產生大量分枝,產生寄生作用。

2.3抗生作用

在PDA培養基中加入10%的木霉發酵液后,黃瓜枯萎病菌菌絲生長不旺盛,與對照有顯著的差異。

2.4溶菌作用

在未滅菌的木霉上清液中培養的黃瓜枯萎菌塊,僅有細小菌絲的生長,數量較少;而在滅菌后的上清液中,黃瓜枯萎菌生長旺盛,形成大塊菌絲團。

2.5盆栽防效試驗

盆栽試驗結果表明,與對照相比,木霉浸種處理的黃瓜幼苗死亡率為25.0%,顯著低于對照的66.7%。

3結論與討論

作為安全而環境友好的生防因子,木霉在田間的施用可有效地防治作物病害,從而避免大量使用農藥導致病原菌抗藥性的產生、作物農藥含量超標及環境污染等問題[4-6]。因此,對木霉生防機制深入而全面的研究,將對綠色農業的可持續發展產生重要的推動作用。

4參考文獻

[1]辛雅芬,商金杰,高克詳.拮抗木霉菌的生防機制研究進展[J].東北林業大學學報,2005,33(4):88-91.

[2]HARMANG,HOWELLCR,VITERBOA,etal.Trichodermaspecies-opportunistic,avirulentplantsymbionts[J].Nature,2004(2):43-56.

[3]蒲金基,曾會才.綠色木霉LTR12-1對黃瓜枯萎病菌防治作用機制的初步研究[J].熱帶農業科學,2002,22(4):22-25.

[4]呂天曉,徐鳳花,李世貴,等.生防木霉菌原生質體的制備及再生研究[J].生物技術通報,2009(4):130-134.

篇6

關鍵詞 祁連山 植物根際 放線菌 功能酶

0前言

胞外水解酶諸如淀粉酶、蛋白酶、脂酶等在食品業、飼料添加劑、生物醫學科學及化工工業等行業具有潛在的應用價值。工業生產一般是在特殊的物理化學條件下進行的，而在這個過程中起重要作用的酶制劑需要合適的反應條件才能達到最佳酶活，然而通常情況下這種最佳反應條件很難達到。因此尋找能夠適應特殊環境條件的酶制劑是關鍵。放線菌是一類能夠產生多N生物活性物質的微生物資源，如酶、抗生素、氨基酸、維生素、有機酸、生物堿等均由其產生。

植物根際是指生物和物理特性受到植物根系影響的緊密環繞根部的區域。在植物根際區域內生長的微生物稱為根際微生物。因此，植物根際微生物是一類值得深入研究與開發的微生物資源，從根際微生物的代謝產物中尋找各種生物活性物質是改善工業生產條件的又一重要途徑。

目前，還沒有針對我國祁連山地區藥用植物根際放線菌資源的研究報道，本文采用了稀有放線菌資源選擇性分離方法，對采自祁連山地區不同海拔梯度、不通植被類型的不同藥用植物根系土壤放線菌進行分離，并對所得菌株做了部分生理活性測定，對功能酶產生菌做了篩選。

1 材料與方法

1.1土樣來源及處理

2010年7月下旬從祁連山地區選取7個不同植被類型、不同海拔梯度的樣區，采集到29份代表性植物的根際土，各約100g，分裝于自封袋中，貼上標簽后帶回實驗室，以供分離放線菌之用。土樣概況及藥用植物的藥理功能見表1。

1.2 菌種分離

1.2.1 分離培養基

培養基采用甘油精氨酸瓊脂：精氨酸2.0g；NaCl 50g；甘油 12.5g； FeSO4 7H2O 0.01g；MgSO4 7H2O 0.5g；K2HPO4 1g；CuSO4 5H2O 0.0001g；ZnSO4 7 H2O 0.0001g；MnSO4 H2O 0.0001g蒸餾水1000mL；瓊脂20g；調節pH至8.0以上。

1.2.2 分離方法

稱取3g土樣于120℃干熱處理1h，用27mL6%的酵母提取物溶液和270ul5%的SDS溶液的混合液作為土樣提取液。采用稀釋涂布平板法進行分離。

1.3 代謝產物測定

1.3.1 MR實驗

培養基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，K2HPO4 5g，蒸餾水1000ml。

1.3.2 硫化氫的產生

柴斯納培養基：蛋白胨10g，檸檬酸鐵0.5g，蒸餾水1000ml，pH7.2，121℃滅菌20min。

1.4 功能酶產生菌的篩選

1.4.1 色氨酸酶

培養基：1%胰胨水溶液，調pH7.2～7.6，分裝1/4～1/3試管；115℃滅菌30min。

試劑：對二甲基氨基苯甲醛8g，乙醇（95%）760ml，濃HCl160ml。

1.4.2 過氧化氫酶

試劑：配3%～10%過氧化氫溶液

1.4.3 脲酶

培養基：蛋白胨1g，NaCl5g，葡萄糖1g，KH2PO4 2g，酚紅0.012g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml，pH6.8～6.9（微黃）。121℃滅菌20min。

試劑：30%的尿素，用乙醚消毒。待培養基冷至55℃時將無菌尿素加入，使尿素終濃度為2%。

1.4.4 脂酶

培養基：蛋白胨1g，NaCl 5g，CaCl2 ?7H2O 0.1g，瓊脂9g，蒸餾水1000ml，pH7.4，于121℃滅菌20min。

底物：吐溫-20、吐溫-40、吐溫-80分別于121℃滅菌20min。

1.4.5 蛋白酶

培養基：蛋白胨5g，葡萄糖20g，明膠200g，蒸餾水1000ml。

1.4.6 淀粉酶

淀粉水解培養基：可溶性淀粉10g，K2HPO4 0.3g，MgCO3 1g，NaCl 0.5g，KNO3 1g瓊脂粉20g；蒸餾水1000ml；pH7.2～7.4。

1.4.7 纖維素酶

纖維素水解培養基（pH7.2）：MgSO4 0.5g，NaCl 0.5g， K2HPO4 0.5g， KNO3 1g；蒸餾水1000ml，濾紙條。

2 結果

2.1 代謝產物測定結果

01、16 兩株菌產生硫化氫，所有菌株MR實驗皆為陰性。

2.2 功能酶產生菌篩選結果

3 結論

本研究對祁連山地區8種藥用植物根際土壤中分離到的18株形態各異的放線菌做了代謝產物測定和功能酶菌株篩選，檢測結果發現18株放線菌中有10株放線菌產淀粉酶，14株產蛋白酶，14株產脲酶，18株產過氧化氫酶，4株產聚氧乙烯山梨酸醇單月桂酸酯酶，8株產聚氧乙烯山梨酸醇單油酸酯酶，15株產聚氧乙烯山梨酸醇脂肪酸酯酶，0株產色氨酸酶，0株產纖維素酶。其中菌株QL15除不產纖維素酶和色氨酸酶外，同時產其他7種酶。有兩株菌產H2S，18株放線菌在糖代謝過程中均無有機酸產生。

項目來源：西北民族大學2016年本科生科研創新項目，項目編號：UPIP16222。

參考文獻

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篇7

忽視苗床土壤的消毒。有的菜農以為早春氣溫低，忽視苗床土壤的消毒處理，結果常會出現菜苗出苗后感染病害，造成生長不良或死苗現象，有的甚至全軍覆沒。正確的方法是應選擇經過消毒滅菌后的無病苗床。為此，苗床宜選擇背風向陽、地勢高燥的地方；床土最好選擇使用比較肥沃的土壤，連續4～5年未種過茄果類、瓜類及十字花科蔬菜作物的大田土壤，土質以砂壤為好，并且要注意選擇13～17厘米以內的表層土，忌用園土作苗床土；為防止土壤帶菌傳病，一定要先對床土進行消毒處理。常用的消毒方法有：①多菌靈滅菌。每1000克床土用50%多菌靈可濕性粉劑25～30克配制成水溶液，噴灑在床土上，拌勻后用塑料薄膜嚴密覆蓋，一般經2～3天即可殺死土壤中枯萎病等多種病原菌。②福爾馬林滅菌。先將福爾馬林、水、腐土按1：100：4000～5000的比例噴拌均勻，然后堆起，上面覆蓋塑料薄膜，悶2～3天后再將薄膜揭開，使藥劑散發。這樣經1～2周即可使用。③蒸汽消毒。有條件的可采用蒸汽消毒，對苗床滅菌效果很好。即將蒸汽通入埋在苗床中的管道中，使30厘米深的土壤溫度保持在80℃，處理30分鐘。處理時土表要覆蓋嚴密，四周壓實，防止蒸汽漏跑，此方式對各種土傳病害，特別是青枯病的效果好。另外，為防止種子帶菌傳病，可用50%多菌靈或50%福美雙可濕性粉劑拌種，用藥量為種子量的0.3%。

苗床使用未經腐熟的有機肥。施用未經腐熟的有機肥料，易發生燒根、燒苗現象。菜苗燒根后，葉片邊緣發黃，葉片皺縮，如果到中后期出現燒根、燒苗現象，常給菜苗造成難以逆轉的損失，嚴重影響適期移植菜苗，延誤生產季節。一旦產生這種情況，可在廂內灌水，降低肥料濃度，同時加大通風排濕。另外，早春育苗在管理過程中還容易出現漚根現象，這是因為溫度低、濕度大時造成根系損傷，使菜苗葉片萎蔫發黃，菜苗停止生長，遇上這種情況，要采取措施，如提高苗床濕度，減少澆水次數。及時對苗床中耕松土，通風降低濕度，在配置苗床時，要施用充分腐熟的有機肥料，這種肥料施入苗床后，能增大土壤的保溫性能和保墑能力，有利于秧苗健壯生長。

催芽的時間不夠或根本不催芽。如果不催芽或催芽時間不夠，種子在早春低溫、高濕的苗床土壤里存放時間過長，極易導致爛種、爛芽、爛根，使種子出苗的時間延遲，或出苗的量減少或根本不出苗。防止的辦法是，蔬菜種子在播前需用55℃溫水浸種15分鐘，不斷攪拌，至水溫降低到30℃左右為宜，在室溫下浸種、催芽。不同蔬菜浸種、催芽的時間有所不同，在適宜的條件下，黃瓜需36～48小時，白菜及甘藍36小時左右，茄子6～7天，辣椒5～6天，番茄2～4天，西葫蘆6～8天。催芽時，十字花科蔬菜（如甘藍、白菜、蘿卜等）種子小，以胚根突破種皮為宜；茄果類蔬菜（如茄子、辣椒、番茄等）以不超過種子長度為宜；瓜類（如黃瓜、苦瓜、冬瓜等）種子可催短芽，也可催長芽1～2厘米即可。

苗床溫度不夠，覆土過少或過厚。保持土壤濕潤，出苗后要及時揭掉覆蓋地膜，防止菜苗徒長和陽光灼傷幼苗。一般蔬菜種子發芽的最低溫度為11～20℃，葉菜類為0～4℃。達不到這個要求會影響出苗進程，導致爛種爛芽爛根。因此育苗最好在保溫條件好的溫室里進行。沒有溫室的可在大棚、中棚、陽廂里采用多層覆蓋。有條件的地方可在苗床下鋪設地熱線以提高地溫，一般白天加熱，晚上斷電。床土干、覆土過薄時，容易出現“戴帽苗”，即子葉出土時種皮不張開或張開不完全，像一頂帽子戴在子葉頂端，它不但影響子葉的正常發育，而且影響子葉的光合作用，導致徒長。覆土過厚，幼苗出來比較晚，容易形成小老苗、老壯苗。苗床底水要澆足，覆土厚度要適當，一般小粒種子覆土1～1.5厘米，中粒種子覆土1.5～2厘米，大粒種子覆土3～4厘米，播種至出苗前，床面覆細土。

苗床管理沒跟上。播種前澆透底墑水，撒種均勻，見露籽再撒些藥土，然后覆蓋稻草保濕促全苗，最后蓋上薄膜悶幾天，直至秧苗“露芽”；播種后、出苗前，保持土壤濕潤；溫度控制在20～35℃，空氣相對濕度保持在85%～90%；出苗時出現“戴帽”苗，可先噴水，待種殼吸濕后，用毛刷輕輕將種殼刷掉；整個苗床都適當控制澆水，土壤表土發白干燥時，可一次性澆透水；平時盡量減少澆水次數，以免秧苗徒長；合理增施磷肥，提高秧苗的抗寒能力；注意通風換氣，防止苗床內空氣濕度過大和有害氣體危害蔬菜秧苗；在保證苗床溫度的情況下，盡量增加光照，使秧苗生長健壯；適時早分苗，防止分苗過晚造成傷根死苗；對老化苗，每平方米苗床噴施0.2%噴施寶或300～500倍磷酸二氫鉀液，以刺激秧苗生長。苗期易發生立枯病、猝倒病等。發病初期，先拔除病苗，及時噴藥保護，防止蔓延。常用的藥劑有：銅銨合劑（用硫酸銅2份，加碳酸銨11份，磨細混勻，密封24小時后即成）400～500倍液、50%多菌靈600倍液、75%百菌清或70%敵克松可濕性粉劑600～800倍液以及濃度為0.1%～0.2%的硫酸銅溶液等。施藥后為防止苗床濕度過大，可撒草木灰或細干土吸濕。

篇8

浙江云和縣地處浙西南山區，近年來，隨著“菜藍子工程”的實施，高山蔬菜發展迅速，尤其是大棚茄子在海拔700 m的高山小盆地發展尤為迅速。據統計，2009-2011年全縣在黃源、沙鋪、大灣、云豐等高山鄉已發展大棚茄子300 hm2，取得了較高的經濟效益。目前，茄子種植已成為云和縣高山蔬菜的主栽品種和農民致富的一條新途徑。但隨著高山大棚茄子種植面積不斷擴大，茄子綿疫病也逐年加重，已成為影響大棚茄子產量的主要病害之一。大棚茄子綿疫病為害一般減產10％，嚴重的減產30％。為此，必須加強對綿疫病的綜合防治，以獲得優質、高產、高效?，F將云和縣高山大棚茄子綿疫病的綜合防治技術介紹如下。

1 發病癥狀

茄子綿疫病是由真菌疫霉菌侵染所致，病菌以卵孢子在土壤中、病株殘體里越冬，病菌卵孢子隨水附在果實表皮萌發后侵入果實；病果上的孢子囊及游動孢子通過水流傳播進行再次侵染。茄子綿疫病為害癥狀，初期在果實表面產生水浸狀圓形病斑，隨后病情加重逐漸擴大蔓延至整個果實，發病部位黃褐色或暗褐色，高濕條件下轉為白色綿狀菌絲體，果實變黑腐爛落果。嫩莖發病變褐縊縮腐爛，葉片病斑褐色，水漬狀，有明顯的輪紋，花為褐色水漬狀腐爛。

2 發病原因

茄子綿疫病發病、流行與溫、濕度有直接關系，特別是高溫、高濕氣候條件有利于病害發生和發展。一般氣溫在28～32℃，相對濕度在85％以上的條件下有利于綿疫病病害大發生。種植易感病品種、地勢低、排水不良、化肥使用過多、種植密度大、植株郁閉、結果期連續陰雨，均易發病。如未及時防治將造成病情蔓延，嚴重減產。

3 綜合防治方法

3.1 選用抗病良種

選擇耐濕、耐高溫、抗病、高產、熟期中等的品種，如杭豐一號、杭茄1號、引茄1號等。

3.2 實行輪作

避免連作地種植茄子，可采用水旱輪作或茄子與葉菜類或豆科類蔬菜輪作。

3.3 土壤消毒

育苗前苗床用25％甲霜靈可濕性粉劑消毒，茄苗移栽前大棚畦面用25％甲霜靈可濕性粉劑800倍液噴施或用75％百菌清600倍液消毒，均可達到一定的滅菌效果。

3.4 加強大棚管理

①科學施肥 移栽前土壤施足充分滅菌的廄肥，配施一定的磷鉀肥，深翻作成弓形高畦面。移植后施肥采用“控氮肥增磷、鉀肥”的方法，促進植株健壯生長。

②科學管理水 大棚內水分管理，要做到既保證茄株生長所需又使土壤不積水，保持土壤干濕交替，促進根系生長，提高抗病能力。

③及時通風降濕 茄株開花結果后要及時做好棚內通風降濕，降低病害發生。

④科學防蟲治病 防蟲治病要做到勤檢查早防治，把病蟲害消滅在萌芽中。

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[關鍵詞] 食用菌 高產 栽培技術

[中圖分類號] S646 [文獻標識碼] B [文章編號] 1003-1650 （2013）01-0114-01

食用菌生產的成敗、產量高低、質量的優劣，直接取決于生產制作過程中的每個技術環節。為提高食用菌成品率，降低成本，獲得較高質量和產量的菇體，現將食用菌栽培技術總結如下。

一、培養料的選擇

培養料以樺木料的木屑為最好，配以棉子殼、黃豆桿、玉米心等，輔以麥麩皮、米糠，并添加微量元素。原材料新鮮、干燥、無霉爛變質、結塊、蟲蛀是成功的基礎。

二、培養料的配制

培養料的配制先按比例將所需原料（木屑、麥夫皮、石膏）干料充分混合拌均，添加的微量元素倒入水中化開后加入料中，反復攪拌多次，使料干濕均勻，成團料要打散開。靈活掌握培養料的含水量，根據木屑質地軟硬、粗細、含水量、空氣濕度的大小等配比的含水量予以相應調整。培養料的含水量直接影響菌絲的正常生長，含水量過低會嚴重影響出菇產量。

含水量過高會使下面菌絲體缺氧而停止吃料，造成原料的浪費，同時還會導致雜菌污染。一般含水量達55～60%即可。

三、培養料的消毒

配制好的培養料最好在6～8h內裝袋完成。裝好的菌袋要及時進行滅菌，切忌過夜。裝好的料放入滅菌鍋內，盡快猛火升溫到100℃，打開冷氣閥排放冷氣。待溫度降至0℃關閉冷氣閥，重新升溫到100℃后保持10～12h，否則達不到滅菌效果。滅菌時要做到猛火升溫、穩火保溫，經常檢查鍋中溫度，以防漏氣、跑氣。滅菌徹底是提高成品率、降低成本、提高效益的關鍵環節。

四、優質菌種的選擇及接種

選擇適宜本地生長的優質、高產、高抗的優良菌株，嚴禁使用有雜質菌污染和蟲害跡象以及退化、老化的劣質菌種。嚴格接種程序，確保接種成功率。接種室要求干凈、干燥、密閉、遠離污染源。滅菌好的菌袋及時放入接種室內，進行室內藥物消毒，3～4h后待料溫冷卻至30℃以下即可接種。接種工具、接種人員的雙手要用75%酒精消毒。接種要迅速準確，接種量不宜太小。

五、發菌培養

接種后的菌袋放入培養室內，調控好環境溫度，培養室要求干凈、通氣、干燥，室溫宜控制在20～25℃左右，濕度70%左右（視品種而定）。當菌絲長到5～10cm左右即可翻袋檢查，及時淘汰污染袋。食用菌要靠基質內有機物的氧化來提供其生長發育所需的能量，基質內缺氧會使菌絲體的呼吸作用受到抑制，造成菌絲體生長緩慢、衰弱，甚至停止生長，嚴重的會因窒息而死亡，因此翻動菌袋位置以利于換氣通風是必不可少的環節。當菌絲長到1/2時，再翻袋檢查1次。整個發菌培養階段不需要光照。

六、出菇棚場地的選擇及建立

出菇棚要選擇在近河流，空氣流暢，四周寬闊，遠離禽畜養殖場、釀造廠、生活區、醫院、垃圾場的場地。場地要采取翻土、曬土、灌水等措施取代農藥消毒。水源水質要求選清潔的井水、自來水，遠離污水源。菇棚要求棚體牢固、地勢較高、排水暢通，棚內不積水，覆蓋塑料薄膜和遮陽網，防日曬雨淋。覆蓋物要厚一點，利于保溫，四周用草簾圍住，留通風孔。

七、出菇階段的管理

菌袋經數月的營養生長后，轉入生殖生長，當菌絲扭結、瘤狀突起，達到生理成熟時，就要搬出發菌室進入出菇棚，由于受環境條件、栽培時間、發菌溫度、品種等不同因素的影響，出菇時間也不相同，氣溫要在適宜的生長溫度范圍內才能出菇。入棚時間一般選擇在晴天早晚進行，中午溫度高不宜進行入棚，高溫易使菌皮損傷，會推遲或減少出菇；切不可雨天入棚，雨淋會使菌袋表層污染而爛袋。菌袋上架每層并列排放，袋與袋之間間隔5～6cm，以利于呼吸和散熱，要營造出菇的環境條件才能保證順利出菇。

首先是空氣濕度?？諝鉂穸仁亲訉嶓w生長發育階段主要的影響因素之一，空氣濕度過低，會加速子實體表面的水分蒸發，導致基質內水分的大量流失而影響產量；空氣濕度過高，會使子實體表面水分停止蒸發，使營養運輸受阻，同時呼吸作用受到抑制，造成子實體停止生長，長時期空氣濕度過高，還會造成子實體從空氣中倒吸水分，形成水浸樣腐爛，招致線蟲及細菌的滋生和大范圍傳染。

其次是通風。子實體發育需要充足的氧氣，和人類的呼吸一樣，食用菌的呼吸作用也是消耗空氣中的氧氣，放出二氧化碳。適量的二氧化碳濃度對某些種類的菌絲體生長有促進作用，但是過多二氧化碳的積累會抑制菌絲體生長，甚至完全停止生長，高濃度二氧化碳長時間作用還會導致菌絲體窒息死亡。因此，需要經常對菇房空間進行通風換氣，排除二氧化碳，保持空氣新鮮。

最后是光照。大部分食用菌品種的出菇階段需要散射光刺激，少部分品種需要有較強的散射光，才能使子實體原基分化，極少部分品種在完全黑暗的環境中也能形成子實體。子實體的顏色也與光線強度有密切關系，一般來說，光線強，子實體顏色較深；光線弱，子實體顏色較淺。這就需要根據品種的不同采取不同的光線調控方法，可以通過掛遮陽網和拉、放草簾來調節溫室內的光照。

八、食用菌生產中的有害生物及其防治

1.木霉

木霉又稱為綠霉菌，廣泛分布于各種植物殘體、土壤和空氣中。木霉靠孢子傳播，常常借助氣流、水滴、昆蟲、原料、工具及操作人員的手、衣服等為媒介，侵入培養基內，一旦條件適宜就萌發繁殖為害。當生產環境不清潔、培養料滅菌不徹底、接種操作不嚴格，且處于高溫高濕條件時，就給木霉侵染造成良好機會，尤其是多年的菌場和老菇房，常是木霉猖獗為害的場所。木霉適應性強，繁殖速度快，能分泌毒素。木霉是香菇生產的大敵，它抑制香菇菌絲生長。唯一控制的辦法是創造適合香菇菌絲生長而不利于木霉繁殖的生態環境。一旦發生木霉為害，要立即通風降低濕度，以抑制木霉菌的擴展。處于發菌階段的培養料感病后，可采用pH值為10的石灰水或石灰粉進行防治。

2.鏈孢霉

鏈孢霉生長初期呈絨毛狀，白色或灰色，生長后期呈粉紅色、黃色。大量分生孢子堆集成團時，外觀與猴頭菌子實體相似。鏈孢霉菌絲頑強有力，有快速繁殖的特有機食用菌栽培技術性，一旦大發生便是滅頂之災，其后果是菌種、培養袋或培養塊成批報廢。防治鏈孢霉，溫度控制在20℃以下，這樣鏈孢霉生長緩慢，可減少污染。

3.毛霉

毛霉又叫黑霉或長毛霉，菌絲初期白色，后灰白色至黑色，說明孢子囊大量成熟。該菌在土壤、糞便、禾草及空氣中到處存在。在溫度較高、濕度較大、通風不良的條件下發生率高。發生的主要原因是基質中使用了霉變的原料，接種環境含毛霉孢子多，在悶濕環境中進行菌絲培養等。防治辦法同木霉。

4.螨類

螨類包括紅蜘蛛、菌虱。其發生環境主要潛藏在廄肥、飼料和培養料內。雞窩畜舍、谷物倉庫或環境條件差、腐殖質豐富的場所，往往也有大量的螨類存在。培養基發生螨害后，接種部位的菌種塊不萌發或萌發后菌絲外觀稀疏暗淡，并逐漸萎縮，嚴重時培養料中的菌絲被全部吃光，造成栽培失敗。

參考文獻

[1]成群.食用菌高產栽培技術[J].現代農業科技，2009，（20）.

篇10

一、從微生物學教學目的來分析課程改革的必要性

職業學校藥學類專業學習微生物這門課程，總體有這樣幾個目標：1.藥品生產各環節的消毒滅菌處理工作。2.GMP車間在環境和工作人員方面對微生物的要求。3.環境中微生物的檢查工作。4.一般微生物的培養，接種技術。5.顯微鏡觀察微生物，微生物的染色技術。6.一般微生物的鑒別方法。7.對于生物制藥專業來說，為下一步學習發酵技術等專業課打下基礎；對藥物分析專業學生來說，為下一步學習藥品生物檢定技術打下基礎。

總結這些生產中的實際要求，我們得出結論：微生物學的教學應該以實際操作技術為主要與重點內容。因此筆者對微生物學進行分析總結，將上課地點搬進了實驗室，將實驗歸納總結為一個個的項目，把理論知識也附著在實驗項目之中。

二、將各個實驗進行統籌安排的必要性

在實驗的時間先后上，如果沒有統籌的安排，將會有很大的材料浪費和人力的浪費。因此，我們將所有的實驗進行統籌規劃，將前一個實驗制備的產品用于下一個實驗，這樣既有連貫性，同時還有很大的節省。

三、課程改革內容

將整個教材分為以下幾個試驗模塊：1.培養基的制備與滅菌；2.微生物的接種與培養；3.微生物菌苔菌落的觀察；4.微生物的染色技術與顯微鏡的使用方法；5.細菌大小與數目的測定；6.微生物在自然界的分布；7.體外抑菌試驗；8.抗生素的效價測定。

四、具體模塊分析

(一)培養基的制備與滅菌。本模塊任務：1.配置培養基（通過實驗操作掌握固體、液體、半固體培養基配置方法，同時掌握微生物生長必需的條件），2.將培養基進行包扎滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法，干熱滅菌法原理及操作方法，同時掌握徹底滅菌（包括芽孢）的方法及意義）。通過這個模塊的學習，學生不僅掌握了基本的配制、分裝、包扎、滅菌技術，還為下面的所有實驗準備了試管裝的斜面培養基和三角瓶裝固體，液體培養基。

（二）微生物的接種與培養。本模塊任務：1.試管的斜面接種，2.培養皿的分離劃線培養，3.三角瓶的液體接種培養。通過這個模塊的學習操作，學生能夠掌握的操作技術：使用酒精燈的無菌操作技術，固體、液體培養基的接種技術，如何分離得到純種細菌的技術；學習到的理論知識：菌落及菌苔的含義，微生物的培養方法；同時為下一步的實驗準備了大量的微生物培養物。

（三）微生物菌苔菌落的觀察。本模塊任務：觀察各類微生物的菌落菌苔特點。本實驗直接取上次實驗培養的微生物培養物進行觀察，從而概括得出細菌、放線菌、真菌三大類微生物菌落各自的特點作為鑒別的依據。

（四）微生物的染色技術及顯微鏡的使用方法。本模塊任務：1.將微生物進行單染色、革蘭氏染色，2.光學顯微鏡觀察微生物形態。為了進行這兩項操作，學生會主動學習染色原理，顯微鏡操作原理，油鏡使用原理，然后進行實際操作。本模塊使用模塊二的培養物來進行染色觀察。

（五）細菌大小與數目的測定。本模塊任務：使用血細胞計數板和測微尺進行微生物數目和大小的測定。

（六）微生物在自然界的分布。本模塊任務：檢測微生物在土壤、水、空氣、人體表面的分布情況。本實驗使用模塊――配制的固體培養基倒平板進行檢測。

（七）體外抑菌實驗。本模塊任務：使用瓊脂擴散法進行檢測幾種化學消毒劑的抑菌實驗。本實驗使用模塊――實驗中配制的培養基。

（八）抗生素的效價測定：本模塊的任務：使用二劑量法測定一種抗生素的效價。本實驗使用模塊――實驗中配制的培養基。

五、考試考核方法

根據教學過程的模塊化改革，考試考核方式也隨之進行改革，由原來傳統的一張理論試卷定分數的方式，改為以實驗為主要考核方式。將模塊的結果進行考評打分，在最終成績中占重要比例，然后學習結束時的考核分兩部分，一是實驗室內現場操作考核：從八個教學模塊中選取一些重要的操作技術，比如染色技術、滅菌鍋的使用技術、培養基配制方法等等，學生抽題，抽到后現場進行操作考核；二是抽取兩個理論題進行回答。實踐證明，這種考核方式更與實踐相接近，更具有實際意義。

六、總結

實踐證明，以項目實驗為主體，理論輔助在其中，學生能夠很好地掌握實踐技術操作，能夠較好地適應職業教育的要求，而且能夠將單個獨立的項目實驗聯系起來，不僅教學效果好，還節約了很多實驗材料。

參考文獻：