急性紅白血病研究論文

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【摘要】本研究探討急性紅白血病（AMLM6）的生物學特征與臨床療效的關系。對29例M6初治患者細胞形態學、免疫表型和染色體核型進行回顧性分析并觀察臨床化療效果，同時隨機抽取30例AMLM2（急性粒細胞白血病部分分化型）作為對照。結果表明：M6患者的外周血中均可見幼稚細胞（2％-10％）及有核紅細胞，骨髓穿刺細胞學檢查顯示19例伴有多系細胞發育異常，累及二系細胞或三系細胞。流式細胞術檢測表明，M6GlyA（血型糖蛋白A）的表達率高達（66.67±23.86）％，明顯高于其在M1，M2，M3，M4和M5中的陽性表達率(P<0.01)。M6高表達HLADR［（60.00±24.79）%］,CD34［（40.00±24.79）%］，CD38［（33.33±23.86）%］，髓系抗原主要表達CD13［（66.67±23.86）%］，MPO［（33.33±23.86）%］，CD33［（46.67±25.25）%］,CD15［（33.33±23.86）%］,CD117［（46.67±25.25）%］。部分病例伴有淋系抗原的表達,如CD3、CD4、CD19，其中CD4的表達高達26.67％。M6中CD38、CD33、CD15、MPO的陽性表達率低于M2患者。9例M6患者染色體的檢查顯示，4例存在核型異常，異常率達44.44％，其中復雜核型異常1例。M6患者化療完全緩解率為29.41％，低于M2患者化療完全緩解率（68.18％，P<0.01)。結論：GlyA是鑒別M6與其他亞型急性髓性白血病的一個重要標志，M6有自己獨特的生物學表型，其化療效果不佳可能與其生物學特征有關。

【關鍵詞】急性紅白血病AMLM6免疫表型核型

BiologicalCharacteristicsandTherapeuticEffectofAcuteErythoLeukemia

AbstractTheobjectiveofthisstudywastoinvestigatethebiologicalcharacteristicsandthetherapeuticeffectinpatientswithacuteerythroleukemia(AMLM6).Morphology,immunophenotypeandcytogeneticswereretrospectivelyanalyzedin29patientswithAMLM6andwerecomparedwith30AMLM2patients.Theresultsshowedthattherewereimmaturecells(2%-10%)anderythroblast,andpunctureofbonemarrowrevealedmyelodysplasticfeaturesinvolvingmultiplehemopoieticlineagesinbonemarrowof19patients.FlowcytometryindicatedthattheexpressionfrequencyofGlyAinM6significantlyincreased(66.67±23.86)%andhigherthanthatinM1,M2,M3,M4andM5(P<0.01).TheexpressionfrequenciesofHLADR(60.00±24.79％),CD34(40.00±24.79％),CD38(33.33±23.86％)inM6werehigh,andthefrequenciesofmyeloidimmunophenotypesCD13(66.67±23.86％),MPO(33.33±23.86％),CD33(46.67±25.25％),CD15(33.33±23.86％),CD117(46.67±25.25％)werecommonaswellinM6.LymphocyticimmunophenotypesCD3,CD4,CD19weredetectedinpartofpatientswithM6,andtheexpressionfrequenciesofCD4was26.67%.TheexpressionfrequencesofCD38,CD33,CD15,MPOinM6werelesscommonthanthatinM2(P<0.01).In4outof9M6patientsthechromosomalabnormatility(44.44%)wasseen,inoneofwhichcomplexchromosomeabnormalitywasfound.ThecompleteremmisionrateofM6patientswas29.41%,andlowerthanthatofM2patients(68.18%,P<0.01).ItisconcludedthatGlyAisaspecificimmunophenotypeinM6,whichcanhelptodistinguishM6fromothertypesofacutemyeloidleukemia.Poorclinicaltherapeuticresponsemaycorrelatedwithitsbiologicalcharacteristics.

Keywordsacuteerythroleukemia,AMLM6,immunophenotype,karyotype

JExpHematol2007;15(3):466-469

M6是一種異質性血液系統惡性腫瘤，可同時累及多個細胞系，臨床預后較差。由于該亞型急性白血病相對少見，對其生物學表型了解不多，為進一步探討M6的生物學特征與化療效果的關系，我們對29例M6初治病例的臨床資料進行了分析，現報告如下。

材料和方法

病例選擇

29例M6患者均為我院1995-2005年初治住院病人，符合2001年WHO造血組織腫瘤分類診斷標準，其中男19例，女10例，年齡7-68歲，中位年齡43歲。隨機抽取我院1995-2005年進行免疫學分型的初治M2住院病例30例作為對照。為進一步比較GlyA抗原的變化，另選擇M120例，M315例，M4和M5共15例進行免疫分型作為對照。

中國實驗血液學雜志JExpHematol2007;15(3)急性紅白血病的生物學特征與臨床療效研究形態學檢查

骨髓及外周血片經瑞氏染色分類，同時進行細胞化學染色，包括髓過氧化物酶，非特異性酯酶、糖原染色的細胞學檢查。

免疫學分型

治療前采取患者骨髓，肝素抗凝，采用流式細胞儀檢測。所用的單克隆抗體包括HLADR、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD38、CD56、CD71、CD117、MPO、GlyA、cCD79a。陽性病例判斷標準依據EGIL標準：淋系抗原陽性細胞≥20％，髓系抗原陽性細胞≥20％，MPO≥10％。

染色體核型分析

治療前采取骨髓，直接法或24小時培養法處理標本，用G帶或R帶法顯帶，根據國際人類染色體（ISCN1995）命名核型。

治療方法

M6病例及對照組M2病例多采用標準D(H)A方案化療，僅2例M6采用CAG方案（D：柔紅霉素，H：高三尖杉酯堿，C：阿克拉霉素，A：阿糖胞苷，G：粒細胞刺激因子）。

療效判斷標準

參照參考文獻［1］判斷完全緩解（CR）,未緩解（NR）。

統計學方法

F檢驗，抗原陽性率估計95％的可信區間。

結果

外周血涂片

29例M6患者外周血片中均可見外周血幼稚細胞，幼稚細胞所占比例不一，原始粒細胞＋早幼粒細胞為2％-10％，但均可見有核紅細胞。

骨髓穿刺細胞學檢查

除1例骨髓增生減低外，其余28例增生明顯活躍或極度活躍。所有病例非紅系原始細胞記數（NEC）>20％，紅系細胞記數>50％，19例存在多系發育異常，紅系以細胞巨幼變為主，巨核系以淋巴樣小巨核細胞為主，粒系可見PelgerHeüt畸形及Auer小體，幼紅細胞PAS呈＋—＋＋＋。

免疫學分型

本組M6病例GlyA的陽性表達率為（66.67±23.86）%，明顯高于其在M2、M1、M3、M4及M5中的陽性表達率（P<0.01）。GlyA在M1、M2、M3、M4和M5、M6中的陽性表達率具體見表1。

本組M6病例除表達上述抗原外，髓系抗原主要表達CD13、CD33、CD117、CD15、MPO，其中CD13、CD117的陽性表達率在M6和M2之間差異沒有統計學意義（P>0.05）。CD33、CD15、MPO在M6中的陽性表達率低于M2（P<0.01），以上抗原在M6與M2中的陽性表達率具體見表2。本組M6病例不伴CD14表達。部分M6病例伴有淋系抗原的表達，如CD3、CD4、CD7、CD19，其中CD4陽性表達率較高達26.67％,一般僅伴有單一淋系抗原表達。M6與M2免疫表型比較具體見表2。

核型

本組29例M6病例中進行染色體核型分析9例，4例（44.44％）患者具有染色體核型異常，染色體核型異常分別為46,xy,cht(6)40%；46,xy,c(87%),mar(13%)；46～47,xx,21［3］20%；49,xy,dup(1)(q3241),4,5,8,其中1例為復雜染色體核型異常（i>3處染色體數量異常和／或結構異常）(cht:染色單體；mar:母源；dup:重復)。

療效

本組M6病例化療21例，其中17例的療效可以進行判斷。化療完全緩解(CR)5例，CR率為29.41％；對照組M2病例中化療26例，其中22例的療效可以判斷，化療完全緩解(CR)15例，CR率為68.18％。兩者相比較，M6化療CR率低于M2化療CR率(P<0.01)。對伴有多系發育異常的的M6病例化療，結果無1例緩解。

討論

M6作為造血系統的腫瘤性疾?。?］，除存在原始細胞數量異常，骨髓細胞學檢查往往存在多系發育異常，累及二系或三系，形態學表現復雜，給M6的診斷帶來一定的困難，易與MDS混淆。此時原始細胞計數成為辨別的要點，有核紅細胞PAS＋—＋＋＋，特別是強陽性也可以輔助診斷M6，而M6化療效果不佳可能也與這個特點有關。

AML由于細胞發生克隆增殖的階段不同,存在某些系列多樣性和異質性，單一依據細胞形態學及組織化學染色診斷急性白血病已顯得不足。隨著MICM分型的提出，用單克隆抗體分析白血病細胞表面的免疫標志,從而進一步明確白血病細胞的起源及分化程度,為臨床診斷及治療，判斷預后提供了重要的依據。本研究中M6的GlyA的陽性表達率明顯高于M2（P<0.01）。Kemmitz等［4］用40種單克隆抗體分析了136例AML病例的免疫表型，5例診斷為M6的病例GlyA均為陽性，而其他亞型表達均為陰性。SanMiguel等［5］回顧性研究了98例AML病例，其中5例M6病例4例GlyA陽性表達，其他病例表達陰性。然而，以上研究中的M6病例數較少，而本研究中M6病例數達29例，進一步證明M6特征性表達GlyA是鑒別M6與髓性白血病其他亞型的一個重要指標［6］。

本研究中M6除特征性表達GlyA外，HLADR、CD34、CD38陽性表達率也較高，部分病例伴有淋系抗原的表達,如CD3、CD4、CD19，其中CD4的表達高達26.67％，且一般僅伴有單一淋系抗原表達。通過分析這些抗原的表達，可以探知M6的起源。過去很多學者認為CD34是造血干細胞的標志，認為白血病起源于造血干細胞；可是最新的研究表明，并非所有CD34陽性的細胞均是造血干細胞，相反其中98％以上是早期和晚期的造血祖細胞，所以CD34是造血干/祖細胞的標志［7］。造血干細胞白血病具有髓淋兩系同時或先后受累，或白血病細胞表型跨越髓淋兩系的特點，此類白血病在臨床上極為少見，而大多數的白血病僅累及髓系或淋巴系或某一個細胞系，甚至某一系的某一個分化階段。因此，M6并非傳統觀點認為的起源于造血干細胞的白血病，而是惡變擴增的粒紅祖細胞階段［3,7］。本組M6病例中髓系抗原的陽性率高低依次為CD13>CD33，CD117>CD15，MPO>CD11b，CD71，這與文獻報道基本一致［8,9］。

M6患者的化療療效差，在本組病例中化療完全緩解率為29.41％，較文獻報道M6經強烈化療CR率40％-62％要低，這可能與隨訪丟失及有些病例中斷治療有關［3,8］。本研究表明，M6化療完全緩解率明顯低于M2，分析其原因可能與M6自身的免疫表型有關。本組M6病例中CD38，CD33，CD15的陽性表達率均低于M2,而已有文獻報道上述抗原提示白血病細胞分化良好及白血病預后良好［9,10］。CD34是造血干/祖細胞的抗原標志，很多學者認為它與AML的低緩解率和短生存期有關［6，8］，本研究也表明，伴CD34陽性表達M6病例化療緩解率明顯低于CD34陰性表達者［6］。本研究表明，伴CD11b陽性表達M6病例的化療完全緩解率明顯高于其陰性者，而伴HLADR、CD13、CD33、CD15、CD117陽性表達的M6病例無1例緩解。

長期的臨床觀察證明，染色體異常對AML的預后有獨立的預測價值。本組病例中4例核型異常，其中1例為復雜核型異常，結果發現化療對核型異常者均無效。M6核型異常易見，化療對核型正常者的效果優于異常者。M6的復雜核型異常常見于5、7、8號染色體，多倍體增加也多見［11］，本組研究曾觀察到以上特點。M6患者的化療效果差，也可能還與原發耐藥有關［12,13］，有關此問題尚需要進一步的研究。

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