藥用石斛多糖的含有量測評探究論文

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【摘要】目的測定不同種石斛及金釵石斛、馬鞭石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛的不同藥用部位中多糖的含量。方法采用紫外-可見分光光度法。結果不同種石斛莖中多糖含量為：球花石斛18.96%，馬鞭石斛24.89%，金釵石斛20.49%，報春石斛15.83%，腫節石斛8.27%，疊鞘石斛16.32%，鼓槌石斛15.33%，美花石斛28.28%，兜唇石斛9.26%；4種石斛不同藥用部位多糖的含量：金釵石斛根15.36%，莖20.49%，葉22.30%；馬鞭石斛根17.56%，莖24.89%，葉20.88%；疊鞘石斛根9.48%，莖16.32%，葉17.42%；鼓槌石斛根10.06%，莖15.33%，葉19.81%。結論該實驗方法簡便、快速、準確。各種石斛及其根莖葉中多糖含量均比較高，從資源的綜合和可持續利用的角度考慮，建議可以全草入藥；美花石斛、球花石斛、報春石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛、腫節石斛莖在進行藥效研究的提前下，確認是否可以替代當前《中國藥典》品種入藥。

【關鍵詞】石斛多糖紫外-可見分光光度法

石斛屬Dendrobium為蘭科最大的屬之一，全世界共有一千五百多種，廣泛分布于亞洲、歐洲及大洋洲等熱帶及亞熱帶地區。我國約有76種，主要分布于西南、華東及華南地區。石斛首先記載于《神農本草經》，并列為上品?！侗静菥V目》言：“俗方最以補虛，主治傷中，除痹下氣，補五臟虛勞羸瘦，強陰益精；厚腸胃，補內絕不足，逐皮膚邪熱癢氣，治男子腰腳軟弱，健陽，補腎益力，壯筋骨，暖水臟，輕身延年等”在我國傳統醫學中經歷了2000年以上的應用歷史。《中國藥典》2005年版收載金釵石斛DendrobiumnobileLindl、鐵皮石斛DendrobiumcandidumWall.ex.Lindl、馬鞭石斛DendrobiumfimbriatumHook。石斛具有滋陰清熱、益胃生津和潤肺止咳等功效，常用于治療熱病傷津、口干煩渴、病后虛熱等多種病癥。現代藥理研究證明石斛中多糖類成分是石斛具有免疫增強作用和抗腫瘤作用的活性成分。

石斛為我國常用貴重藥材，野生資源匱乏，而種植石斛規模較小，不能滿足臨床和新藥開發的需要；而且民間藥用石斛品種較復雜且規格不統一，它們能否替代藥典品種入藥，是迫切需要解決的問題。因此，本文對9種石斛莖中多糖、4種石斛的不同部位中多糖含量進行了測定，以期能尋找到石斛新的藥用資源和新的藥用部位，為科學、合理和正確使用該類藥材提供實驗數據。

一、材料與儀器

1.1儀器UV一752分光光度計(上海第三分析儀器廠)；SHB-3循環多用真空泵（鄭州杜甫儀器廠）；hh-2數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）；hctp11b5托盤天平（北京醫用天平廠）；正德牌遠紅外可控調溫電爐（成都市聚焱電器廠）；DHG-9240A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司；KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2藥材石斛藥材收集于云南各地、四川夾江縣歇馬鄉及成都五塊石藥材市場，所有藥材均經劉圓教授鑒定。

二、方法與結果

2.1多糖的提取與精制稱取各石斛藥材粉末（過2號篩）100g，精密稱定，分別至圓底燒瓶中，各加入石油醚（60～90℃)400ml，脫脂30min，過濾，通風櫥中揮去溶劑。濾渣以80％乙醇100ml回流提取30min，趁熱過濾。濾渣用80％熱乙醇充分洗滌，再于通風櫥中揮去溶劑。取各殘渣分別再用500ml蒸餾水回流2h，提取3次，趁熱過濾，用熱水洗滌藥渣和燒瓶，合并濾液。濾液濃縮至150ml，加入等容積的sevag試劑(按正丁醇∶氯仿=4∶1配制而成)，分液漏斗萃取。取上層液體，反復操作。紫外分光光度計掃描，無蛋白吸收峰。逐滴加入乙醇(95％)至整個溶液中含醇量達到80％，滴加過程中用磁力攪拌器攪拌，靜置過夜。抽濾，沉淀用無水乙醇反復洗滌，60℃真空干燥，得各石斛精制多糖，封裝備用。

2.2對照品溶液的制備稱取葡萄糖約0.08g于小燒杯中，精密稱定，用蒸餾水溶解后，移至100ml棕色容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻，得對照品溶液。

2.3標準曲線的制備精密取葡萄糖標準液1，1.5，2，2.5，3，3.5ml，分別置50ml棕色容量瓶中，各加蒸餾水至刻度。精密量取上述各濃度的標準溶液0.5ml于10ml棕色容量瓶中，各精密加入5%苯酚溶液1.0ml，搖勻，迅速加入5.0ml濃硫酸，在沸水浴中加熱20min，冷卻至室溫。在波長490nm下測定吸光度，同時做一空白，以標準溶液濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標繪制標準曲線。對所測數據采用回歸法計算出標準曲線的回歸方程為Y=4.9949X－0.0252（r=0.9994），結果表明在0.016～0.294mg/ml之間，葡萄糖濃度與吸光度值具有良好的線性關系。

2.4穩定性實驗取葡萄糖標準液0.5ml，置10ml容量瓶中，按標準曲線制備項下的方法，自“加入5%苯酚溶液1ml”起，依法每隔0.5h測定吸光度值，連續4h，結果吸光度基本無變化，樣品溶液的穩定性良好。

2.5精密度實驗精密量取葡萄糖標準溶液0.5ml，置10ml容量瓶中，按標準曲線制備項下的方法，自“加入5%苯酚溶液1ml”起，依法重復測定吸光度，RSD為1.06%（n=6）。結果表明精密度良好。

2.6加樣回收率實驗分別取相應石斛粉末各0.25g，分別精密加人葡萄糖儲備液適量，按樣品制備和含量測定方法測定，平均回收率98.62％，RSD為1.27％（n=9），符合測定要求。

2.7換算因子的實驗稱取6O℃干燥至恒重的相應石斛多糖各10mg，精密稱定。分別配制成0.1mg／ml溶液。各取0.5ml按標準曲線的制備方法，測定吸收度，另取葡萄糖標準液，同法操作，求出相應石斛中葡萄糖濃度，按下列公式計算換算因素11種石斛多糖換算因子。

f=多糖重量／(多糖液的葡萄糖濃度×多糖的稀釋因素)

2.8不同種、不同藥用部位多糖的含量測定精密稱取60℃恒重的上述石斛莖粉末（過2號篩）各0.5g，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，加入石油醚(60～90℃)5.0ml，脫脂30min，過濾，通風櫥中揮去溶劑。濾渣以80％乙醇100ml回流提取30min，趁熱過濾。濾渣用80％熱乙醇充分洗滌，再于通風櫥中揮去溶劑。取殘渣再用100ml蒸餾水回流2h，提取3次，趁熱過濾，用熱水洗滌藥渣和燒瓶，合并濾液，冷卻后在500ml量瓶中蒸餾水定容。精取各石斛提取液0.5ml，按照標準曲線項下操作，測定吸收度，按下列公式計算樣品中的多糖含量，重復6次，取平均值。結果見表2，3。表2不同種石斛莖中多糖的含量（略）表34種石斛不同部位的多糖含量（略）

多糖含量(％)=C×D×f×V/w

C：樣品溶液中葡萄糖濃度(μg/ml)；D：樣品溶液的稀釋因素；f：換算因素；V：樣品溶液體積(ml)；W：樣品溶液的重量(μg)

三、討論

在所測的樣品中，球花石斛中多糖含量和藥典中所收載石斛品種含量接近，美花石斛中多糖的含量高于金釵石斛和馬鞭石斛，因此從免疫增強作用和抗腫瘤作用的有效成分石斛多糖的角度考慮，在進行藥效研究的前提下，確認美花石斛、球花石斛、報春石斛、疊鞘石斛、鼓槌石斛、腫節石斛莖是否可以替代當前藥典品種入藥。

石斛傳統的入藥部位是莖，但從本實驗結果表明：根和葉的含量比較高，建議全草入藥。由于藥材采集樣品不全的原因，沒有對每一種均進行根、莖、葉多糖含量的測定，實驗正在進行之中。

雖然不同種中石斛莖的多糖含量均較高，但還是有較大差異，提示各藥材的品質有差異。又由于實驗所采集樣品多數為野生隨機采樣，不能準確地確定藥材的生長年限，生態環境也不完全相同，故可考慮規范化種植后再用本方法對上述石斛進行平行比較研究，并得出更為準確、可靠的結論。

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